Rev.Immunol.2008;8(l):34-47,Koh;rt等.， Immunotherapy 2012;4(5):511-527)。具有 158V多态性的FCRG3A(CD16)基因 （SEQ ID NO.: 10)被用作示例来构建本发明的嵌合受体。运种变体编码对Ig具有更高亲和力的受体，并已 显示介导优越的 ADCC(Ferris等，J. Clin. Oncol. 2010 ; 28 (28) :4390-4399 ;Koene 等， Bloodl997; 90(3) : 1109-1114; Cartron等，Blood 2002; 99(3) :754-758 ;Weng等， J. Clin. Oncol. 2003; 21 (21): 3940-3947 ;Dair〇zzo 等，Cancer Res. 2004; 64( 13) :4664- 4669;Hatjiharissi等，Blood 2007; 110(7):2561-2564;Musolino等，J.Clin.Oncol.2008; 26(11):1789-1796;Bibeau等，J.Clin.Oncol.2009;27(7):1122-1129;Ahlgrimm等，Blood 2011; 118(17) :4657-4662;Veeramani等，Blood 2011; 118( 12):3:347-3349)。事实上，与含 有更普遍FI58变体的嵌合受体作边到边的比较（side-to-side comparison)，CD16V-BB-C 对人Ig Fc具有显著更高的结合能力，诱导更强烈的增殖和细胞毒性，产生最近的研究结 果，从而定位亲和力在嵌合抗原受体功能中的作用化ono等，Cancer Res .2002; 62(20): 5813-5817;Delgado等，Cancer Res.2010;70(23):9554-956)。当前"第二代"嵌合受体将刺 激分子与共刺激分子结合W增强信号传导和防止活化诱导的调亡。因此，CD16V158与由CD3 ζ和4-lBB(CD137)串联组成的刺激分子结合。事实上，与通过单独CD3C或化εΚΙ 丫起作用的 受体相比，CD16V-BB-C受体诱导明显更优越的Τ细胞活化，增殖和细胞毒性。
[0140] 临床试验结果不断证实，表达识别肿瘤细胞表面抗原并可传导刺激信号的受体的 遗传学改造 Τ细胞的临床潜力（Pule等，Nat.Med . 2008 ; 14( 11): 1264-1270 ;Porter等， OncLive 2011;25;365(8):725-733;化enjens等，Blood 2011;118(18):4817-4828;Till 等，Blood 2012; 119( 17): 3940-3950 ;Kochenderfer等，Blood 2012; 119( 12): 2709-2720; Brent jens 等，Sci.Transl.Med. 2013; 5(177) :177ral38)。最值得注意的是，显著的肿瘤减 少和/或完全消退在B细胞恶性肿瘤患者中有报道，运些患者接受了通过病毒转导表达针对 CD19或CD20的嵌合抗原受体的自体T淋己细胞(Porter等，OncLive 2011;25;365(8):725- 733;化enjens等，Blood 2011; 118( 18) :4817-4828;Till等，Blood 2012; 119(17) :3940- 3950;Kochenderfer等，Blood 2012;1 19( 12):2709-2720 ; Brentjens等， Sci.Transl.Med.2013;5(177):177ral38)。将运种策略扩展至其它肿瘤需要相当大的努 力，包括开发另一种嵌合抗原受体构建物，优化大规模转导条件W符合规范要求。在运方 面，本文描述的CD16V-BB-C受体通过允许一种受体用于多种癌症细胞类型来促进T细胞疗 法的实施。它还允许同时祀向多种抗原，该策略对于肿瘤利用的免疫逃逸机制最终可能是 有利的，如最近的报道所掲示的，缺乏单一特异性的嵌合受体所祀向的标记物的亚克隆导 致白血病复发。无论何时需要，通过简单的停止抗体施用可结束抗体导向的细胞毒性。由于 表达CD 16V-B Β-ζ的T细胞仅被结合于祀细胞的抗体所激活，可溶性免疫球蛋白对输注的 Τ细胞不发挥任何刺激作用。然而，通过使用mRNA电穿孔W瞬时表达CD 16V-B Β-ζ受体从 而限制任何潜在的自体免疫反应性来测试该策略的临床安全性是重要的。如本文所掲示， mRNA电穿孔能非常有效地表达该受体。
[0141] 抗体疗法已成为许多癌症亚型的标准疗法;其临床疗效主要取决于其通过化受体 接合触发 ADCC 的能力巧 erris 等.，J. Clin. Oncol. 2010; 28(28) :4390-4399) eADCC 的主要效 应子是NK细胞，但它们的功能可在癌症患者中受损。例如，据报道，与来自早期疾病患者或 健康献血者样品中所得到外周血单核细胞相比，来自胃癌患者和晚期患者的外周血单核细 胞的过表达皿R2的胃癌细胞的曲妥珠单抗介导的ADCC显著降低。此外，反应可能受到其他 因素的影响，包括NK细胞抑制受体及其配体的基因型。本发明所呈现的结果表明，输注由 CD16V- B B -ζ受体作遗传学工程改造的自体T细胞应该显著提高ADCC。因为组合CD3C/4- 1ΒΒ信号也导致Τ细胞增殖，在肿瘤部位应有活化Τ细胞的累积，运可能会进一步增强它们的 活性。CD16V-B Β-ζ受体不仅可在活化的Τ淋己细胞中还可在休眠的外周血单核细胞中通 过mRNA电穿孔表达，该过程从血液采集到CD 16V- Β Β -ζ表达细胞注入仅需几个小时，因此 非常适合临床应用。
[0142] 本发明不限于本文所述的【具体实施方式】的范围。事实上，前述描述中，除那些本文 所描述的之外，本发明的各种修改对于那些本领域人员是显而易见的。运种修改也将落入 所附权利要求的范围内。
[0143] 所有专利、申请、出版物、试验方法、文献和本文所列其他材料，其全部通过引用并 入本文，如同实际存在于本说明书中一样。
[0144] 序列表
[0145]
[0146]
[0147]
[014 引
【主权项】
1. 一种嵌合受体，其包含：（a)F158FCGR3A或V158FCGR3A变体的胞外配体一结合区；（b) CD8a的铰链区和跨膜区；和(c)包括4-1BB信号传导区和CD3G信号传导区的胞浆区。2. 权利要求1所述的嵌合受体，其中所述嵌合受体还包含CD8a的信号肽。3. 权利要求1或2所述的嵌合受体，其中所述F158FCGR3A和V158FCGR3A变体的胞外配 体一结合区分别由SEQ ID NO: 16和SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成。4. 权利要求1 - 3任一项所述的嵌合受体，其中所述C D 8 α的铰链区和跨膜区由S E Q ID Ν0:3所示的氨基酸序列组成。5. 权利要求1-4任一项所述的嵌合受体，其中所述4-1ΒΒ信号传导区由SEQ ID Ν0:4所 示的氨基酸序列组成。6. 权利要求1-5任一项所述的嵌合受体，其中所述CD3G信号传导区由SEQ ID Ν0:5所示 的氨基酸序列组成。7. 权利要求2-6任一项所述的嵌合受体，其中所述⑶8α的信号肽由SEQ ID Ν0:6所示的 氨基酸序列组成。8. 权利要求1所述的嵌合受体，其包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 15的所示的氨基酸序 列的第22-436残基。9. 权利要求1所述的嵌合受体，其包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序 列。10. -种分离的多核苷酸，其包含编码权利要求1-9任一项所述的嵌合受体的核苷酸序 列。11. 权利要求10所述的分离的多核苷酸，其包含SEQ ID N0:9或SEQ ID NO: 17所示的核 苷酸序列。12. 权利要求10所述的分离的多核苷酸，其包含SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 18所示的 核苷酸序列。13. 权利要求10或权利要求12所述的分离的多核苷酸，其包含SEQ ID NO: 11所示的核 苷酸序列。14. 权利要求10、12或13所述的分离的多核苷酸，其包含SEQ ID NO: 12所示的核苷酸序 列。15. 权利要求10和12-14任一项所述的分离的多核苷酸，其包含SEQ ID NO: 13所示的核 苷酸序列。16. 权利要求10和12-15任一项所述的分离的多核苷酸，其包含SEQ ID NO: 14所示的核 苷酸序列。17. -种药物组合物，其包含权利要求10-16任一项所述的多核苷酸和药学上可接受的 载体或赋形剂。18. -种载体，其包含权利要求10-16任一项所述的多核苷酸。19. 权利要求18所述的载体，其中所述多核苷酸操作性地与至少一个调控元件连接，以 便表达所述多核苷酸编码的嵌合受体。20. 权利要求18或19所述的载体，其为病毒载体。21. 权利要求20所述的载体，其中所述病毒载体为逆转录病毒载体或慢病毒载体。22. -种分离的宿主细胞，其包含权利要求1-9任一项所述的嵌合受体。23. 权利要求22所述的宿主细胞，其为T淋巴细胞或NK细胞。24. 权利要求23所述的宿主细胞，其中所述T淋巴细胞或NK细胞经离体活化和/或扩增。25. 权利要求24所述的宿主细胞，其中所述T淋巴细胞在有一种或多种选自下组的试剂 存在下被活化:抗-⑶3/⑶28，IL-2，和植物凝集素。26. 权利要求24所述的宿主细胞，其中所述NK细胞在有一种或多种选自下组的试剂存 在下被活化：CD137配体蛋白，CD137抗体，IL-15蛋白，IL-15受体抗体，IL-2蛋白，IL-12蛋 白，IL-21蛋白，和K562细胞系。27. 权利要求25或26所述宿主细胞，其为分离自癌症患者的自体T淋巴细胞或自体NK细 胞。28. 权利要求25或26所述宿主细胞，其为同种异体T淋巴细胞或同种异体NK细胞。29. 权利要求28所述的宿主细胞，其中，所述同种异体T淋巴细胞中的内源性T细胞受体 得到抑制或消除。30. -种药物组合物，其包含权利要求18 - 21任一项所述的载体或权利要求22 - 29任 一项所述的宿主细胞，以及药学上可接受的载体或赋形剂。31. 权利要求30所述的药物组合物，其进一步包含对癌细胞施加细胞毒性的抗体。32. 权利要求31所述的药物组合物，其中所述抗体与癌细胞结合并具有与人CD16结合 的人的或人源化的Fc部分。33. 权利要求31所述的药物组合物，其中所述抗体选自下组:利妥昔单抗、曲妥珠单抗、 hul4.18K322A、依帕珠单抗、西妥昔单抗和拉贝珠单抗。34. -种增强有此需要的个体中基于抗体的癌症免疫治疗的疗效的方法，所述方法包 含将治疗有效量的T淋巴细胞或NK细胞施用于该个体，所述细胞表达权利要求1 一 9任一项 所述的嵌合受体，其中所述个体正在接受结合于癌细胞的抗体治疗。35. 权利要求34所述的方法，其中所述抗体具有与人CD16结合的人的或人源化的Fc部 分。36. 权利要求34或35所述的方法，其中所述癌症选自下组:腺癌、淋巴瘤、肉瘤、母细胞 瘤和白血病。37. 权利要求34或35所述的方法，其中所述癌症选自下组:B-细胞来源的癌症，乳腺癌， 胃癌，神经母细胞瘤，骨肉瘤，肺癌，黑色素瘤，前列腺癌，结肠癌，肾细胞癌，卵巢癌，横纹肌 肉瘤，白血病和霍奇金氏淋巴瘤。38. 权利要求37所述的方法，其中所述B-细胞来源的癌症选自下组:B细胞急性淋巴细 胞白血病，B细胞慢性淋巴细胞白血病和B细胞非霍奇金淋巴瘤。39. 权利要求34所述的方法，其中所述抗体选自下组：利妥昔单抗，曲妥珠单抗， hul4.18K322A，依帕珠单抗，西妥昔单抗和拉贝珠单抗。40. 权利要求34 - 39任一项所述的方法，其中所述T淋巴细胞或NK细胞为分离自所述个 体的自体T淋巴细胞或自体NK细胞。41. 权利要求40所述的方法，其中，在施用于个体之前，所述自体T淋巴细胞或自体NK细 胞经离体活化或扩增。42. 权利要求34 - 39任一项所述的方法，其中所述T淋巴细胞或NK细胞为同种异体T淋 巴细胞或同种异体NK细胞。43. 权利要求42所述的方法，其中所述同种异体T淋巴细胞为抑制了或消除了内源性T 细胞受体表达的Τ淋巴细胞。44. 权利要求42或43所述的方法，其中，所述在施用于个体之前，所述同种异体Τ淋巴细 胞或同种异体ΝΚ细胞经离体活化和/或扩增。45. 权利要求34 - 44任一项所述的方法，其中，用选自下组的方法将所述嵌合受体引入 所述Τ淋巴细胞或ΝΚ细胞:逆转录病毒转导，慢病毒转导，DNA电穿孔和RNA电穿孔。46. -种增强个体中Τ淋巴细胞或ΝΚ细胞抗体一依赖细胞毒性(ADCC)的方法，所述方法 包括将治疗有效量的Τ淋巴细胞或ΝΚ细胞施用给该个体，所述细胞表达权利要求1-9任一项 所述的嵌合受体。47. 权利要求46所述的方法，其中所述个体正在接受与癌细胞结合的抗体治疗。48. 权利要求47所述的方法，其中所述抗体具有与人CD16结合的人的或人源化的Fc部 分。49. 权利要求47所述的方法，其中所述抗体选自下组：利妥昔单抗，曲妥珠单抗， hul4.18K322A，依帕珠单抗，西妥昔单抗和拉贝珠单抗。50. 权利要求46-49任一项所述的方法，其中所述个体为具有癌症的人患者。51. 权利要求50所述的方法，其中所述癌症选自下组:腺癌、淋巴瘤、肉瘤、母细胞瘤和 白血病。52. 权利要求50所述的方法，其中所述癌症选自下组:B-细胞来源的癌症，乳腺癌，胃 癌，神经母细胞瘤，骨肉瘤，肺癌，黑色素瘤，前列腺癌，结肠癌，肾细胞癌，卵巢癌，横纹肌肉 瘤，白血病和霍奇金氏淋巴瘤。53. 权利要求53所述的方法，其中所述B-细胞来源的癌症选自下组:B细胞急性淋巴细 胞白血病，B细胞慢性淋巴细胞白血病，和B细胞非霍奇金淋巴瘤。54. 权利要求46-53任一项所述的方法，其中所述T淋巴细胞或NK细胞为分离自个体的 自体T淋巴细胞或自体NK细胞。55. 权利要求54所述的方法，在施用给个体之前，所述自体T淋巴细胞或自体NK细胞经 离体活化或扩增。56. 权利要求46-53任一项所述的方法，其中所述T淋巴细胞或NK细胞为同种异体T淋巴 细胞或同种异体NK细胞。57. 权利要求56所述的方法，其中所述同种异体T淋巴细胞为抑制了或消除了内源性T 细胞受体表达的T淋巴细胞。58. 权利要求56或57所述的方法，其中在施用给个体之前，所述同种异体T淋巴细胞或 同种异体NK细胞经离体活化和/或扩增。59. 权利要求46-58任一项所述的方法，其中用选自下组的方法将所述嵌合受体引入所 述T淋巴细胞或NK细胞:逆转录病毒转导，慢病毒转导，DNA电穿孔和RNA电穿孔。60. 权利要求41、44、55和58任一项所述的方法，其中所述T淋巴细胞可在选自下组的一 种或多种试剂存在下被活化:抗-CD3/CD28，IL-2，和植物凝集素。61. 权利要求41、44、55和58任一项所述的方法，其中所述NK细胞可在选自下组的一种 或多种试剂存在下被活化:CD137配体蛋白质，CD137抗体，IL-15蛋白，IL-15受体抗体，IL-2 蛋白，IL-12蛋白，IL-21蛋白，和K562细胞系。 2〇62.权利要求34-61任一项所述的方法，进一步包括给所述个体施用治疗有效量的IL-
【专利摘要】本发明涉及结合人免疫球蛋白Fc部分并递送活化信号的嵌合受体。本发明的嵌合受体可包含F158？FCGR3A或高亲和V158？FCGR3A变体的胞外配体－结合区，CD8α的铰链区和跨膜区，和CD3ζ和4-1BB的信号传导区。本发明的嵌合受体对利妥昔单抗、曲妥珠单抗、hu14.18K322A和其它治疗抗体具有高亲和力，使其可用于增强针对各种癌症的抗体治疗效果。
【IPC分类】C07K16/28, C07K14/47, C07K14/705
【公开号】CN105683214
【申请号】
【发明人】D·坎帕纳, K·酷杜
【申请人】新加坡国立大学, 圣朱迪儿童研究医院
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2014年10月17日