核酸提取用设备的制造方法_2

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的液柱。优选在第一液柱10中没有气泡、其他的液体,但只要吸附有核酸的粒子等能够通过第一液柱10,也可以存在气泡、其他的液体。另外,优选在第一液柱10与第二液柱20之间没有气泡、其他的液体,但只要吸附有核酸的粒子等能够从第一液柱10向第二液柱20通过,也可以存在气泡、其他的液体。同样地,优选在第二液柱20与第三液柱30之间没有气泡、其他的液体,但只要吸附有核酸的粒子等能够从第二液柱20向第三液柱30通过,也可以存在气泡、其他的液体。
[0053]在第三液柱30与第五液柱50之间配置第四液柱40。在第五液柱50的与第四液柱40相反一侧的区域也可以配置有其他的液体的液柱。优选在第三液柱30中没有气泡、其他的液体,但只要吸附有核酸的粒子等能够通过第三液柱30,也可以存在气泡、其他的液体。另外,优选在第三液柱30与第四液柱40之间没有气泡、其他的液体,但只要吸附有核酸的粒子等能够从第三液柱30向第四液柱40通过,也可以存在气泡、其他的液体。同样地,优选在第四液柱40与第五液柱50之间没有气泡、其他的液体,但只要吸附有核酸的粒子等能够从第四液柱40向第五液柱50通过,也可以存在气泡、其他的液体。并且,优选在第五液柱50中没有气泡、其他的液体。
[0054]第一液柱10、第三液柱30以及第五液柱50的管部100的长边方向的长度只要在能够形成液柱的范围内,则均不被特别地限定。作为第一液柱10、第三液柱30以及第五液柱50的管部100的长边方向的具体的长度,为Imm以上50mm以下,为了不使粒子等的移动距离过大,优选为Imm以上30mm以下,进一步优选为5mm以上20mm以下。在采用若使上述中的第三液柱30的管部100的长边方向的长度增长则从管部100的第五液柱50侧的端部排出第四液柱40的方式的情况下,能够难以排出第二液柱20。在该情况下,作为第三液柱30的具体长度,能够形成1mm以上50mm以下。
[0055]第一液柱10以及第五液柱50具有即使管部100的至少一端开放,也能够防止第一清洗液(第二液柱20)以及溶出液(第四液柱40)的、与蒸发等的外部空气的物质交换、来自外部的污染的功能。因此,即使管部100的至少一端向外部空气开放,也能够将第一清洗液、溶出液的体积保持恒定,从而能够抑制各液体的浓度的变动、污染。由此,能够提高核酸提取中的核酸、各种药剂的浓度的精度。
[0056]另外,第三液柱30具有抑制第一清洗液(第二液柱20)以及溶出液(第四液柱40)相互混合的功能。另外第三液柱30成为更高粘度的油,从而当使粒子等在与第一清洗液(第二液柱20)的界面移动的情况下,能够提高油所带来的“洗掉效果”。由此,在使粒子等从第二液柱20的第一清洗液的液柱移动至油的第三液柱30的情况下,能够使附着于粒子等的水溶性的成分更难以带到第三液柱30 (油)中。
[0057]1.3.第二液柱
[0058]第二液柱20配置于管部100内的第一液柱10与第三液柱30之间的位置。第二液柱20由第一清洗液构成。第一清洗液是与构成第一液柱10的油以及构成第三液柱30的油均不混和的液体。作为第一清洗液,能够列举水或溶质浓度为1mM以下、优选为7mM以下、更加优选为5mM以下的缓冲液。缓冲液的组成不被特别地限定,但能够例示Tris-盐酸缓冲液等,也可以含有Η)ΤΑ(乙二胺四乙酸)等。若为上述的第一清洗液,则能够对吸附有核酸的粒子等高效地进行清洗。
[0059]第二液柱20的体积不被特别地限定,能够以吸附有核酸的粒子等的量等为指标适当地设定。例如,在粒子等的体积为0.5 μ L的情况下,第二液柱20的体积若为10 μ L以上则足够,优选为20 μ L以上50 μ L以下,进一步优选为20 μ L以上30 μ L以下。若第二液柱20的体积在该范围内,则在粒子等的体积为0.5 μ L的情况下能够充分进行粒子等的清洗。此外,在粒子等的清洗时,优选第二液柱20的体积更大,但能够考虑管部100的长度、粗度、依赖于它们的第二液柱20的管部100的长边方向的长度等适当地设定。
[0060]第二液柱20也可以被油的液柱分割而由多个液柱构成。在第二液柱20由被油液柱分割的多个液柱构成的情况下,形成有多个第一清洗液的液柱。因此,在第二液柱20被油液柱分割的情况下,若清洗的对象为水溶性物质,则通过被分割的第一清洗液到达的水溶性物质的浓度比通过未被分割的相同体积的第一清洗液到达的水溶性物质的浓度小,因此更加优选。第二液柱20被分割的数目任意,但若清洗的对象为水溶性物质,则例如若以等体积2等分割,则计算上能够使水溶性物质的浓度降低至未分割的情况下的1/4的浓度。第二液柱20被分割的数目例如能够考虑管部100的长度、清洗的对象等被适当地设定。
[0061]1.4.第四液柱
[0062]第四液柱40配置于管部100内的第三液柱30与第五液柱50之间的位置。第四液柱40由溶出液构成。
[0063]所谓溶出液是指使吸附于粒子等的核酸从粒子脱离而溶离到溶液中的液体。作为溶出液,例如能够列举灭菌水、蒸馏水、离子交换水等被精制过的水或者使酶、dNTP、探针、引物以及缓冲液中的至少一种溶解于上述的水而成的水溶液。溶出液是与构成第三液柱30的油以及构成第五液柱50的油均不混和的液体。
[0064]若使溶出液形成水或水溶液,则使吸附有核酸的粒子等浸渍于溶出液,从而能够使吸附于粒子等的核酸游离出来(溶出)。另外,若选择使酶、dNTP、探针、引物以及缓冲液中的至少一种溶解于溶出液而成的水溶液,则能够使吸附于粒子等的核酸游离出来(溶出),并且能够使PCR的反应液所需的成分的一部分或者全部含于溶出液,因此能够进一步省去使用溶出液制备PCR的反应液时的时间与精力。使酵素、dNTP、探针、引物以及缓冲液中的至少一种溶解于第四液柱40的溶出液的情况下的浓度不被特别地限定,但能够根据制备的PCR的反应液而设定。
[0065]此外,此处,dNTP表示四种脱氧核糖核苷酸三磷酸(deoxynucIeotidetriphosphate)(将 dATP(Deoxyadenosine triphosphate 脱氧腺苷三磷酸)、dCTP(Deoxycytidine triphosphate 脱氧胞苷三磷酸)、dGTP(Deoxyguanosinetriphosphate脱氧鸟苷三磷酸)以及dTTP (Thymidine triphosphate胸苷三磷酸)混合而成)。
[0066]第四液柱40的体积不被特别地限定,能够以吸附有核酸的粒子等的量等为指标适当地设定。例如,在粒子等的体积为0.5 μ L的情况下,第四液柱40的体积只要为0.5 μ L以上则足够,优选为0.8 μ L以上5 μ L以下,进一步优选为I μ L以上3 μ L以下。若第四液柱40的体积在该范围内,则在粒子等的体积为0.5 μ L的情况下,能够充分进行核酸从粒子等的溶出。此外,在核酸从粒子等溶出时,第四液柱40的体积能够考虑管部100的长度、粗度以及PCR的热循环的迅速性,以反应液的热容量不会过大的方式考虑而适当地设定。
[0067]1.5.作用效果
[0068]本实施方式的核酸提取用设备1000具有呈液柱状配置有油、第一清洗液以及溶出液的管部100。因此,使吸附有核酸的粒子等从第一液柱10侧导入管部100而移动至第四液柱40,由此能够在极短时间内容易地进行核酸的提取。更加详细而言,能够使吸附有核酸的粒子等从管部100的第一液柱10侧导入,通过第一液柱10的油内,由第二液柱20的第一清洗液进行清洗,通过第三液柱30的油,在第四液柱40的溶出液中使核酸从粒子等脱离。即,本实施方式的核酸提取用设备1000使吸附有核酸的粒子等在管部100内移动,由此能够以较高的纯度获得含有核酸的溶出液。因此,根据核酸提取用设备1000,能够大幅减少用于PCR的前处理所需的时间与精力。
[0069]1.6.核酸提取用设备的结构等
[0070]本实施方式的核酸提取用设备具有管部100、第一液柱10、第二液柱20、第三液柱30、第四液柱40、以及第五液柱50,但也可以包含附加其他的功能的结构。本实施方式的核酸提取用设备也可以包含以下进行说明的结构的组合、各结构的变形方式。
[0071]1.6.1.管部的端部
[0072]图2是示意性地表示作为核酸提取用设备的变形例的一种的核酸提取用设备1010的图。对于本实施方式的核酸提取用设备而言,例如管部100的第五液柱50侧的端部也可以开放。即,如图2所示,在核酸提取用设备1010中,管部100的第五液柱50侧的端部成为被开放的状态。根据核酸提取用设备1010,通过从管部100的第一液柱10侧向管部100的内部施加压力,从而能够依次排出第五液柱50以及第四液柱40。由此,使用核酸提取用设备1010,能够将含有靶核酸的溶出液(第四液柱40)容易地分注于例如用于PCR的反应容器等。
[0073]1.6.2.栓
[0074]图3是示意性地表示作为核酸提取用设备的变形例的一种的核酸提取用设备1020的图。如图所示,本实施方式的核酸提取用设备例如也可以进一步具有对管部100的第五液柱50侧的端部进行密封的、可自由拆卸的栓110。栓110例如能够由橡胶、弹性体、高分子等形成。在管部100被栓110密封的情况下,栓110可以与第五液柱50接触、也可以隔着空气等气体配置于第五液柱50与栓110之间。另外,栓110可自由拆卸,但该机构不被特别地限定。在图3的例子中,示出了将栓110的一部分插入并固定于管部100的内部的方式,但栓110也可以呈帽状。
[0075]在核酸提取用设备1020中,在取下栓110的情况下,管部100的第五液柱50侧的端部开放,成为上述的图2的核酸提取用设备1010的方式,使用核酸提取用设备1020,能够将含有靶核酸的溶出液(第四液柱40)容易地分注于例如用于PCR的反应容器等。另外,若为管部100的第五液柱50侧的端部被栓110密封的状态(图3所示的状态),则能够获得抑制各液柱在管部100内的移动的效果,由此,例如,当使粒子等在管部100内移动的情况下,能够抑制液柱随着粒子等的移动而移动。
[0076]1.6.3.容器
[0077]图4是示意性地表示作为核酸提取用设备的结构的一个例子的核酸提取用设备1030的图。如图4A例示,核酸提取用设备1030进一步具有能够在管部100的第一液柱10侧的端部使内部连通而连接的、可自由拆卸的容器120。
[0078]容器120能够形成独立的部件。容器120在内部能够收容液体。容器120具有能够供液体、固体出入的开口 121。另外,在图4的例子中,容器120的开口 121成为在管部100的第一液柱10侧的端部使内部连通而连接的方式。另外,容器120可以具有多个开口121,也可以成为使该情况下的开口 121之一在管部100的第一液柱10侧的端部使内部连通而连接的方式。
[0079]容器120的内容积不被特别地限定,但例如能够形成0.1mL以上10mL以下。容器120的开口 121也可以根据需要形成被盖122密封的构造。容器120的材质不被特别地限定,能够形成高分子、金属等。
[0080]容器120的开口 121能够与管部100的第一液柱10侧的端部连接,但容器120与管部100之间的连接只要为内容物不漏出的方式则不被特别地限定。在将容器120与管部100连接的情况下,能够使容器120的内部与管部100的内部连通。另外,容器120能够根据需要从管部100取下。
[0081]如核酸提取用设备1030那样,具备容器120,从而能够在容器120内收容例如粒子等、吸附液以及检体,而使核酸吸附于粒子等。然后,若将容器120与管部100的第一液柱10侧的端部连接,则能够成为能够将该粒子等从管部100的第一液柱10侧容易地导入管部100内的状态。
[0082]所谓吸附液是指成为使粒子(磁性粒子M)吸附于核酸的情况下的液体,例如是含有促溶剂的水溶液。在吸附液中也可以含有螯合剂、表面活性剂等。具体而言,在吸附液中可以溶解有乙二胺四乙酸二氢二钠、其二水合物等,也可以含有聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯等。
[0083]此处,所谓促溶剂是指减少水分子间的相互作用由此使水分子的结构不稳定的物质,具体而言,能够列举胍离子、尿素、碘化物离子等。通过使水中存在促溶剂,与被水分子包围地存在相比,吸附于固体地存在对于热力学更有利,因此水中的核酸吸附于粒子等的表面。作为能够在水中产生促溶剂的物质,能够列举盐酸胍、碘化钠等。
[0084]容器120在未与管部100连接的状态下,能够振摇,从而能够充分地搅拌容器120内的液体。由此,能够使核酸迅速地吸附于粒子等。容器120也可以具有对开口 121进行密封的盖122。此外,适当地变更导入容器120的检体的量与管部100内的液体(特别地为第四液柱40)的体积,由此也能够将检体中的核酸在第四液柱40的溶出液中定量浓缩。
[0085]作为容器120的材质,则选择橡胶、弹性体、高分子等具有挠性的材料,则在将容器120与管部100连接的状态下,使容器120变形,从而能够对管部100的内部加压。由此,在将第四液柱40的溶出液从管部100的第五液柱50侧的端部排出时,容易从管部100的第一液柱10侧施加压力。由此,能够将溶出液分注于例如用于PCR的反应容器等。
[0086]1.6.4.储液部
[0087]图5是示意性地表示作为核酸提取用设备的结构的一
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