特 异性结合。进行试验,并如对于激动剂放射性配体试验所述的那样来终止,不同的是通过液 体闪烁光谱仪计算过滤器的放射性。
[0200] 数据分析
[0201] 使用迭代非线性回归的曲线拟合程序(GraphPadPrism,圣地亚哥,C.A.,U. S.A.),由饱和度实验计算平衡解离常数(Kd值)和结合位点的最大数值(Bmax值),和由竞 争实验计算表观解离常数(Ki值)。
[0202] 表 1
[0203]
i.
[0204] 表 2
[0205]
[0207] 实施例2 :式I化合物作为抗抑郁剂在抑郁的慢性动物模型中的有效性
[0208] 就表II而言的实验程序:
[0209] 在CaliperLifeSciences(Hopkinton,MA)( -个获得NovaScreen的公司),进 行用于表征对于5-羟色胺转运蛋白的亲和力的两个不同的试验。一个试验(#100-0056), 转运蛋白SERT,是使用0. 7nM浓度的作为放射性配体的[3H]-N-甲基-西酞普兰在大鼠 前脑中的放射性配体结合试验。[3H]-N-甲基-西酞普兰具有1. 7n的Kd值(亲和力)和 33.lfmol/mg蛋白质的Bmax。使用参比药物丙米嗪(IMI)(Ki= 40. 9nM)验证该试验。可 以使用的其他参比药物包括帕罗西汀(Ki= 0.InM)、氟西汀(Ki= 1.4nM)、氯米帕明(Ki =2. 8nM)、5_ 羟色胺(Ki= 55. 6nM)和齐美定(Ki= 68. 3nM)。
[0210] 另一个试验,转运蛋白SERT(h),为使用0. 7nM浓度的[3H]-N-甲基-西酞普兰在 人类血小板中的放射性配体结合试验。在该试验中,[3H]-N-甲基-西酞普兰的Kd值为 2. 5nM,Bmax为425fmol/mg蛋白质。使用氯米帕明(Ki= 0? 2nM)、西酞普兰(Ki= 3.OnM) 和丙米嗪(Ki= 4.OnM)验证该试验。
[0211] 在Cerep(CelleL'Evescault,France)进行第三个试验。第三个试验为使用2nM 浓度的[3H]-丙米嗪作为放射性配体在CH0中在人重组5-羟色胺转运蛋白中的放射性配 体结合试验。使用未标记的丙米嗪(Ki= 2. 7nM)验证该试验。
[0212] 实验设计:使用用于忧郁的社会失败(居留者-入侵者)小鼠模型测定式I的化合 物(化合物A)的抗忧郁活性,在所述小鼠模型中,在啮齿动物中诱导的回避社交已经被证 明是响应于慢性但不是急性的抗抑郁药物治疗。社会挫败的范例是基于以下观察,心理社 会应激使得小鼠对于社会接触的动机产生持久的改变。小鼠经受10天的培训期,期间它们 每天接触到社会应激,即每天接触到不同的侵略性小鼠("侵略者")。然后,通过测定它们 接近陌生的小鼠的倾向观察它们的社会行为,即在紧密接近陌生的入侵者的"互动区"花费 时间。通过录像带记录小鼠,并对其社会行为(即在互动区的时间)和厌恶行为(即,在角 落区的时间)评分。正常的小鼠显示与陌生小鼠的社会互动(即,在互动区多花费时间), 而那些接触重复的社会失败条件的小鼠显示厌恶反应(即,在角落区多花费时间),并且比 正常小鼠在接触陌生的测试小鼠上(即,居民入侵者或目标)花费更少的时间。
[0213] "社会失败"的小鼠的厌恶响应是可逆的;厌恶的行为持续数星期,且可以在暴露 于社会压力的10天结束之后出现甚至4周。"社会失败"的小鼠的异常行为响应于慢性抗 抑郁药物。每天用抗抑郁药物氟西汀或丙米嗪治疗30天的小鼠,当再次接触到陌生的小鼠 时,显示改善的社会互动行为(即,在互动区比在角落区花费更多的时间)。值得注意的是, 慢性但不是急性的氟西汀治疗改善社会行为。由于通过社会失败的范例、像人类的抑郁所 测定的社会行为不同地响应于慢性抗抑郁治疗,这种范例可以更准确地反映新型抗抑郁治 疗的有益活性,提供比传统模型(例如,强制游泳和尾部悬吊模型)的优势,所述常规模型 响应于药物的急性药理作用,未必预示慢性的抗抑郁疗效。
[0214] 在社会失败范例中测试本发明的代表性的化合物--化合物A。向正常的雄性小 鼠或每日一次经受社会失败应激达10天的小鼠(N= 8-12C57B1/6小鼠/组)每日一次注 射化合物A(lmg/kg或IP)或载体溶液(5 %DMS0/5 %吐温-20/15 %PEG400/75 %的水), 持续29天。在第30天,测试所有小鼠的对于陌生的小鼠的社会响应。每日一次用化合物 A治疗持续30天的正常小鼠是健康的、表现正常且体重增加正常。这些小鼠在互动区花费 与接受载体注射的小鼠相当的时间。正如预期的,经受社会应激10天的小鼠表现出严重的 社会失败行为,在陌生小鼠附近花费小于正常未应激的小鼠的一半的时间。但是,用化合物 A慢性治疗的社会失败的小鼠,在社会行为方面表现出显著增加,相比接受载体注射的社会 失败小鼠,当接触陌生的小鼠时在互动区花费几乎两倍的时间。因此,接受化合物A的社 会失败的小鼠在互动区花费的时间与接受载体注射的正常小鼠没有区别。因此,相比正常 (未应激的)小鼠,社会失败的小鼠在远距离的对照区花费明显更多的时间。本发明化合物 的施用明显逆转这种行为偏好。
[0215] 总之,这些数据表明,每日施用化合物A诱导社会应激的小鼠中的行为响应,其与 抗抑郁药的疗效一致,并且比得上抗抑郁药诸如氟西汀诱导的疗效。
[0216] 实施例3 :减轻L-多巴诱导的运动障碍的效力
[0217] 在每日注射所述化合物和L-D0PA的运动障碍小鼠中,使用标准的异常不自主运 动量表(AIMS)测定的轴向、口舌和肢体异常不自主运动的减少表明:共同施用式I的化合 物减少与运动障碍行为(口舌、轴向和肢体)相关的A頂S和运动活动(运动AMS)的发展 和表现。按照下面的时间表,向单侧6-羟基多巴胺损伤的小鼠施用式I的化合物(化合物 A):
[0218] 对照:
[0219] 第1天-第9天:用L-D0PA/苄丝肼治疗
[0220] 第10天:用L-D0PA/苄丝肼治疗+A頂S(运动障碍)的评价
[0221] 实验1 (慢性):运动障碍的发展
[0222] 第 1 天-第 10 天:用L-D0PA/ 苄丝肼加ITI-007ITI-007PD治疗
[0223] 第11天:用L-D0PA/苄丝肼治疗+A頂S(运动障碍)的评价
[0224] 实验2 (急性):运动障碍的表现
[0225] 第1天-第10天:用L-D0PA/苄丝肼治疗
[0226] 第11天:用L-D0PA/苄丝肼加ITI-007治疗+A頂S(运动障碍)的评价
[0227] 在向单侧6-羟基多巴胺损伤的小鼠慢性共同施用左旋多巴(10mg/kgIP)之后, 化合物A(0. 3mg/kgIP)减少运动障碍行为。该化合物有效地减少(约50% )H)小鼠(即 慢性治疗组)中的运动障碍行为的发展。它对于已确立的运动障碍的行为(即急性治疗 组)具有较不强劲但仍然显著的效果(约25%减少)。总之,这些数据表明式I的化合物 具有预防和治疗ro中的左旋多巴诱导的运动障碍的效用。如上所述,除了减少左旋多巴诱 导的运动障碍,式I的化合物还会减少ro的精神病和抑郁、改善差的夜间睡眠以及减少过 多的白天嗜睡。
[0228] 实施例4-低剂量对于睡眠维持性失眠和与精神病学和神经病学疾病有关的睡眠 障碍的临床试验
[0229] 如上所述,在低剂量时,式I的化合物主要是5-羟色胺5-HT2A拮抗剂。在较高剂 量时,化合物还可作为多巴胺D2受体的突触前部分激动剂、突触后拮抗剂发挥作用,并抑制 5-羟色胺转运蛋白。本研究评价式I的化合物(化合物A)在患有睡眠维持性失眠(SMI) 的患者中的剂量范围。本研究的主要目的是确定:该化合物是否减少作为睡眠保持功效的 量度的入睡后的醒来时间(WAS0),该化合物是否增加作为5-HT2A脑受体占用的生物标志 的慢波睡眠(SWS)。
[0230] 该研究是一项随机、双盲、完整交叉设计。18名患有SMI、18岁至65岁的患者被包 括在疗效试验中。所有受试者接受化合物A和安慰剂的三次单剂量,在晚上在整晚的PSG 记录前施用,在各次给药之间有一星期冲洗期。分析SWS、WAS0、其他PSG测定和安全性。
[0231] 化合物A剂量依赖地降低WAS0(p= 0. 032),并增加SWS(p= 0. 002)。化合物A 在夜间保持正常的睡眠结构。化合物A是安全的,且耐受性良好。化合物A剂量依赖性和 强烈地减少患有SMI的患者的WAS0,表明了改善的睡眠维持的疗效。在最高测试剂量时对 于WAS0效应的大小表明,式I的化合物的独特的药理特性对维持睡眠是有用的,其高于和 超出由5-HT2A拮抗作用提供的作用。此外,SWS睡眠的增加表明,出现脑5-HT2A受体的明 显的占据。式I的化合物可用于患有SMI的患者和用于治疗与精神病学和神经病学疾病有 关的睡眠障碍。
[0232] 通过PSG(由睡着的时间/在床上的时间定义的睡眠效率)测定的改善的睡眠
[0233]
[0234] 该化合物没有导致对于REM的潜伏期的变化(p= 0. 143),没有导致REM过程中的 变化(P= 〇. 124)。该化合物不损害入睡的潜伏期(p= 0. 455)。该化合物增加前半夜的 慢波睡眠(第一个四分之一,P= 0. 022 ;第二个四分之一,p= 0. 029),增加后半夜的第2 期睡眠(第三个四分之一,P= 0. 048 ;第四个四分之一,p= 0. 004)。该化合物在患有睡 眠维持性失眠的患者中是安全的,且耐受性良好。没有严重的副作用。没有剂量相关的副 作用或安全参数的变化。该化合物不损害如在早晨在PSG后通过数字符号替换测试(Digit SymbolSubstitutionTest,DSST)、字配对结合试验(WordPairAssociatesTest,WPAT) 或Leeds精神活动测试(LeedsPsychomotorTest)所测定的认知功能。
[0235] 使用正电子发射断层成象术测定,健康志愿者中的纹状体D2受体占据是剂量依赖 的。显示用于睡眠障碍评价的剂量在其中存在高的纹状体D2的占据的剂量以下。
[0236]
【主权项】
1. 包含与可药用稀释剂或载体组合或联合的Img - IOOmg的游离或可药用盐的形式的 式I的化合物的口服单位剂量形式的药物组合物,其中,X为0、-NH或-N (CH3);且Y为-O-或-C (O)-,条件是在盐的情况下,所述重量是 以游离碱来计算的。2. 根据权利要求1的药物组合物,其中,所述式I的化合物为甲苯磺酸盐的形式。3. 根据权利要求1或2的组合物在制备药物中的用途,所述药物用于治疗与5-HT 2A、 SERT或多巴胺D2受体相关的一种或多种睡眠障碍。
【专利摘要】本发明涉及用于睡眠障碍和其他疾病的方法和组合物,特定取代的杂环稠合γ-咔啉作为药物和包含所述化合物的药物组合物用于治疗涉及5-HT2A、SERT和/或多巴胺D2通路的一种或多种障碍的用途。此外,该化合物可以联合其他治疗剂用于治疗一种或多种睡眠障碍、抑郁、精神病、运动障碍和/或帕金森病或任何组合。
【IPC分类】A61K31/4985, A61K31/5383, A61P25/20
【公开号】CN105168219
【申请号】
【发明人】S·梅特斯, A·A·芬博格, L·P·文诺格勒
【申请人】细胞内治疗公司
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2009年5月27日