1是F、D或Y，X2是N、D或S，且X3是A、G、W或N。
[0135] 在其他实施方案中，本发明的Toso抗体包含含有W下共有序列的重链CDR2:I-X1- PSG-X2-T-X3，其中 XI 是S、D或 Y，X2是 G或 D，且X3是 T或 P。
[0136] 在其他实施方案中，本发明的Toso抗体包含含有W下共有序列的轻链CDR1:Q-S- X1-S-X2-Y，其中 XI 是V或 I，且X2是S、D或 N。
[0137] 在其他实施方案中，本发明的Toso抗体包含含有W下共有序列的轻链CDR3 : QQ- X1-Y-X2-TP-X3-T，其中XI是F、R或S，X2 是N、G、T、S或I，且X3 是L、I、E或 C。
[0138] 如应了解，尽管用于鉴别针对特定蛋白质的抗体的方法在本领域中是已知的，但 并非所述方法中所鉴别的所有抗体都会结合目标蛋白质。因此，本发明的一个方面是鉴别 结合Toso的抗体与不结合Toso的抗体的不同，参见例如图1的来自于结合Toso的抗体的抗 体重链和轻链序列，与图2中的不结合Toso的抗体重链和轻链序列相对。
[0139] 在其他方面，本发明提供了一种表达载体，其编码与本文中所描述的任何序列一 致和与图1中所提供的任何序列一致的抗体或蛋白质。
[0140] 在其他方面，本发明提供了一种制造与本文中所描述的任何序列一致和与图1中 所提供的任何序列一致的抗体或蛋白质的方法，所述方法包括提供包含编码该抗体或蛋白 质的核酸的细胞，其中在适合于表达所述抗体或蛋白质的条件下培养所述细胞。
[0141] 在其他方面，本发明提供了一种治疗Toso相关疾病的方法，所述方法包括用与本 文中所描述的任何序列一致和与图1中所提供的任何序列一致的抗体或蛋白质治疗有需要 的受试者。
[0142] 在其他方面，本发明的抗体用于多种应用，包括Toso相关疾病的诊断和其治疗。
[014引 对Toso抗体的其他修饰
[0144] 除W上概述的任何修饰和变体W外，可W进行其他修饰。举例来说，分子可W通过 并入连接VH和化结构域的二硫桥加 W稳定（Reiter等，1996,化ture Biotech. 14:1239- 1245,全文且具体来说与分子(包括抗体)的修饰相关的所有教导内容出于所有目的W引用 的方式并入）。另外，可如W下所概述对抗体进行多种共价修饰。
[0145] 抗体的共价修饰包括在本发明的范围内，且一般但并不总是在翻译后进行。举例 来说，通过使抗体的特定氨基酸残基与能够与所选侧链或者N或C末端残基反应的有机衍生 化剂反应将抗体的若干种类型的共价修饰引入所述分子中。
[0146] 最通常使半脫氨酷残基与α-面代乙酸醋（和相应的胺），诸如氯乙酸或氯乙酷胺反 应，得到簇甲基或簇酷胺基甲基衍生物。半脫氨酷残基还可W通过与漠 Ξ氣丙酬、α-漠-β- (5-咪挫基)丙酸、氯乙酷基憐酸醋、Ν-烷基马来酷亚胺、3-硝基-2-化晚基二硫化物、甲基2- 化晚基二硫化物、对氯隶苯甲酸、2-氯隶基-4-硝基苯酪或氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1，3-二 挫等等反应来进行衍生化。
[0147] 另外，半脫氨酸上的修饰特别适用于抗体-药物缀合物(ADC)应用，如W下进一步 描述。在一些实施方案中，抗体的恒定区可W经过工程改造 W含有一个或多个特别具有"硫 醇反应性"的半脫氨酸，W便允许更具特异性地且更受控制地放置药物部分。参见例如美国 专利号7，521，541，W全文引用的方式并入本文中。
[0148] 通过在pH 5.5至7.0下与焦碳酸二乙醋反应对组氨酷残基进行衍生化，因为运种 试剂对组氨酷侧链具有相对特异性。对漠苯甲酯甲基漠也有用;所述反应优选地在0.1M二 甲肿酸钢中在抑6.0下进行。
[0149] 使赖氨酷和氨基末端残基与班巧酸或其他簇酸酢反应。利用运些试剂的衍生化具 有逆转赖氨酷残基的电荷的作用。用于衍生化含α-氨基的残基的其他合适的试剂包括亚氨 酸醋，诸如甲基化晚亚胺甲醋;憐酸化唉醒;化唉醒;氯棚氨化物;Ξ硝基苯横酸;0-甲基异 脈;2，4-戊二酬;和利用乙醒酸的转氨酶催化反应。
[0150] 通过与一种或若干种常规试剂反应来修饰精氨酷残基，其中有苯甲酯甲醒、2,3- 下二酬、1,2-环己二酬和巧Ξ酬。精氨酸残基的衍生化需要在碱性条件下进行反应，因为存 在高地a的脈官能团。此外，运些试剂可能与赖氨酸基团W及精氨酸ε-氨基反应。
[0151] 可对酪氨酷残基进行特定修饰，特别感兴趣的是通过与芳族重氮化合物或四硝基 甲烧反应将光谱标记引入酪氨酷残基中。最通常分别使用Ν-乙酷基咪挫和四硝基甲烧来形 成0-乙酷基酪氨酷物质和3-硝基衍生物。使用1251或1311对酪氨酷残基进行舰化W制备经 过标记的蛋白质W用于放射免疫测定法，W上所描述的氯胺Τ法是合适的。
[0152] 通过与碳化二亚胺(R/ -N = C = N--R/ )反应对簇基侧基(天冬氨酷或谷氨酷)进行 选择性修饰，其中R和R/任选地是不同的烷基，诸如1-环己基-3-(2-吗嘟基-4-乙基)碳化二 亚胺或1-乙基-3-(4-氮阳离子-4,4-二甲基戊基)碳化二亚胺。此外，通过与锭离子反应将 天冬氨酷和谷氨酷残基转化成天冬酷胺酷和谷氨酷胺酷残基。
[0153] 利用双官能试剂的衍生化可用于使抗体与水不溶性支撑基质或表面交联W用于 多种方法W及下文所描述的方法。通常使用的交联剂包括例如1，1-双（二叠氮乙酷基)-2- 苯乙烧、戊二醒、N-径基班巧酷亚胺醋，例如与4-叠氮基水杨酸的醋，同型双官能亚氨酸醋， 包括二班巧酷亚胺基醋，诸如3,3/-二硫双(班巧酷亚胺基丙酸醋)和双官能马来酷亚胺，诸 如双-N-马来酷亚胺基-1,8-辛烧。诸如3-[(对叠氮基苯基)二硫]丙酷胺甲醋的衍生化剂产 生能够在光的存在下形成交联的光活化中间物。可选地，诸如漠化氯活化的碳水化合物的 反应性水不溶性基质和美国专利号 3,969,287、3,691，016、4，195，128、4,247,642、4,229， 537和4,330,440中所描述的反应性底物可用于蛋白质固定，所述专利全部W全文引用的方 式并入。
[0154] 谷氨酷胺酷和天冬酷胺酷残基经常脱去酷胺基而成为相应的谷氨酷和天冬氨酷 残基。可选地，运些残基在轻度酸性条件下进行脱酷胺。运些残基的任一种形式都在本发明 的范围内。
[0155] 其他修饰包括脯氨酸和赖氨酸的径基化、丝氨酷或苏氨酷残基的径基的憐酸化、 赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的日-氨基的甲基化（T.E. Creighton, Proteins: Structure and Mole州lar P;rope;rties，W.H.Freeman&Co.，San Francisco,第79-86页[1983]，W全文 引用的方式并入）、N末端胺的乙酷化和任何C末端簇基的酷胺化。
[0156] 另外，如本领域技术人员应了解，标记(包括巧光、酶、磁性、放射性等)可W全部添 加至抗体(W及本发明的其他组合物）。
[0157] 另一种类型的共价修饰是糖基化变化。在另一个实施方案中，本文中所公开的抗 体可W经修饰W包括一种或多种工程改造的糖形。如本文中所使用的"工程改造的糖形"意 指共价连接至抗体的碳水化合物组成，其中所述碳水化合物组成在化学上不同于亲本抗体 的碳水化合物组成。工程改造的糖形可用于各种目的，包括但不限于提高或降低效应功能。 [015引工程改造的糖形可W通过本领域中已知的多种方法来产生(Umafta等，1999,化t Biotechnol 17:176-180;Davies等，2001，Biotechnol Bioeng 74:288-294;Shields等， 2002，J Biol Chem277:26733-26740;aiinkawa等，2003,J Biol Chem 278:3466-:3473;US 6,602,684；USSN 10/277,370；USSN 10/113,929；PCX WO 00/61739A1；PCX WO 01/ 29246A1;PCT WO 02/31140Al;PCT WO 02/30954A1，全部W全文引用的方式并入；（ PotelHgen顿技术[Biowa，Inc .，Princeton，NJ]; GlycoMAb驳糖基化工程改造技术 [Glyca;rt BiotechnologyAG，Zii;rich，Switze;rland])。运些技术中有许多是基于控制共价 连接至Fc区的海藻糖基化和/或平分型寡糖的水平，例如通过在各种工程改造或其他生物 体或细胞系（例如Lec-13C册细胞或大鼠杂交瘤YB2/0细胞）中表达IgG、通过调节设及糖基 化途径的酶(例如即Τ8[α1，6-海藻糖基转移酶巧日/或m-4-N-乙酷基葡萄糖氨基转移酶III [Gn ΤΠΙ])、或通过在已经表达IgG之后修饰碳水化合物。举例来说，Seattle Genetics的 "糖工程改造的抗体"或"SEA技术"通过添加能抑制在产生期间发生海藻糖基化的经修饰的 糖而起作用；参见例如20090317869, W全文引用的方式并入在此。工程改造的糖形典型地 是指不同的碳水化合物或寡糖;因此抗体可W包括工程改造的糖形。
[0159] 可选地，工程改造的糖形可W指包含不同的碳水化合物或寡糖的IgG变体。如本领 域中已知，糖基化模式可W取决于蛋白质的序列（例如，存在或不存在W下所讨论的特定糖 基化氨基酸残基)或产生蛋白质的宿主细胞或生物体。W下讨论特定的表达系统。
[0160] 多肤的糖基化典型地是经N连接或经0连接。N连接是指碳水化合物部分连接于天 冬酷胺残基的侧链。Ξ肤序列天冬酷胺-X-丝氨酸和天冬酷胺-X-苏氨酸(其中X为除脯氨酸 外的任何氨基酸)是用于碳水化合物部分至天冬酷胺侧链的酶连接的识别序列。因此，多肤 中的运些Ξ肤序列中的任一者的存在产生了潜在糖基化位点。经0连接的糖基化是指糖N- 乙酷基半乳糖胺、半乳糖或木糖之一连接至径基氨基酸，最常见的是丝氨酸或苏氨酸，但也 可W使用5-径基脯氨酸或5-径基赖氨酸。
[0161] 糖基化位点至抗体的添加宜通过改变氨基酸序列W使其含有上述Ξ肤序列中的 一个或多个来实现(对于经N连接的糖基化位点）。所述改变还可W通过将一个或多个丝氨 酸或苏氨酸残基添加至起始序列或者通过W-个或多个丝氨酸或苏氨酸残基取代来进行 (对于经0连接的糖基化位点）。为方便起见，抗体氨基酸序列优选地通过DNA层面上的变化 来改变，尤其是通过使编码祀多肤的DNA在预选的碱基处突变W使得产生将翻译成所需氨 基酸的密码子。
[0162] 增加抗体上的碳水化合物部分的数目的另一种手段是糖巧与蛋白质的化学或酶 促偶联。运些程序的有利之处在于其不需要在宿主细胞中产生具有糖化能力W用于N连接 或0连接的糖基化的蛋白质。取决于所使用的偶联模式，糖可W连接于(a)精氨酸和组氨酸； (b)游离簇基；（C)游离硫氨基，诸如半脫氨酸的硫氨基；（d)游离径基，诸如丝氨酸、苏氨酸 或径基脯氨酸的径基；（e)芳族残基，诸如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸的芳族残基;或(f)谷 氨酷胺的酷胺基。运些方法描述于W0 87/05 330W及Aplin和Wriston，1981，CRC Crit.Rev.Biochem.，第259-306页中，两者W全文引用的方式并入。
[0163] 去除起始抗体上所存在的碳水化合物部分(例如翻译后）可W用化学或酶促方式 实现。化学去糖基化需要使蛋白质暴露于化合物Ξ氣甲横酸或等效化合物。运种处理导致 除连接糖(N-乙酷基葡萄糖胺或N-乙酷基半乳糖胺）W外的大部分或所有糖裂解，而留下多 肤完好无损。化学去糖基化由Hakimuddin等，1987，Arch. Biochem. Bio地ys. 259:52及Edge 等，1981，411曰1.81〇油6111.118:131描述，运两者^全文引用的方式并入。多肤上的碳水化合 物部分的酶促裂解可W通过如化otakura等，1987，Meth. Enzymol. 138:350所描述使用各种 内切糖巧酶和外切糖巧酶来实现，该文献W全文引用的方式并入。可W通过如Duskin等， 1982, J.Biol. Chem. 257:3105所描述使用化合物衣霉素来防止潜在糖基化位点处的糖基 化，该文献W全文引用的方式并入。衣霉素阻断蛋白质-N-糖巧键联的形成。
[0164] 抗体的另一种类型的共价修饰包括用例如得自于化ktar化erapeutics的2005- 2006阳G Ca化log(可在化ktar网站获得）美国专利号4,640,835、4,496,689、4,301，144、4， 670,417、4,791，192或4，179,337中所阐述的方式将抗体连接于各种非蛋白质聚合物，包括 但不限于各种多元醇，诸如聚乙二醇、聚丙二醇或聚氧化締，所述文献全部W全文引用的方 式并入。另外，如本领域中已知，氨基酸取代可W在抗体内的各种位置上进行W促进诸如 PEG的聚合物的添加。参见例如美国公布号2005/0114037A1，其W全文引用的方式并入。 巧1巧]III.调节Toso活性的方法
[0166] 在一个方面，本发明设及调节Toso活性的方法。在一个实施方案中，调节Toso活性 的方法包括抑制Toso活性。在其他实施方案中，调节Toso活性的方法包括增加 Toso活性。
[0167] 在一些实施方案中，本发明的方法包括直接调节Toso活性。在示例性实施方案中， 所述方法包括应用可结合To S 0的试剂，诸如抗体。
[0168] 在其他实施方案中，通过诸多机制的组合来调节Toso活性，例如通过施用包含能 结合Toso的试剂的组合物与包含能结合Toso的同源配体的试剂的组合物或与能结合Toso 的第二试剂的组合。在一个示例性实施方案中，所述组合可W包括但不限于Toso抗体和可 溶性Toso蛋白，诸如2013年3月14日提交的USSN 13/831,031中所描述的可溶性Toso蛋白， 该文献全文且特别是与可溶性Toso蛋白有关的任何公开内容、权利要求、附图或其他教导 内容出于所有目的W引用的方式并入在此。
[0169] 如应了解，调节Toso活性的方法可W包括使用本文中所描述的任何组合物的任何 组合，包括如本文中所描述的包含SEQ ID NO. 1-62中的任何一个或多个W及其任何变体或 修饰的抗体。
[0170] V.治疗病症的方法
[0171] 在一个方面且根据任何上述内容，本发明提供了通过用调节Toso活性的组合物治 疗有需要的受试者来治