抗原结合肤的足迹内。
[0104] 表位可W是构象的或线性的。构象表位是由来自于线性多肤链的不同节段的空间 上邮连的氨基酸产生。线性表位是由多肤链中的相邻氨基酸残基产生的表位。构象和非构 象表位的不同之处可能在于在存在变性溶剂的情况下，与前者而不是后者的结合丧失。
[0105] 在独特的空间构象下，表位典型地包括至少3个且更通常至少5或8至10个氨基酸。 可W在简单免疫测定法中验证识别相同表位的抗体，所述免疫测定法显示一种抗体阻断另 一种抗体与祀抗原结合，例如"绑定(binning)"的能力。
[0106] 在一些实施方案中，所述抗体是全长。"全长抗体"在本文中意指组成抗体的天然 生物学形式的结构，包括可变区和恒定区，包括一个或多个如本文中所概述的修饰。
[0107] 可选地，所述抗体可W具有多种结构，包括但不限于抗体片段、单克隆抗体、双特 异性抗体、微抗体、结构域抗体、合成抗体(在本文中有时被称为"抗体模拟物"）、嵌合抗体、 人源化抗体、抗体融合物(有时被称为"抗体缀合物"）和各自相应的片段。
[010引抗体片段
[0109] 在一个实施方案中，所述抗体是抗体片段。特别感兴趣的是包含Fc区、Fc融合物和 重链恒定区（CH1 -较链-C肥-C册)此外还包括恒定重区融合物的抗体。
[0110] 特定抗体片段包括但不限于（i)由化、VHXL和CH1结构域组成的化b片段；（ii)由 VH和CHI结构域组成的Fd片段；（iii)由单一抗体的化和VH结构域组成的Fv片段；（iv)由单 一可变组成的dAb片段(Ward等，1989，化ture 341:544-546，W全文引用的方式并入）；（V) 分离的CDR区；（Vi)包含两个连接的化b片段的二价片段F(ab〇2片段；（vii)单链Fv分子 (scFv)，其中VH结构域和VL结构域由允许运两个结构域缔合W形成抗原结合位点的肤连接 子连接（Bird 等，1988, Science 242:423-426;Huston 等，1988， Proc.化tl. Acad. Sci.U.S. A. 85:5879-5883，W全文引用的方式并入）；（viii)双特异性单 链Fv(W003/11161，W引用的方式并入在此）；和（ix)通过基因融合构建的多价或多特异性 片段。二抗体"或 "Ξ 抗体"（Tomlinson 等，2000，Methods Enzymol. 326:461-479 ;W094/ 13804 ;Holliger 等，1993，Proc.化 tl. Acad. Sci.U.S. A. 90:6444-6448，全部 W 全文引用的 方式并入）。抗体片段可W经修饰。举例来说，分子可W通过并入连接VH和化结构域的二硫 桥加 W稳定(Reiter等，1996，NaUire Biotech. 14:1239-1245，W全文引用的方式并入）。 [0川]嵌合和人源化抗体
[0112]在一些实施方案中，支架组分可W是来自于不同的物种的混合物。因而，如果蛋白 质是抗体，则所述抗体可W是嵌合抗体和/或人源化抗体。一般来说，"嵌合抗体"和"人源化 抗体"是指组合了来自多于一个物种的区域的抗体。举例来说，"嵌合抗体"在传统上包含来 自于小鼠（或在一些情况下大鼠）的可变区和来自于人类的恒定区。"人源化抗体"一般是指 可变结构域框架区交换为人类抗体中所发现的序列的非人类抗体。一般来说，在人源化抗 体中，除了CDRW外的整个抗体是由人类来源的多核巧酸编码，或除了其CDR内W外与此种 抗体同一。将CDR(其中一些或全部是由起源于非人类生物体的核酸编码)移植到人类抗体 可变区的β片框架中W产生抗体，其特异性由移植的CDR决定。所述抗体的产生描述于例如 W 下文献中：W092/11018; Jones ,1986,Nature 321:522-525 ;Verhoeyen等，1988， Science239:1534-1536,所述文献W全文引用的方式并入。通常需要选定的受体框架残基 至相应的供体残基的"回复突变重新获得初始移植构建体所丧失的亲和力(美国专利号 5,530，101;美国专利号5,585,089;美国专利号5,693,761;美国专利号5,693,762;美国专 利号6，180,370;美国专利号5,859,205;美国专利号5,821，337;美国专利号6,054,297;美 国专利号6，407，213，所有专利都W引用的方式并入）。人源化抗体最适宜还将包含免疫球 蛋白恒定区（典型地为人类免疫球蛋白恒定区）的至少一部分，且因此典型地将包含人类化 区。还可W使用具有经过基因工程改造的免疫系统的小鼠来产生人源化抗体。Roque等， 2004，Biotechnol. Prog. 20:639-654，所述文献W全文引用的方式并入。用于人源化和重构 非人类抗体的多种技术和方法在本领域中是众所周知的。（参见Tsurushita和Vasquez， 2004,Humanization of Monoclonal Antibodies,Molecular Biology of B Cells,533- 545，Elsevier Science(USA)和其中所引用的参考文献，所述文献全部W全文引用的方式 并入）。人源化方法包括但不限于W下文献中所描述的方法:Jones等，1986,化ture 321: 522-525 ;Riechmann等，1988，化ture 332: 323-329 ;Ve;rhoeyen等，1988，Science，239 : 1534-1536;Queen等，1989，Proc 化tl Acad Sci'USA 86:10029-33;He等，1998， J. Immunol. 160:1029-1035 ;&;rte;r等，1992, Proc 化tl Acad Sci USA 89:4285-9 ;Pres1:a 等，1997，(Mincer Res. 57(20) :4593-9;Gorman等，1991 'Proc.Natl .Acad. Sci .USA88:4181- 4185;0'Connor等，1998，Protein Eng 11:321-8,所述文献全部W全文引用的方式并入。降 低非人类抗体可变区的免疫原性的人源化或其他方法可W包括表面重建法，如例如 Roguska等，1994，Proc.化11. Acad. Sci . USA 91:969-973中所描述，所述文献W全文引用的 方式并入。在一个实施方案中，亲本抗体已进行了亲和力成熟，如本领域中已知。基于结构 的方法可W用于人源化和亲和力成熟，举例来说，如美国序列号11/004,590中所描述。基于 选择的方法可W用于对抗体可变区进行人源化和/或亲和力成熟，包括但不限于W下文献 中所描述的方法:Wu 等，1999, J. Mol. Biol. 294:151-162 ;Baca 等，1997, J. Biol.化 em. 272 (16):10678-10684;Rosok等，1996,J.Biol.Chem.271(37):22611-22618;Rader等，1998， Proc.化tl.Acad.Sci.USA 95:891〇-8915;Krauss等，2003，P;rotein lingineering 16(10): 753-759,所述文献全部W全文引用的方式并入。其他人源化方法可能包括仅移植CDR的一 部分，包括但不限于W下文献中所描述的方法：美国序列号09/810,510; Tan等，2002， J. Immunol. 169:1119-1125;De 化 scalis 等，2002, J. Immunol. 169:3076-3084,所述文献全 部W全文引用的方式并入。
[0113] 在一个实施方案中，所述抗体是微抗体。微抗体是包含与CH3结构域连接的scFv的 最小化抗体样蛋白质。化等，1996，Cancer Res. 56:3055-3061，该文献W全文引用的方式并 入。在一些情况下，scFv可W连接于Fc区，并且可W包括一些或整个较链区。
[0114] Toso抗体和变体
[011引如本文中所使用，术语"Toso抗体"是指结合Toso或结合Toso配体的任何抗体，包 括包含本文中所描述的任何序列和其变体的抗体。
[0116] 在某些方面，本发明的Toso抗体包括包含如图1中和W下表1和表2中所提供的CDR 序列的抗体。
[0117] 表1 :Toso抗体的CDR序列-重链 [011引
[0119]
[0120]
[0121]
[0122]
[0123]
[0124] 在其他实施方案中，本发明的Toso抗体包含如图1中所提供的CDR序列的变体。一 般来说，如本文中所描述，变体可W包括任何数目的修饰，只要蛋白质的功能仍存在即可。 也就是说，在利用包含如图1中所提供的序列的任何抗体的CDR产生的氨基酸变体的情况 下，举例来说，抗体仍将特异性结合Toso或Toso配体。类似地，举例来说，如果用化区产生氨 基酸变体，则变异抗体将维持所述抗体的具体应用或适应症所需的受体结合功能。
[0。5] 然而，一般来说，由于一般利用1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸取代，正如通常 发生的那样，所W目标是利用最少数目的修饰来改变功能。在一些情况下，存在1至5个修 饰，而1至2、1至3和1至4也用于多个实施方案中。
[0126] 在一些实施方案中，在本发明的Toso抗体的一个或多个CDR中进行如图及表1 和表2中所提供的一个或多个氨基酸修饰。一般来说，任何单一CDR中仅有1或2或3个氨基酸 被取代，并且一般在一组CDR内进行不超过4、5、6、7、8、9或10个变化。然而，应了解，特定抗 体的任何CDR中无取代、1、2或3个取代的任何组合可W独立地且任选地与任何其他取代组 厶 1=1 〇
[0127] 在一些情况下，CDR中的氨基酸修饰被称为"亲和力成熟"。"亲和力成熟"抗体是与 不具有那些变化的亲本抗体相比在一个或多个CDR中具有一个或多个变化，由此改善抗体 对抗原的亲和力的抗体。在一些情况下，尽管很少，但可能需要降低抗体对其抗原的亲和 力，但运一般不是优选的。
[0128] 可W进行亲和力成熟W使抗体对抗原的结合亲和力与"亲本"抗体相比增加至少 约10%至50%-100%-150%或更多或1至5倍。优选的亲和力成熟抗体将对祀抗原具有纳摩 尔或甚至皮摩尔的亲和力。亲和力成熟抗体是通过已知的程序来产生。参见例如Marks等， 1992，Biotechnology 10:779-783，其描述了通过可变重链(￥^和可变轻链(￥〇结构域改 组来进行亲和力成熟。CDR和/或框架残基的随机诱变描述于例如W下文献中：Barbas等， 1994，Proc.化t.Acad.Sci，USA91:3809-3813;Shier等，1995，Gene 169:147-155;化Iton 等，1995, J. Immunol. 155:1994-2004; Jackson 等，1995, J. Immunol. 154(7): 3310-9;和 化 wkins 等，1992, J.Mol. Biol. 226:889-896。
[0129] 可选地，可W在本发明抗体的一个或多个CDR中进行"沉默"，例如不显著改变抗体 对抗原的亲和力的氨基酸修饰。运些可能出于多种原因而进行，包括优化表达(如可W对编 码本发明抗体的核酸进行）。
[0130] 因此，本发明的CDR和抗体的定义内包括变异CDR和抗体；即，本发明的抗体可W在 抗体 3b7、k-2-5、5/7k5、5/7kl、5/7k6、5/l^L24、5/15kL26、5/l^L30、k-4.15、k-4.16、k- 4.18、k-4.20、k-4.17、L-1-13、lR^r3、K3-22、k-2-48、K3-24、5/15L28、5/151cL19、k-5.10、 k-2-42、lR2kr30、Kl、L1、k-2-32a-8.2、k8.6、k8.17 的一个或多个CDR 中包括氨基酸修 饰，其重链和轻链序列提供于图1中。另外，氨基酸修饰还可W独立地且任选地在CDR外的区 域，包括框架区和恒定区中进行。
[0131] 在一些实施方案中，本发明的Toso抗体（在本文中也称为"抗Toso"或"抗Toso抗 体"）包含变异Fc结构域。如本领域中已知，抗体的化区与许多Fc受体和配体相互作用，从而 赋予被称为效应功能的一系列重要的功能性能力。运些Fc受体包括但不限于(在人类)中化 丫 RKCD64)，包括同种型Fc 丫 RIa、Fc 丫 Rib和化丫 RIc;Fc 丫 RII (CD32)，包括同种型Fc 丫 RIIa(包括同种异型H131和R131)、化丫 Rllb(包括化丫 RIIb-1和化丫 Rnb-2)和化丫 RIIc; W及化丫 RIII(CD16)，包括同种型Fc 丫 RIIIa(包括同种异型V158和F158,与抗体依赖性细 胞毒性(ADCC)相关）和Fc 丫 RIIIb(包括同种异型Fc 丫 RIIIb-NAl和Fc 丫 RIIIb-NA2)、FcRn (新生儿受体）、Clq(设及补体依赖性细胞毒性(CDC)的补体蛋白）和化化(设及血清半衰期 的新生儿受体）。可W如例如W下文献中所概述在一个或多个位置上进行合适的修饰:US 2004/013210、US 2005/0054832、US 2006/0024298、US 2006/0121032、US 2006/0235208、 US 2007/0148170、美国专利号6,737,056、美国专利号7,670,600、美国专利号6,086,875， 所有文献都W全文引用的方式明确并入，且具体来说是能增加与化受体的结合的特定氨基 酸取代。
[0132] 在其他方面，本发明的Toso抗体包含图1中所提供的任何全长重链或轻链序列。在 其他实施方案中，本发明的Toso抗体包含具有与图1中所提供的任何全长重链或轻链序列 具有约 70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 和 100 %序列同一性的序列。
[0133] 在其他方面，本发明的Toso抗体包含了涵盖如图1W及表1和表2中所提供的CDR序 列的共有序列。所述共有序列可W通过比对CDR序列和通过使用可得自公开数据库的工具 来鉴别。
[0134] 在示例性实施方案中，本发明的Toso抗体包含含有W下共有序列的重链CDR1:G- X1-TFS-X2-Y-X3，其中X