一种评估肝癌预后的试剂盒的利记博彩app
【专利说明】
[00011 本申请是分案申请，其原申请的国际申请号为PCT/KR2010/002373，中国国家申请 号为201080021390.0，申请日为2010年4月16日，发明名称为"肝癌预后标记物"。
技术领域
[0002] 本发明涉及一种评估肝癌预后的试剂盒，还涉及肝癌预后标记物(marker for prognosis of liver cancer);涉及用于评估肝癌预后的组合物，该组合物包含能够检测 所述肝癌预后标记物的表达水平的变化的物质；涉及用于评估肝癌预后的试剂盒，该试剂 盒包含所述用于评估肝癌预后的组合物;涉及使用所述肝癌预后标记物进行肝癌预后评估 的方法；以及涉及使用所述肝癌预后标记物来筛选肝癌的治疗剂的方法。
【背景技术】
[0003] 癌症与恶性肿瘤有相同的意义。它是指这样一种疾病，由于各种原因，调节细胞增 殖的功能受到损害，因此异常的细胞不受控制并过度增殖从而穿透至周围的组织和器官， 形成块状物并破坏正常的组织。由于癌症的快速生长、渗透性的（穿透性的或扩散的）生长、 扩散(从其发生区域移动很远）等原因，源于人体内各种组织的癌症会给人的生命带来危 险。
[0004] 在癌症当中，已知肝癌是世界上最致命的癌症之一。尤其是，据报导称，在亚洲和 次撒哈拉的非洲区，每年至少约有50万人死于肝癌。肝癌主要分为起源于肝细胞自身的肝 细胞癌和癌症由其他组织扩散至肝脏的转移性肝癌。大约至少90%的肝癌为肝细胞癌，通 常理解术语肝癌是指肝细胞癌。
[0005] 据报导大多数肝癌的起因是受到乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒的急性或慢性感 染。然而，有关肝癌发生和发展的细胞内的分子机制还没有被阐明。根据传统研究，据报导 称在诸如各种生长因子基因等原癌基因由于各种原因突变成癌基因而过度表达或过度激 活的情况下，或者在诸如Rb蛋白或p53蛋白之类的肿瘤抑制基因由于各种原因突变而低表 达或丧失功能的情况下，可以引起包括肝癌在内的多种癌症的发生和发展。尤其是，关于肝 癌，已经证实例如经修饰的ρ53、β-连环蛋白（beta-catenin)、AXINI、p21 (WAF1/CIP1)和 p27Kip等基因为与其相关。但是，近来认识到，包括肝癌在内的大多数癌症的发生和发展并 不由于单独的特定基因，而是由于与细胞周期、信号传递等有关的多种基因的复杂相互作 用。因而，有必要从只集中在个别的基因或蛋白的表达或功能中脱离出来，而进行对各种基 因或蛋白的整体研究。
[0006] 肝癌的预后是指预见患有肝癌的患者的各种情况，例如从肝癌中全面康复的可能 性，经治疗后复发的可能性，肝癌诊断后患者生存的可能性等等。这可以根据疾病的严重 性、诊断时间、治疗进展等各种情况而变化。只有根据其预后适当地应用各种治疗方法时， 肝癌才能够得到有效的治疗。例如，对于被评估为有良好的预后的患者，有必要避免可能对 患者引起严重副作用的危险的治疗方法，例如激进的化疗或手术、放疗等，而选择那些相对 温和、保守和安全的治疗方法。另一方面，对于被评估为有较差的预后的患者，应当积极地 进行化疗或手术，例如放疗等治疗方法以力图增加生存期或生存率。
[0007] 根据迄今为止进行的研究，已经发展的肝癌的预后非常糟糕，显示了自诊断起6个 月内死亡的高致死率，剩余仅四个月的平均寿命长度。但是，大小小于3厘米的肝癌有良好 的预后，且已知无需任何特别治疗，一年的生存率为90%，且手术后5年的生存率为约40~ 50%。然而，根据现有技术很难精确地评估肝癌患者的预后。为了精确评估预后，需要一种 把患者划分为各风险组群的分析方法。然而，迄今为止，仅仅依靠在诊断和初次手术治疗时 的临床病理肝癌阶段来确定预后，而没有一种用于精确评估肝癌的方法。但是，不幸的是， 仅仅通过肝癌阶段无法精确确定每一位肝癌患者的预后。
[0008] CBS蛋白（胱硫醚β-合酶)是一种将同型半胱氨酸转变成胱硫醚的酶，已知其在转 硫（1:^1188111;^^1:;[011)通路中起作用，并在体内蛋氨酸代谢中发挥重要作用[113;[01 Chem.l994May 20；269(20):14835-40]〇
[0009] NNMT蛋白（烟酰胺N甲基转移酶)是一种进行烟酰胺和吡啶的N-甲基化的酶，已知 其与各种药物和异生物的代谢有关[Genomics. 1998S印15; 52(3): 312-24]。
[0010] TKT蛋白（转酮醇酶)是一种在非氧化的磷酸戊糖途径中发挥核心作用的酶，作为 该族的成员，已知有TKTL1 (转酮醇样酶1)、TKTL2(转酮醇样酶2)[J Biol Chem.l993Jan 15;268(2):1397-404]。
[0011] AIFM1蛋白（线粒体相关的凋亡诱导因子1)是也称为AIF的黄素蛋白。已知若发生 细胞凋亡，则该蛋白移动至细胞核，引起染色体的聚集和断裂，并诱导来自线粒体的细胞色 素 c和半胱天冬酶9的分泌[Nature. 1999Feb 4;397(6718) :441-6]。
[0012] AKT蛋白是与AKT2、AKT3有关的蛋白，并且已知其在通过磷脂酰肌醇3激酶生长因 子信号传递（即，血小板源生长因子(PDGF)、表皮生长因子(EGF)、胰岛素和胰岛素样生长因 子I(IGF-I)等的信号传递）中起作用，当其被激活时，已知能够磷酸化凋亡相关蛋白并使它 们失活[Proc Natl Acad Sci U S A.1987Jul;84(14):5034-7]〇
[0013] ATG3蛋白（自噬相关3同源物)参与了诸如GATE-16、GABARAP、MAP-LC3等人ATG8同 源物与脂类之间的结合。有报道称缺乏ATG3的小鼠不形成自噬小体，并在出生后一天内死 亡[J Biol Chem.2002Apr 19;277(16):13739-44.Epub 2002Feb 1]〇 [0014] ATG5蛋白（自噬相关5同源物)与自噬作用有关。ATG5已知能够通过ATG7和ATG10的 作用形成ATG12-ATG5缀合物，并且该ATG12-ATG5缀合物移动到自噬小体膜处以在ATG8和磷 脂酰乙醇胺的结合中起作用。有报道称缺乏ATG5的小鼠不形成自噬小体，并在出生后立即 死亡，且截断的ATG5能够诱导细胞色素 c的分泌和激活线粒体内的半胱天冬酶9[Nature 432:1032-1036(2004)]。
[0015] ATG7蛋白（自噬相关7同源物）与自噬作用有关。有报导称ATG7与ATG10-起形成 ATG12-ATG5缀合物，而ATG7与ATG3-起参与ATG8和磷脂酰乙醇胺的结合。缺乏ATG7的小鼠 不形成自噬小体，并在出生后立即死亡[J Biol Chem.2001Janl9;276(3) :1701-6.Epub 2000Nov 28]〇
[0016] ATG12蛋白（自噬相关12同源物）与自噬作用有关。已知ATG12通过ATG7和ATG10的 作用形成ATG12-ATG5缀合物，并且该ATG12-ATG5缀合物移动到自噬小体膜处以在ATG8和磷 脂酰乙醇胺的结合中起作用[J Biol Chem.l998Decl8;273(51):33889-92]。
[0017] ΒΑΧ蛋白（BCL2相关X蛋白）BCL2蛋白族的一员，已知其通过与BCL2的结合促进细胞 凋亡，并且与线粒体膜电位的损失和细胞色素 C的分泌有关[Cell. 1993Aug27;74(4) :609-19]〇
[0018] BCL2蛋白（B细胞淋巴瘤蛋白2)是一种线粒体的膜蛋白，能够抑制细胞凋亡。已知 其抑制细胞色素 c从线粒体的分泌，激活半胱天冬酶并通过与凋亡激活因子的结合抑制细 胞凋亡[Proc Natl Acad Sci U S A.1986Jul;83(14):5214-8]〇
[0019] BCL2L1蛋白（Bcl-2样1蛋白）是BCL2蛋白组的一员，已知其位于线粒体的外膜并与 线粒体膜通道的分配有关。它以两种亚型存在。较长形式的BCL-XL已知能够抑制细胞凋亡， 而较短形式的BCL-XS能够促进细胞凋亡[Cell. 1993Aug27; 74(4): 597-608]。
[0020] BNIP3蛋白（BCL2/腺病毒E1B 19kD-相互作用蛋白3)能够与E1B 19kDa蛋白和BCL2 结合，且已知可以诱导细胞凋亡和自噬作用[J Exp Med. 1997Decl5; 186(12): 1975-83]。
[0021] CASP8蛋白（半胱天冬酶8,凋亡相关的半胱天冬酶)是属于半胱天冬酶家族的酶， 它是通过FAS在细胞凋亡机制初始阶段起作用的酶。如果其通过与FADD的结合和蛋白水解 性切割而激活，它激活各种其他的半胱天冬酶[Proc Natl Acad Sci U S A.1996Dec 10; 93(25):14486-91;Biochem J.1997Aug 15;326(Pt 1):1-16]〇
[0022] CSE1L蛋白（CSE1染色体分离1样）已知在将importin-α再次从细胞核发送至细胞 质中起作用，并与细胞凋亡或细胞增殖有关[Proc Natl Acad Sci U S A.19950ct24;92 (22) :10427-31]。
[0023] DIABLO蛋白（具有低等电点的直接的IAP结合蛋白）是一种位于线粒体内的蛋白， 且如果发生细胞凋亡，则它移动至细胞质与IAP(凋亡抑制物蛋白）结合以帮助半胱天冬酶 的激活[Cell · 2000Jul 7; 102( 1): 43-53]。
[0024] DRAM蛋白（损伤调节自噬调控蛋白）是一种溶酶体的膜蛋白，已知其与p53肿瘤抑 制子控制的自噬作用有关并且在P53控制的细胞凋亡中是必须的[Cell.2006Jull4;126 (l):m-34]〇
[0025] E2F1蛋白（E2F转录因子1)是E2F家族转录因子的一员，已知其与细胞周期和肿瘤 抑制子的控制密切相关，并且通过与Rb蛋白的结合促进细胞生长或诱导与p53相关的细胞 凋亡[Gene. 1996S印 16; 173(2) :163-9] 〇
[0026] FAS蛋白（4?0-1^095，了即1??6)是了册受体家族的一员。已知其接受?43配体的信 号并与FADD(Fas相关死亡结构域蛋白）、半胱天冬酶8以及半胱天冬酶10-起组成DISC(死 亡诱导信号复合物）来诱导细胞凋亡[J Biol Chem.l992May25;267(15): 10709-15]。
[0027] FRAP1蛋白（哺乳动物雷帕霉素靶蛋白）也称为mTOR。已知其调节诸如细胞内DNA损 伤、营养耗尽等与压力有关的反应，且包含FRAP1的T0RC2复合物已知是细胞周期阻滞和 FKBP12-雷帕霉素复合物的抑制免疫作