是指 272位上的谷氨酸经酪氨酸置换的变异多肤。为清楚起见，已经过工程改造 W改变核酸编码 序列但不改变起始氨基酸(例如将CGG(编码精氨酸)交换成CGA(仍是编码精氨酸）W增加宿 主生物体表达水平）的蛋白质不是"氨基酸取代"；即，尽管产生了编码相同蛋白质的新基 因，但如果所述蛋白质在特定位置上具有与起始时相同的氨基酸，则其不是氨基酸取代。
[0072] 如本文中所使用的"氨基酸插入"或"插入"意指在亲本多肤序列中的特定位置上 添加氨基酸序列。举例来说，-233E或233E指示在233位之后和在234位之前插入谷氨酸。另 夕h-233ADE或A233ADE指示在233位之后和在234位之前插入AlaAspGlu。
[0073] 如本文中所使用的"氨基酸缺失"或"缺失"意指去除亲本多肤序列中的特定位置 上的氨基酸序列。举例来说，E233-或E233#指示缺失233位上的谷氨酸。另外，EDA233-或 EDA233#指示从233位开始缺失序列GluAspAla。
[0074] 如本文中所使用的"变异蛋白质"或"蛋白质变体"或"变体"意指由于至少一个氨 基酸修饰而与亲本蛋白质不同的蛋白质。蛋白质变体可能是指所述蛋白质本身、包含所述 蛋白质的组合物或编码其的氨基序列。优选地，蛋白质变体与亲本蛋白质相比具有至少一 个氨基酸修饰，例如与亲本相比具有约一至约屯十个氨基酸修饰且优选地具有约一至约五 个氨基酸修饰。在一些实施方案中，亲本多肤，例如化亲本多肤，是人类野生型序列，诸如来 自于IgGl、IgG2、IgG3或IgG4的化区，但具有变体的人类序列也可W充当"亲本多肤"。本文 中的蛋白质变体序列优选地将与亲本蛋白质序列具有至少约80%同一性，且最优选地具有 至少约90%同一性，更优选地具有至少约95%-98%-99%同一性。变异蛋白质可能是指变 异蛋白质本身、包含所述蛋白质变体的组合物或编码其的DNA序列。相应地，如本文中所使 用的"抗体变体"或"变异抗体"意指由于至少一个氨基酸修饰而不同于亲本抗体的抗体，如 本文中所使用的"IgG变体"或"变异IgG"意指由于至少一个氨基酸修饰而不同于亲本IgG (再次，在许多情况下，来自于人类IgG序列）的抗体，且如本文中所使用的"免疫球蛋白变 体"或"变异免疫球蛋白"意指由于至少一个氨基酸修饰而不同于亲本免疫球蛋白序列的免 疫球蛋白序列。如本文中所使用的"Fc变体"或"变异Fc"意指在化结构域中包含氨基酸修饰 的蛋白质。本发明的Fc变体是根据构成其的氨基酸修饰来定义。因此，举例来说，N434S或 434S是相对于亲本化多肤在434位上具有取代丝氨酸的化变体，其中编号是根据指数。同 样，M428L/M34S定义了相对于亲本化多肤具有取代M42化和M34S的Fc变体。可能未规定WT 氨基酸的同一性，在运种情况下，上述变体被称为428L/434S。应指出，提供取代的顺序是任 意的，那就是说，举例来说，428L/434S是与M428L/M34S相同的Fc变体，等等。对于本发明中 所讨论的设及抗体的所有位置，除非另外指出，否则氨基酸位置编号是根据EU指数。如 Rabat或抓编号方案中的抓指数或抓指数是指抓抗体的编号化delman等，1969，Proc化tl Acad Sci USA 63:78-85,?全文引用的方式并入在此）。修饰可W是添加、缺失或取代。取 代可W包括天然存在的氨基酸和在一些情况下合成氨基酸。实例包括美国专利号6，586， 207；W0 98/48032；W0 03/073238；US2004-0214988A1；WO 05/35727A2；WO 05/74524A2； J.W.畑in等，（2002)'Journal of the American 畑emical Society 124:9026-9027; J.W.CMn，&P.G.Schultz, (2002)，ChemBioChem 11:1135-1137;J.W.Chin等，（2002)，PICAS United States of America 99:11020-11024;和L.Wang,&P.G.Schultz,(2002)，Qiem.l- 10,全部W全文引用的方式并入。
[0075] 如本文中所使用，"蛋白质"在本文中意指至少两个共价连接的氨基酸，其包括蛋 白质、多肤、寡肤和肤。肤基可W包含天然存在的氨基酸和肤键，或合成肤模拟结构，即，"类 似物"，诸如类肤(参见Simon等，PNAS USA 89(20) :9367( 1992)，W全文引用的方式并入）。 氨基酸可W是天然存在的或合成的(例如，并非由DNA编码的氨基酸）；如本领域中技术人员 应了解。举例来说，出于本发明的目的，高苯丙氨酸、瓜氨酸、鸟氨酸和正亮氨酸被视为合成 氨基酸，而且可W利用D和L(R或S)构象的氨基酸。本发明的变体可W包含修饰，包括使用例 如由Schultz和同事开发的技术并入的合成氨基酸的使用，包括但不限于W下所描述的方 法：灯〇邮和化ultz，2004，Trends Genet. 20 (12): 625-30; Anderson等，2004，Proc Nat 1 Acad Sci USA 101(2):7566-71;Zhang 等，2003,303(5656):371-3;和畑 in 等，2003， Science301(5635):964-7,全部W全文引用的方式并入。另外，多肤可W包括一个或多个侧 链或末端的合成衍生化、糖基化、PEG化、环状排列、环化、与其他分子的连接子、与蛋白质或 蛋白质结构域的融合和肤标签或标记的添加。
[0076]如本文中所使用的"残基"意指蛋白质中的位置和其相关氨基酸同一性。举例来 说，IgGl中的天冬酷胺297(也称为Asn297或N297)是人类抗体IgGl中297位上的残基。
[0077]如本文中所使用的"Fab"或"Fab区"意指包含VH、CH1、化和CL免疫球蛋白结构域的 多肤。Fab可W指呈分离状态的运个区域或在全长抗体、抗体片段或化b融合蛋白质情况下 的运个区域。如本文中所使用的"Fv"或"Fv片段"或"Fv区"意指包含单一抗体的化和VH结构 域的多肤。
[0078]如本文中所使用的"非天然存在的修饰"意指不是同种型的氨基酸修饰。举例来 说，因为无 IgG在434位上包含丝氨酸，所W IgGl、IgG2、IgG3或IgG4(或其杂合物）中的取代 434S被视为非天然存在的修饰。
[0079]如本文中所使用的"效应功能"意指由抗体化区与化受体或配体的相互作用引起 的生物化学事件。效应功能包括但不限于ADCC、ADCP和CDC。
[0080] 如本文中所使用的"亲本多肤"意指随后经修饰W产生变体的起始多肤。亲本多肤 可W是天然存在的多肤或天然存在的多肤的变体或工程改造版本。亲本多肤可W指多肤本 身、包含所述亲本多肤的组合物或编码其的氨基酸序列。相应地，如本文中所使用的"亲本 免疫球蛋白"意指未经修饰的免疫球蛋白多肤，其经修饰W产生变体，且如本文中所使用的 "亲本抗体"意指未经修饰的抗体，其经修饰W产生变异抗体。应指出，"亲本抗体"包括如W 下所概述的已知的市售重组产生的抗体。
[0081] 如本文中所使用的"位置"意指蛋白质序列中的位置。位置可依序或根据确定的格 式，例如用于抗体编号的抓指数进行编号。
[0082] 如本文中所使用的"祀抗原"意指被指定抗体的可变区特异性结合的分子。祀抗原 可W是蛋白质(诸如Toso蛋白）、碳水化合物、脂质或其他化合物。
[0083] 如本文中所使用的"祀细胞"意指表达祀抗原的细胞。
[0084] 如本文中所使用的"可变区"意指包含基本上由分别组成κ、λ和免疫球蛋白重链基 因座的νκ、νλ和/或VH基因中的任一个编码的一个或多个Ig结构域的免疫球蛋白区域。
[0085] "野生型或WT"在本文中意指在自然界中发现的氨基酸序列或核巧酸序列，包括等 位基因变异。WT蛋白质具有尚未有意修饰的氨基酸序列或核巧酸序列。
[0086] 尽管主要参考具体实施方案描述了描述本发明，但也预见了在阅读本公开内容后 其他实施方案对于本领域技术人员将显而易见，并且希望所述实施方案包含在本发明方法 内。 巧087] I.发明概述
[0088]本发明设及用于调节Toso蛋白（其在本文中还被可互换地称为"Toso"或"Toso受 体"或"Faim3"或"FCMR")的活性的方法和组合物。本发明的方法和组合物可W根据且在一 些实施方案中与调节Toso蛋白的活性的其他已知方法组合使用，举例来说，诸如2013年3月 14日提交的USSN 13/831，031中所描述的那些方法，该史献的全史且具体来说是与调节 Toso蛋白的活性的方法和组合物有关的任何公开内容、权利要求、附图或其他教导内容出 于所有目的W引用的方式并入在此。
[0089] 在一些实施方案中，本发明的方法和组合物可增加 Toso蛋白的活性。在其他实施 方案中，本发明的方法和组合物可抑制Toso蛋白的活性。
[0090] 在某些方面，用于调节Toso蛋白的活性的组合物包括能结合Toso蛋白或Toso蛋白 的配体的药剂。在其他实施方案，本发明的组合物包括能结合Toso蛋白或Toso蛋白的配体 的抗体。
[0091] 本发明进一步设及通过施用在受试者中调节Toso活性的抗体来治疗病症和疾病 的方法。如本文中更详细论述，本发明的抗体可用于治疗罹患不限于W下各项疾病的受试 者：II型糖尿病、自身免疫性病症(包括但不限于1型糖尿病、多发性硬化或类风湿性关节 炎）、哮喘、过敏、慢性阻塞性肺病rCOPD")、高IgM综合征、化L、狼疮或中性白细胞增多相关 病症(包括但不限于中性粒细胞减少、严重先天性中性粒细胞减少、环形中性粒细胞减少、 抗体介导的中性粒细胞减少、网状细胞发育不全、白细胞粘附缺陷、家族性骨髓增生性疾 病、慢性骨髓性白血病、家族性冷激性等麻疹和白细胞增多W及慢性肉芽肿病）。
[0092] II.针对Toso的抗体
[0093] 本发明的抗体调节Toso活性。在一些实施方案中，本发明的抗体能增加 Toso活性。 在其他实施方案中，本发明的抗体能降低Toso活性。在一些实施方案中，本发明的抗体直接 结合Toso蛋白。在其他实施方案中，本发明的抗体结合Toso蛋白的配体。在其他实施方案 中，本发明的抗体与中间蛋白质或其他分子结合或W其他方式相互作用，并且通过与所述 中间蛋白质或其他分子的相互作用间接地影响Toso活性。
[0094] 制备抗体的方法在本领域中一般是已知的。举例来说，美国专利号6,727,350讨论 了 Toso抗体和用于制备其的方法，并且其全文且具体来说是与针对Toso蛋白的抗体有关的 所有教导内容出于所有目的在此W引用的方式并入。
[0095] 在一些实施方案中，使用本领域中已知的和本文中更详细描述的方法，通过隧菌 体展示筛选来鉴别本发明的抗体。在其他实施方案中，所述方法将包括通过将隧菌体展示 筛选的结果克隆到人类IgG的表达载体中来产生完全人类抗体。
[0096] 用于本发明的抗体可W呈如本文中所描述的多种形式，包括下文所描述的传统抗 体W及抗体衍生物、片段和模拟物。一般来说，术语"抗体"包括了包括至少一个恒定结构域 (包括但不限于CH1、C肥、C册和化)的任何多肤。
[0097] 传统抗体结构单元典型地包含四聚体。各四聚体典型地由两对同一的多肤链构 成，各对具有一个"轻"链(典型地具有约25kDa的分子量)和一个"重"链(典型地具有约50至 70W)a的分子量）。人类轻链分类为K和λ轻链。本发明设及IgG类别，其具有若干个亚类，包括 但不限于IgGl、IgG2、IgG3和IgG4。因此，如本文中所使用的"同种型"意指由其恒定区的化 学特征和抗原特征定义的任何免疫球蛋白亚类。应理解，治疗抗体还可W包含同种型和/或 亚类的杂合物。
[0098] 各链的氨基末端部分包括约100至110或更多个氨基酸的主要负责抗原识别的可 变区，在本领域中和本文中一般被称为"Fv结构域"或"Fv区"。在可变区中，针对重链和轻链 的各V结构域的Ξ个环聚集w形成抗原结合位点。各环被称为互补性决定区（下文称为 "CDR")，其中氨基酸序列中的变异最显著。"可变"是指可变区的某些节段的序列在抗体中 在序列方面广泛差异。可变区内的变异性不均匀分布。相反，V区由被称为"高变区"的各自 为9至15个氨基酸长或更长的极端变异性较短区域隔开的称为框架区(FR)的具有15至30个 氨基酸的相对不变的区段组成。
[0099] 各VH和化由Ξ个高变区Γ互补性决定区"，"CDR")和四个F財勾成，从氨基末端到簇 基末端按 W 下顺序排列：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
[0100] 高变区一般涵盖轻链可变区中的约氨基酸残基24至34化CDR1; "L"表示轻链）、50 至56化CDR2)和89至97化CDR3)的氨基酸残基和重链可变区中的约31至35B化CDRl;"tf'表示 重链）、50至65(HCDR2)和95至 102(HCDR3);Kabat等，SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST,第5版.Public Health Service,化tional Institutes of 化曰1*}1，86*}163(1曰，1(1.(1991)，和/或形成高变环的那些残基（例如轻链可变区中的残基26 至32化CDR1)、50至52(LCDR2)和91至96(LCDR3)和重链可变区中的26至32化CDR1)、53至55 化 CDR2)和 96 至 l〇UHCDR3);Chothia 和 Lesk(1987)J.Mol.Biol.l96:901-917eW 下描述本 发明的特定CDR。
[0101] 贯穿本说明书，当提到可变结构域(大约轻链可变区中的残基1至107和重链可变 区中的残基1至113)中的残基时一般使用Kabat编号系统(例如Kabat等，同上（1991))。
[0102] CDR有助于形成抗体的抗原结合或更具体来说表位结合位点。"表位"是指与抗体 分子的可变区中被称为互补位的特定抗原结合位点相互作用的决定子。表位是诸如氨基酸 或糖侧链的分子的组群且通常具有特定的结构特征W及特定的电荷特征。单一抗原可W具 有多于一个表位。
[0103] 表位可W包含直接设及结合的氨基酸残基(也称为表位的免疫显性组分)和不直 接设及结合的其他氨基酸残基，诸如被特异性抗原结合肤有效阻断的氨基酸残基;换句话 说，氨基酸残基在特异性