发明人对上述实施方案的每一个关键步骤进行优化，从而提供在商业规模下可W 得到的非常高纯度的产品，并且该方法具有最少的人工操作步骤。只有优化了才可W清楚 地看到，利用如此少量的简单的高度自动化步骤可w得到药用纯度或更高纯度的产品。
[0141] 实施例1-阴离子交换柱
[0142] 1.1错-223在阴离子柱上的产率
[0143] 在错-223纯化方法的发展中，错-223的方法产率是极为重要的。为了确定得到高 产率错-223所应使用的溶剂的量，将纯的错-223装载至充填了Dowex 1-X8 200-400目阴离 子颗粒的2.0ml筒柱（cartridge column)。
[0144] 分别用80 %、82.5 %和85 %甲醇将错-223从3个不同的柱子洗脱。3个实验的HW)3 浓度均为0.5M。确定此层析步骤中获得约95 %产率的错-223所需要的体积。
[0145] 图1给出了适合的实验装置，W确定错-223在充填了Dowex AG1-X8 200-400目颗 粒的2ml阴离子柱上的产率。所有的错-223用2ml洗脱液稀释，装载上柱，然后用同样的甲 醇/HN03洗涂。
[0146] 图2给出了错-223从充填了 AG 1-X8 200-400目颗粒的2ml阴离子交换柱的洗脱曲 线，其中给出了 Ξ种不同的甲醇的0.5M HN03溶液的浓度。
[0147] 注:被洗涂的柱子也包括于图中，W得到错-223的总浓度。
[014引评述
[0149] 随着甲醇的浓度增加，错-223从阴离子树脂的洗脱减慢。
[0150] 1.2涧-227从阴离子柱的漏出。
[0151] 为了将大部分的涧-227保留在阴离子交换树脂上，初始的实验表明甲醇浓度必须 为80%或更高。当硝酸浓度定于0.5M时，该结论正确。如果硝酸浓度增加，甲醇的浓度可W 降低，可W得到相同的结果。
[0152] 当使用10ml的70%甲醇与0.5M HN03组合时，约25%的涧-227从阴离子柱漏出进 入错-223洗脱物（见表1)。如果甲醇浓度增大到80%，当使用相同量的洗脱液（10ml)时，少 于0.2%的涧-227从阴离子柱漏出（见表1)。
[0153] 表1.从充填了Dowex 1-X8 200-400目颗粒的2ml筒柱洗脱的错-223洗脱物中涧- 227的量。
[0154]
[0155] 上述结果清楚表明，涧-227从树脂的漏出取决于甲醇的浓度。并且，甲醇的浓度微 小的变化会对涧-227的漏出产生很大的影响。
[0156] 上述表格清楚表明，要将大部分的涧-227保留，与0.5M HN03合用时的甲醇浓度必 须为80%或更高。基于此，构建一个实验对80-85%甲醇与0.5M HN03的组合进行研究。
[0157] 图3给出了适合的装置，W检测从阴离子柱漏出的涧-227。所有的柱子都充填 Dowex AG1-X8 200-400目颗粒。运行条件为0.5M HN03与80%、82.5%和85%甲醇分别组 合。在所有的运行中均使用带有ISOM^i涧的发生元素。所有的涧-227样品稀释于2ml的洗脱 液，装载上柱，用同样的甲醇/HN03溶液洗涂。
[0158] 表2 180M的的涧-227源装载至充填Dowex AG1-X8 200-400目颗粒的2ml筒柱上之 后，洗脱物（阳离子柱）中涧-227的检测值
[0159]
[0161] *在该方法中，为了得到95%产率的错-223,本实验中使用的洗脱液体积可变。
[0162] **分离后40-50天内进行检测。
[0163] 讨论
[0164] 结果显示使用更大体积W及更高浓度的甲醇能减少涧-227漏出。本实验所用的体 积基于得到约95%产率错-223所需的体积。
[0165] 可W观察到大部分的涧-227被柱子保留。为满足药品中关于涧-227的量的规范， "保留的"涧-227和"漏出的"涧227的分离比率应当为约3.0*104。所有的实验都满足该标 准。在85%甲醇的条件下的分离比率是该标准的15倍。
[0166] 从阴离子柱漏出的涧-227极少，因此将不会对整个方法中涧-227的回收产生任何 影响。该分离步骤是整个层析过程中的第一步，也是最重要的一步。其表明，在制备洗脱液 时，严格控制甲醇的浓度是非常重要的。此对于实现涧-227低的柱漏出是非常关键的，因此 应十分注意甲醇浓度与期望的HN03浓度之间的关联。
[0167] 可能可W使用更高浓度的甲醇W实现更好的分离。但体积会更大，并且分离时间 和废弃体积会增加。
[0168] 实施例2-阳离子交换柱。
[0169] 该层析步骤的主要目的为：
[0170] 俘获层析步骤1得到的错-223。
[0171] 去除在第一分离步骤中使用的大部分的甲醇。
[0172] 进一步纯化/精制从涧-227分离的错-223。
[0173] 2.1 俘获错-223
[0174] 本发明研发过程中发现，当酸的摩尔浓度在1M或更低的范围内时，适合的阳离子 交换柱可W结合错-223。当洗脱液中含有甲醇时，Dowex 50W-X8阳离子交换介质对错-223 显示出额外增强的亲和性。
[0175] 本发明研发过程中证实，错-223对适合的阳离子交换树脂具有高的亲和性。在 85 %甲醇/0.5M HN03条件下，将60ml的错-223洗脱物抽吸通过0.5ml阳离子柱，所有错-223 均被俘获。
[0176] 2.2去除甲醇
[0177] 甲醇为二类溶剂，优选药物产品中甲醇含量应保持尽可能低。该溶剂的PDE(个人 每天摄入量）不应超过30mg/天。药液中的甲醇含量应低于3000ppm(欧洲药品管理局 化MEA))。
[0178] 约99.75%的本方法中用到的甲醇只需通过简单地将洗脱液通过柱子至废液即可 去除。此为本方法中最主要的去除甲醇的步骤。由于阳离子树脂的体积较小（例如只有 0.5ml )，该层析步骤之后保留在柱中的甲醇的量很低。
[0179] 粗略的估计，充填了 200-400目Dowex 50W-X8阳离子交换树脂的0.5ml柱子含有约 0.15ml液体甲醇，或柱抽干后含有约lOOmg的甲醇。如果所有运些甲醇都转移到药品中，所 述洗脱物必需制备大于4个剂量，W满足PDE30mg/天的要求。必须将洗脱物稀释，从而使甲 醇的含量低于EMEA第5号文件(ref 5)规定的3000ppm。。
[0180] 2.3 错-223 的产率
[0181] 对于实现有效的纯化错-223的方法，将方法中每一个步骤中错-223的损耗降至最 低是非常重要的。构建一个实验W确定从0.5ml阳离子交换柱得到95%产率错-223所必需 的洗脱液的量。该阳离子柱充填了Dowex 50W-X8 200-400目颗粒。被测的歷化浓度为1.3、 1.45和1.61。
[0182] 图5给出了错-223在充填了Dowex 50W-X8的200-400目颗粒的0.5ml柱上的洗脱的 实验装置。被测的洗脱液为1.3M、1.45M和1.6M HN03
[0183] 图6给出了图5的实验装置得到的错-223的洗脱曲线。
[0184] 评述
[0185] 发现在HN03浓度时，错-223在树脂上的亲和性增加。
[0186] 从柱子上洗脱例如95%的错-223所必须的体积随着HN03浓度降低而增大。
[0187] 表3给出了，在不同浓度的HN03下，从充填了Dowex 50W-X8(200-400目）颗粒的小 型阳离子柱洗脱的错-223累积产率，其对应于图6中的数据。 「01881
[0189] 评述
[0190] 从上述结果可W得到，1.3M、1.45M和1.6MHN03条件下从充填了Dowex 50W-X8树脂 (200-400目）的0.5ml柱洗脱的错-223的洗脱曲线。被测的最低的和两个最高的HN03浓度之 间具有显著差别。为了得到约95%产率的错-223,必须使用下列体积和浓度的HN03:
[0191] 1.30M HN03： 32ml
[0192] 1.45M HN03： 20ml
[0193] 1.60M HN03： 16ml
[0194] 为了选择方法中应该使用的HN03的浓度，应对上述测试的HN化浓度下的错-223和 涧-227的分离比率进行研究。该实验如下所述：
[01巧]2.4错-223/涧-227分离比率
[0196] 前述实施例阐述了从充填了Dowex 50W-X8(200-400目）颗粒的0.5ml柱洗脱95% 的错-223所必须使用的HN化的体积和浓度。还需要测定在同等条件下错-223和涧-227之间 的分离比率。
[0197] 本实验中的装置与图5给出的装置类似，除了使用涧-227作为样品。
[0198] 将0.5M^i的与其子体核素处于平衡状态的涧-227样品装载至0.5ml柱。
[0199] 此实验中歷化的体积和浓度与前述实施例中得到95%产率错-223中的体积和浓 度相同。
[0200] 图7和表4给出了错-223和涧-227的分离比率。涧-227的检测是基于涧-227的子体 核素社-227的内向生长。
[0201] 图7给出了HN03浓度，W及从充填了Dowex 50W-X8(200-400目）颗粒的0.5ml阳离 子树脂得到的洗脱物中错-223和涧-227(Bq)之间的分离比率。
[020^ 评述
[0203] 已确定错-223和涧-227之间的分离比率与使用的HN化的摩尔浓度之间具有线性 关系。
[0204] 表4给出了浓度和体积，W及从充填了Dowex 50W-X8(200-400目）阳离子颗粒的 0.5ml筒柱得到的洗脱物中错-223和涧-227(Bq)的分离比率。
[0205]
[0206] ~*从0.5ml阳离子树脂得到95%产率的错-223所使用的体积 '
[0207] 结论
[020引随着HW)3摩尔浓度增加，错-223和涧-227在阳离子树脂上的分离效果增强。在 1.3M HN化时，得到此情况下最好的错-223和涧-227分离效果。根据该结果，选定的层析步 骤的条件为1.3M HN03和30-35ml的洗脱液。错-223的产率约为95%。错-223和涧-227的分 离比率(Bq)接近800。
[0209] 可能可W采用更低浓度的酸W实现更好的分离。但体积将增大，并且分离时间和 废弃体积将增加。
[0210] 2.6错洗脱物的纯度：
[0211] 如果在阴离子交换层析步骤中使用85 %甲醇/0.5M HN03，错-223与保留的涧-227 的分离比率为约4.7*105。阳离子交换层析步骤中，在适当条件下错-223与涧-227的分离比 率为约750。
[0212] 所述两个核素之间总的分离比率(Bq)在下列范围：
[0213] 4.7*1〇5*750 = 3.5*1〇8
[0214] 3.涧-227和社-227的再生