，可W使用精制的抗原（通过上述方法 等精制的抗原），通过固相法，从隧菌体文库中浓缩表达作为目标的抗体的隧菌体集团。盘 选法中，将固相化抗原和隧菌体文库的反应、清洗（除去没有与固相化抗原结合的隧菌体 文库）、溶出抗原结合隧菌体、通过对大肠杆菌感染的扩增之类步骤重复几次（例如4~5 次）。由此能够浓缩抗原特异性隧菌体（抗体产生隧菌体）。
[0110] (5)抗原特异性隧菌体克隆的选择及单克隆抗体的取得 阳111] 作为抗原特异性隧菌体克隆的选择法，例如可W使用ELISA法等。在W精制抗原 为外壳的化ISA平板上，使抗体产生隧菌体反应，研究与精制抗原的反应性（结合性）。重 复该工序，筛选克隆，由此能够得到产生单克隆抗体的隧菌体。然后通过使该隧菌体在大肠 杆菌中增殖，回收抗体，能够取得单克隆抗体。上述抗体能够使用例如亲和色谱等公知的精 制方法进行精制。
[0112] 作为本发明的优选方案，可W举出为了制作骨关节炎或骨关节炎性关节炎的治疗 剂或预防剂、软骨基质分解酶产生抑制剂、软骨基质产生剂及由骨关节炎诱导的巨隧细胞 的调亡诱导剂而使用本发明的抗体。即，本发明还提供骨关节炎治疗方法；骨关节炎性关节 炎治疗方法；IgM型抗Fas抗体在制造软骨基质分解酶产生抑制剂中的用途；IgM型抗化S 抗体在制造软骨基质产生剂中的用途；IgM型抗Fas抗体在制造对被骨关节炎诱导的巨隧 细胞的调亡诱导剂中的用途。该IgM型抗Fas抗体的用途中，可W组合使用之前说明的各 方案。
[0113] 本发明的药剂对本领域技术人员来说只要通过公知方法制造即可。本发明的药剂 可W作为口服用制剂及非口服用制剂制造，优选为非口服用制剂。该非口服用制剂可W是 液剂（水性液剂、非水性液剂、悬浮性液剂、乳浊性液剂等），也可W是固体剂（粉末填充制 剂、冷冻干燥制剂等）。另外，本发明的药剂还可W是缓释制剂。
[0114] 制造液剂的方法可W通过公知方法制造。例如可W通过将抗体溶解在药学上允许 的溶剂中，填充到灭菌的液剂用容器中进行制造。作为药学上允许的溶剂，例如可W举出注 射用水、蒸馈水、生理盐水、电解质溶液剂等，优选使用灭菌的溶剂。作为灭菌的液剂用容 器，可W举出安飯、药水瓶、袋等。上述容器可W使用玻璃制或塑料制等公知容器。具体地 作为塑料制容器，可W举出使用了聚氯乙締、聚乙締、聚丙締、乙締?乙酸乙締基醋?共聚物 等材质的容器。上述容器或溶剂的灭菌法可W举出加热法（火焰法、干燥法、高溫蒸汽法、 流通蒸汽法、煮沸法等）、过滤法、照射法（放射线法、紫外线法、高频法等）、气体法、药液法 等。上述灭菌法只要是本领域技术人员就能够对应于容器的材质、溶剂的性质适当选择使 用。
[0115] 制造固体剂的方法可W使用冷冻干燥法、喷雾干燥（喷雾干燥）法、无菌重结晶法 等公知方法。例如冷冻干燥剂可W经过W下工序制造。（I)将结晶化的抗体在室溫4°C、常 压下放置2~3小时，进行冷却（冷却工序）。（2)在室溫-50°C、常压下放置12~15小 时，使其冷冻（冷冻工序）。（3)在室溫-20°C、常压下放置4~6小时，使其重结晶（重结 晶化工序）。（4)在室溫-50°C、常压下放置14~16小时，使其再冷冻（再冷冻工序）。（5) 在室溫-13°C、压力10~20kPa下（高真空下）放置24~26小时（第1干燥工序）。（6) 在室溫24°C、压力10~20kPa下（高真空下）放置10~m小时（第2干燥工序）。（7) 在室溫24°C、常压下放置。由此冷冻干燥法使其在低溫下冷冻，在高真空下使水分（冰）升 华除去。本发明的冷冻干燥剂可W通过上述方法制造，但对其制造方法没有限定，只要是本 领域技术人员，就可W适当变更。另外，各工序的溫度、压力、时间等参数可W适当变更。
[0116] 另外，本发明也能够提供组合了本发明的包含IgM型抗Fas抗体的药剂和医疗用 具的试剂盒制品。例如可W举出将本发明的包含IgM型抗Fas抗体的药剂预先填充在注射 筒等医疗用具中的制品，在1个软袋中隔着间隔壁一边填充固体剂，另一边填充溶剂，使用 时打开间隔壁就能够混合的制品等。由此不仅能够减轻使用时医疗从业者调制的负担，而 且能够防止细菌污染或异物混入等，能够优选使用。因为上述注射筒或软袋是公知的，所W 只要是医疗从业者就能够适当使用。
[0117] 本发明的包含IgM型抗Fas抗体的药剂可W采用静脉内给药、动脉内给药、肌肉内 给药、皮下给药、腹腔内给药、鼻腔内给药等公知给药方法进行给药。优选通过注射给药，也 可通过点滴注入。另外，本发明的药剂可W直接注射到患部（例如关节），另外也可W通过 外科手术将患部开口进行给药。本发明的药剂可W调制成口服用制剂及非口服用制剂，优 选为非口服用制剂。上述非口服用制剂可W制成液剂（水性液剂、非水性液剂、悬浮性液 剂、乳浊性液剂等），也可W制成固体剂（粉末填充制剂、冷冻干燥制剂等）。固体剂在进行 给药时，用药学上允许的溶剂在使用时溶解或悬浮成所希望的浓度进行使用。上述非口服 用制剂可W通过注射或点滴等给药方法使用。
[011引将本发明的包含IgM型抗Fas抗体的药剂制剂化时，可W适当组合药学上允许的 载体或介质等制成制剂。进而，也可W包含药剂。另外，本发明的包含IgM型抗Fas抗体的 药剂可W包含白蛋白、脂蛋白、球蛋白等不影响本发明抗体的作用的蛋白质。由此通过包含 蛋白质，能够提高液剂中包含的抗体的稳定性。上述蛋白质在将本发明的药剂制成液剂时 只要包含在液剂中即可。制成固体剂时，可W在将本发明的抗Fas抗体固形化时包含上述 蛋白质，也可W在溶剂固体剂的溶剂中包含上述蛋白质。上述蛋白质的含量在使给药时的 液量为100重量份时，可W举出0.Ol重量份~5重量份，只要是本领域技术人员，就能够对 应于给药的抗体量或包含的其他物质进行适当调整。
[0119][药学上允许的载体或介质] 阳120] 药学上允许的载体或介质例如可W举出赋型剂、稳定化剂、溶解助剂、乳化剂、悬 浮化剂、缓冲剂、等渗剂、抗氧化剂或保存剂等药学上允许的物质。另外，也可W使用聚乙 二醇（PEG)等高分子材料或环糊精等抱合化合物。W下列举具体例，但本发明并不限定于 此，可W使用公知物质。作为赋型剂，优选淀粉或乳糖等本身不具有药理作用的赋形剂。作 为稳定化剂，可W举出白蛋白、明胶、山梨糖醇、甘露醇、乳糖、薦糖、海藻糖、麦芽糖、葡萄糖 等。上述物质中，优选为薦糖或海藻糖。作为溶解助剂，可W举出乙醇、甘油、丙二醇、聚乙 二醇等。作为乳化剂，可W举出卵憐脂、硬脂酸侣或倍半油酸失水山梨糖醇醋等。作为悬浮 化剂，可W举出聚乙二醇、聚乙締基化咯烧酬（PV巧或簇甲纤维素（CMC)等。作为等渗剂， 可W举出氯化钢、葡萄糖等。作为缓冲剂，可W举出巧樣酸盐、乙酸盐、棚酸或憐酸盐等。作 为抗氧化剂，可W举出抗坏血酸、亚硫酸氨钢、焦亚硫酸钢等。作为保存剂，可W举出苯酪、 硫柳隶、苯扎氯锭等。 阳121]作为与本发明的抗体组合的药剂，可W举出关节疾病治疗剂、抗炎症剂、镇痛剂、 骨再生剂、骨吸收抑制剂、抗生物质或成长剂等，可W举出关节疾病中使用的公知药剂。另 夕F，将本发明的包含抗Fas抗体的药剂通过注射等进行给药时，因为能引起注射导致的疼 痛，所W也可W包含无痛化剂。上述药剂可W组合1种或2种W上。
[0122] 作为关节疾病治疗剂，例如可W举出关节软骨细胞外基质分解括抗剂 (W02004/017996号说明书）、肾上腺皮质激素剂或硫酸软骨素钢、透明质酸化yaluronic acid(HA))等关节软骨的保护剂或作为信号级联放大体系括抗剂的p21活性化激酶（PAK) 括抗剂（特表2007-537134号公报）等。
[0123] 作为抗炎症剂，可W举出酱体性抗炎症剂或非酱体性抗炎症剂（NSAIDs)等。酱 体性抗炎症剂例如可W举出地塞米松、可的松，氨可的松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、倍他米 松、去炎松、曲安奈德、肤轻松、氣轻松、倍氯米松、乙柳酷胺等。作为非酱体性抗炎症剂，例 如可W举出阿司匹林、布洛芬、糞普生、二氯芬酸、吗I噪美辛、糞下美酬、苯基下氮酬、罗非昔 布、塞来昔布、昔康、化罗昔康、化挫嘟酬、阿扎丙酬等。
[0124] 作为镇痛剂，除了也是消炎镇痛药的NSAIDs,还可W举出阿片类镇痛药等。作为阿 片类镇痛药，例如可W举出内啡肤、强啡肤、脑啡肤、可待因、二氨可待因、右旋丙氧芬等。
[0125] 作为骨吸收抑制剂，可W举出雌激素剂、降巧素及双憐酸盐中的任意1种或2种W 上的混合物。
[01 %] 作为抗生物质，可W举出青霉素类抗生物质、头抱締类抗生物质、氨基糖巧类抗生 物质、大环内醋类抗生物质、四环素类抗生物质、肤类抗生物质等抗生物质。作为青霉素类 抗生物质，可W举出苄基青霉素、苯氧基甲基青霉素、甲氧西林、氣氯西林、阿莫西林、氨节 青霉素、赃拉西林、阿洛西林、替卡西林等。作为头抱締类抗生物质，可W举出头抱挫林、头 抱巧辛、头抱径挫、头抱嚷朽、头抱赃酬、头抱匹胺、头抱氨节、头抱克洛、头抱克朽、头抱特 仑等。作为氨基糖巧类抗生物质，可W举出庆大霉素、奈替米星、妥布霉素、链霉素、新霉素、 卡那霉素、阿米卡星等。作为大环内醋类抗生物质，可W举出红霉素、克拉霉素、罗红霉素、 罗他霉素、克林霉素、阿奇霉素等。作为四环素类抗生物质，可W举出四环素、米诺环素、强 力霉素等。此外，作为P-内酷胺类抗生物质，可W举出拉氧头抱、氣氧头抱、氨曲南、亚胺 培南、帕尼培南。另外，此外可W举出万古霉素、利福平、氯霉素等。
[0127] 作为生长因子，可W举出成骨因子度MP)、骨增殖因子度GF)、来自血小板的增殖 因子仰GF)、碱性纤维芽细胞增殖因子化FGF)、膜岛素、膜岛素样增殖因子（IGF)、激素、细 胞因子或转化增殖因子（TG巧等。上述成长剂可W包含1种或2种W上，进而可W与具有 其他药效的公知药剂组合。
[0128] 根据注射导致的疼痛而使用不同的无痛化剂，所述疼痛是因为液剂的抑及渗透 压与体液显著不同或是因药剂本身的作用而引起的。疼痛因抑、渗透压而发生时，优选制成 包含缓冲剂或等渗剂等的液剂。另一方面，因药剂本身的作用引起疼痛时，可W使用局部麻 醉剂等。作为局部麻醉剂，例如可W举出苄基醇、氯下醇、盐酸普鲁卡因、盐酸利多卡因、盐 酸二下卡因、盐酸甲赃卡因等，只要使用公知药剂即可。
[0129] 如上所述制造的本发明的含有IgM型抗Fas抗体作为有效成分的药剂可W用作对 骨关节炎或骨关节炎性关节炎的患者W有效量给药的治疗方法或预防方法。另外，因为本 发明的含有IgM型抗Fas抗体作为有效成分的药剂抑制软骨基质分解酶产生，所W为了促 进或改善软骨基质的产生及为了诱导骨关节炎中诱导的巨隧细胞调亡，能够作为对患者给 予有效量的治疗方法或预防方法进行利用。目P，本发明还提供对对象给予有效量的IgM型 抗Fas抗体的治疗或预防骨关节炎的方法；对对象给予有效量的IgM型抗Fas抗体的骨关 节炎性关节炎治疗方法；对对象给予有效量的IgM型抗Fas抗体的软骨基质分解酶产生抑 制方法；对对象给予有效量的IgM型抗Fas抗体的软骨基质产生方法；对骨关节炎中诱导 的巨隧细胞的调亡诱导方法。在该IgM型抗Fas抗体的用途中，可W组合之前说明的各方 案进行使用。
[0130] 本发明的药剂作为口服用或非口服用制剂进行使用，优选作为注射剂、点滴剂等 非口服用制剂进行使用。非口服用制剂的给药方法只要使用公知方法即可，没有特别限定。 例如可W举出静脉注射、动脉注射、皮下注射、肌肉注射、点滴等。另外，本发明的药剂可W 直接注射到患部（例如关节），另外也可W通过外科手术将患部开口进行给药。只要是本 领域技术人员，就能够适当选择适合患者的给药方法。作为本发明的药剂的主成分的IgM 型抗Fas抗体只要在本发明的药剂中包含有效量即可。本发明的药剂中包含的IgM型抗 Fas抗体的比例在W总重量为100重量份时，只要为IX103~IX10重量份即可，优选为 IX10 2~1X10 1重量份，更优选为5X10 2~5X10 1重量份。给药量根据给药的对象、 年龄、症状等而改变。一般来说，1日的给药量W抗体的有效成分计可W举出每个个体为 Ing~100Jig，优选为IOng~10Jig，更优选为10化g~1Jig。或可W举出每Ikg体重为 IOpg~2yg，优选为10化g~20化g，更优选为Ing~20ng。优选将1日的给药量分2~5 次进行给药。另外，也可W将本发明的药剂制成缓释制剂，能够减少每1日的给药次数。为 了制成上述缓释制剂，只要利用公知方法即可。通过分开给药或制成缓释制剂，容易将生物 体内的药剂浓度保持一定，所W容易获得持续的药效，进而能够减轻副作用，所W能够减轻 对患者的负担。 阳131] W下，具体地基于实施例说明本发明，但本发明并不限定于实施例。 阳132] 实施例1 。。引培养细胸的律立
[0134] 取得知情同意后，由骨关节炎患者的手术组织采集骨软骨组织和末梢血，通过下 述方法采集滑膜纤维芽细胞、软骨细胞、巨隧细胞。 。。引滑腸纤维巧细胸
[0136] 取得知情同意后，从骨关节炎患者的手术组织采集滑膜组织，切碎后，在含 有l.Omg/ml胶原酶kollagenase)的液体低葡萄糖Du化ecco'SmodifiedEagle'S medium值MEM,Gibco社制）培养基内（37°C)下处理一夜，分离培养滑膜纤维芽细胞。通 常，细胞在培养烧瓶（培养面积25cm2)中培养，实验中使用时在聚乙締制培养皿（直径6cm) 中培养。细胞培养如下进行：使用在DMEM培养基中添加培养基容量的10%的灭活胎牛血 清（FetalBovineSe;rum(FB巧，Heat-inactivated,TRACE社制）、进而添加了 2mMk谷氨 酷胺、25mMHEPES、100units/ml的青霉素和链霉素的培养基，在37°C、饱和湿度下，设定为 5%C02+95%air的C〇2培养器（正常氧浓