,而导入第四液柱40。
[0162]使上述的从外部被施加的磁力变化,而使磁性粒子M振动、反复扩散凝结的方式也可以适用于磁性粒子M存在于容器120内的吸附液中的状态、磁性粒子M存在于第四液柱40 (溶出液)的状态。
[0163]3.8.2.使核酸溶出的工序的变形
[0164]在上述的“3.5.使核酸溶出的工序”中,也可以对第四液柱40进行加热来进行。作为对第四液柱40进行加热的方法,例如能够例示使加热块等热介质与管200的和第四液柱40对应的位置接触的方法、应用加热器等热源的方法、基于电磁加热的方法等。
[0165]在对第四液柱40进行加热的情况下,第四液柱40以外的液柱也可以被加热,但在吸附有核酸的磁性粒子M存在于清洗液的液柱的状态下,优选该液柱不被加热。作为对第四液柱40进行加热的情况下的到达温度,从溶出效率的观点以及在溶出液含有PCR的酶的情况下抑制该酶的失活的观点考虑,优选为35°C以上85°C以下,更加优选为40°C以上80°C以下,进一步优选为45°C以上75°C以下。
[0166]在使核酸溶出的工序中,若对第四液柱40进行加热,则能够使吸附于磁性粒子M的核酸更加有效地溶出至溶出液。另外,即使第一清洗液或第二清洗液与溶出液的组成相同或类似,也也能够使未溶出至清洗液而残留并吸附于磁性粒子M的核酸溶出至溶出液。即,即便在利用第一清洗液或第二清洗液对吸附有核酸的磁性粒子M进行清洗之后,也能够使核酸进一步溶出至溶出液。由此,即使清洗液的组成与溶出液的组成相同或类似,也能够兼得充分的清洗与以充分的浓度溶出至溶出液。
[0167]3.8.3.从管排出第四液柱的工序的变形
[0168]在采用上述的“3.7.从管排出第四液柱的工序”的情况下,在该工序中,将被吸附的核酸溶出至溶出液的磁性粒子M可以存在于第四液柱40内,但也可以进一步施加磁力由此使其移动至第一液柱10、第二液柱20、第三液柱30中的任一个液柱或容器120后来进行。由此,能够在溶出液不含有磁性粒子M的状态下,从管200排出第四液柱40。另外,对于磁性粒子M移动的位置而言,若成为第二液柱20或容器120,则即使除去磁力,磁性粒子M也难以进入第三液柱30的油内,因此能够将第四液柱40更加容易地从管200排出。
[0169]4.核酸提取用装置
[0170]本实施方式所涉及的核酸提取用装置能够适用于上述进行了说明的核酸提取用设备、核酸提取用试剂盒以及核酸提取方法。以下,将安装核酸提取用试剂盒2000并进行核酸提取的核酸提取用装置3000说明为一个实施方式。图17是示意性地表示本实施方式的核酸提取装置3000的立体图。
[0171]本实施方式的核酸提取用装置3000包括:供管安装的安装部300 ;当在安装部300安装有管200的情况下,从管200的侧面施加磁力的磁力施加部400以及使安装部300以及磁力施加部400的相对配置沿管200的长边方向变化的移动机构500,其中,上述管200具有长边方向,并在内部依次配置有由油构成的第一液柱10、由不与油混合的第一清洗液构成的第二液柱20、由油构成的第三液柱30、由不与油混合的溶出液构成的第四液柱40以及由油构成的第五液柱50。
[0172]安装于核酸提取用装置3000的安装部300的管200是上述的管200。核酸提取用装置3000具有供管200安装的安装部300。此外,例示了在管200内配置有第一液柱10?第五液柱50,但也可以配置有上述的第六液柱60、第七液柱70。
[0173]安装部300是供管200安装的部位。在安装部300也可以与管200 —同安装有与管200连接的容器120。对于安装部300而言,能够相对于管200以及根据需要相对于容器120在利用磁力施加部400能够施加磁力的范围内适当地设计结构、用于安装的机构等。安装部300也可以构成为在管200具有挠性而弯曲的情况等下,能够供管200以直线状的形状拉伸安装。另外,在图示的例子中,安装部300具有沿管200配置的支板310。支板310非必须的结构,但若设置支板310,则存在能够抑制管200的振动等的情况。另外,在图示的例子中,安装部300具有夹子机构320,由此成为在两个位置固定管200的方式。
[0174]安装部300构成为使与磁力施加部400的位置关系相对于管200的长边方向相对地变化。因此,在以不使磁力施加部400移动而使安装部300相对于磁力施加部400相对地移动的方式设计的情况下,如图所示,作为移动机构500,构成为包括使安装部300移动的移动机构360。另外,磁力施加部400包括移动机构的情况下,存在在安装部300不需要移动机构360的情况。在图示的例子中,安装部300构成为包括铰链330、导轨340、驱动带350、未图示的马达。
[0175]在核酸提取用装置3000的例子中,安装部300设置有一个,但也可以设置有多个。在该情况下,磁力施加部400也能够设置有多个,但多个安装部300可以各自独立,也可以以连动的方式设置。
[0176]磁力施加部400是当在安装部300安装有管200时,对管200以及根据需要对容器120施加磁力的结构。磁力施加部400例如构成为包括永久磁铁、电磁铁或它们的组合。磁力施加部400至少具备一个磁铁等,也可以具备多个磁铁等。若在磁力施加部400不使用电磁铁而使用永久磁铁,则难以产生发热等,因此优选。作为永久磁铁,例如能够使用镍系、铁系、钻系、衫系、钦系的永久磁铁。
[0177]磁力施加部400具有相对于存在于容器120内以及管200内的磁性粒子M施加磁力的功能。而且,使安装部300与磁力施加部400的相对的位置关系变化,由此能够使磁性粒子M在容器120内以及管200内移动。
[0178]在图示的例子中,磁力施加部400具有设置为隔着容器120以及管200对置的一对永久磁铁410。一对永久磁铁410之间以比管200的外径大的间隔分离。永久磁铁410的极性朝向的方向不被特别地限定。磁力施加部400构成为使与安装部300的位置关系相对于管200的长边方向相对地变化。因此,在以不使安装部300移动而使磁力施加部400相对于安装部300相对地移动的方式设计的情况下,作为移动机构500,构成为包括使磁力施加部400移动的移动机构。
[0179]另外,在图示的例子中,磁力施加部400配置为若一对永久磁铁410的一方接近管200则另一方远离管200。而且,能够通过马达420使一对永久磁铁410以接近或远离管200的方式振动。马达420驱动,从而能够使磁性粒子M在管200内沿与管200的长边方向交叉的方向往返移动。
[0180]马达420即便在对容器120、管200的任意位置施加磁力的情况下,也能够根据需要驱动。但是,在永久磁铁410的位置位于管200的第二液柱20、第四液柱40的位置时,若驱动则能够提高管200内的磁性粒子M的清洗效率、溶出效率。
[0181]根据本实施方式的核酸提取用装置3000,能够使用于PCR的前处理自动化,从而能够大幅度地减少前处理所需的时间与精力。另外,根据本实施方式的核酸提取用装置3000,能够使磁力施加部400摇动,因此能够更加有效地进行吸附有核酸的磁性粒子M的清洗(精制),从而能够进一步提高PCR的精度。
[0182]图18是示意性地表示核酸提取用装置的变形例所涉及的核酸提取装置3100的立体图。核酸提取装置3100与上述核酸提取装置3000在具有加热部600这点上不同,除此之外与其同样,对作用功能相同的部件标注相同的符号并省略其说明。
[0183]加热部600是当在安装部300安装有管200的情况下,对管200的一部分进行加热的结构。作为加热部600,例如能够例示热源及加热块、加热器、电磁加热用的线圈等。作为加热部600的形状,是能够供管200插入的形状、与管200的侧面接触的形状等,只要能够对管200内的液体进行加热,则可以是任意的形状。
[0184]被加热部600加热的管200的部分包括管200的长边方向中的、存在有第四液柱40的部分。加热部600也可以对管200的其他的部分进行加热,但优选不对管200的长边方向中的、存在有第二液柱20的部分进行加热。
[0185]在图18所示的核酸提取装置3100中,作为加热部600,具备与支板310并列设置的、对包括管200的第四液柱40的位置进行加热的加热器610。加热器610具有与管200的外周的一半左右接触的形状。
[0186]核酸提取装置3100即便在通过基于第二液柱20的第一清洗液以及第六液柱60的第二清洗液中的至少一方的清洗而减少了吸附于磁性粒子M的核酸的量的情况下,也能够使充分量的核酸溶出至第四液柱40的溶出液。由此,能够提高清洗效果,并且为了 PCR而能够使足够的浓度的核酸溶出至溶出液。
[0187]5.实验例
[0188]以下对实验例进行说明,对本发明进一步详细地进行说明,但本发明完全不受以下的实验例限定。
[0189]5.1.实验例 I
[0190]在实验例I中,在上述核酸提取用试剂盒2000中的、管200的内部使用具有第一液柱10?第七液柱70的结构。
[0191]首先,在容量3mL的聚乙烯制容器中收容375 μ L的吸附液以及I yL的磁性珠分散液。作为吸附液的组成,为76质量%的盐酸胍、1.7质量%的乙二胺四乙酸二氢二钠二水合物以及10质量%的聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯的水溶液(东洋纺制,MagExtractor-Genome-、NPK-l)。另外,作为磁性珠分散液,使用含有50体积%的磁性二氧化硅粒子以及20质量%的氯化锂的分散液。
[0192]使用移液管从容器口放入50 μ L从人体采集的血液,对容器装上盖利用手振摇30秒钟进行搅拌。然后,取下容器的盖与管连接。此外,在管的两端存在栓,从而取下第一液柱侧的栓将容器与管连接。
[0193]此处,第一、三、七、五液柱为硅油。第二液柱的第一清洗液为76质量%的盐酸胍的水溶液。另外,第六液柱的第二清洗液为ΡΗ8.0的Tris-盐酸缓冲液(溶质浓度5mM)。第四液柱的溶出液为灭菌水。
[0194]然后,利用手使永久磁铁移动,而将容器内的磁性珠导入管内。然后,使磁性珠移动到第四液柱。磁性珠存在于管内的各液柱的时间大致如下。第一、三、七液柱:各3秒,第二液柱:20秒,第六液柱:20秒,第四液柱:30秒。此外,在第二液柱以及第六液柱中,不进行使磁性珠振动等的操作。另外,第二液柱、第六液柱以及第四液柱的体积分别为25 μ L、25 μ L 以及 I μ L0
[0195]接着,取下管的第五液柱侧的栓,利用手使容器变形,尔将第五液柱以及第四液柱排出至PCR的反应容器。该操作在通过永久磁铁使磁性珠移动而使其退避至第二液柱后进行。
[0196]然后,向该提取液加入19 μ L的PCR的反应试剂,根据常规办法进行实时PCR。PCR的反应试剂的详细内容如下:LightCycler480Genotyping Master (Roche-Diagnostics 公司制 4 707 524)4 μ L、用灭菌水稀释 1000 倍的 SYBR Green I (Life Technologies 公司制S7563)0.4yL、100yM的β肌动蛋白检测用引物(F/R)各0.06 μ L、灭菌水14.48 μ L。将实验例I的PCR的扩增曲线示于图19。此外,图19的纵轴是荧光亮度,横轴是PCR的循环数。
[0197]5.2.实验例 2
[0198]在实验例2中,通过通常的核酸提取法进行核酸的提取。
[0199]首先,在容量1.5mL的聚乙烯制容器中收容375 μ L的吸附液以及20 μ L的磁性珠分散液。作为吸附液、磁性珠分散液的组成,与实验例I相同。
[0200]接下来,使用移液管从容器口导入50 μ L从人体采集的血液,对容器装上盖,通过旋涡混合器搅拌10分钟,对磁性架以及移液管进行操作进行B/F分离操作。该状态下,在容器内残留有磁性珠以及少量的吸附液。
[0201]接下来,向容器导入450 μ L与实验例I相同组成的第一清洗液,装上盖通过旋涡混合器搅拌5秒钟,对磁性架以及移液管进行操作除去第一清洗液。重复两次该操作。该状态下,在容器内残留有磁性珠以及少量的第一清洗液。
[0202]接下来,向容器导入450 μ L与实验例I相同组成的第二清洗液,装上盖通过旋涡混合器搅拌5秒钟,对磁性架以及移液管进行操作除去第一清洗液。重复两次该操作。该状态下,在容器内残留有磁性珠以及少量的第二清洗液。
[0203]然后,将灭菌水(溶出液)50 μ L加入容器,装上盖通过旋涡混合器搅拌10分钟,对磁性架以及移液管进行操作回收上清液。该上清液含有靶核酸。
[0204]然后,从该提取液分注出I yL,再加入19 yL的PCR的反应试剂,根据常规方法进行实时PCR。PCR的反应试剂的详细内容如下:LightCycler480GenotypingMaster (Roche-Diagnostics 公司制 4 707 524) 4 μ L、用灭菌水稀释了 1000 倍的 SYBRGreen I (Life Technologies 公司制 S7563) 0.4 μ L、100 μ M 的 β 肌动蛋白检测用引物(F/R)各0.06 μ L、灭菌水14.48 μ L。将此时的扩增曲线示于