核酸提取用设备的制造方法_4

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注相同的符号并省略详细的说明。
[0122]本实施方式的核酸提取用试剂盒2000包括管200以及在管200的第一液柱10侧的端部使内部连通而连接的容器120,所述管200在内部依次配置有由油构成的第一液柱
10、由不与油混和的第一清洗液构成的第二液柱20、由油构成的第三液柱30、由不与油混和的溶出液构成的第四液柱40以及由油构成的第五液柱50。
[0123]管200是核酸提取用设备1000的管部100的两端被开放的方式,在内部具有空洞,且具有能够使液体在该空洞内沿长边方向流通的筒状的形状。管200的内部形状、外形形状、大小、性质、材质等与核酸提取用设备1000的管部100相同。配置于管200的内部的液柱与配置于核酸提取用设备1000的管部100的液柱相同。另外,管200的两端也可以被可自由拆卸的栓110密封。在管200的两端被栓110密封的情况下,例如核酸提取用试剂盒2000的保存、移送变得更加容易。并且,在使用管200时,若形成栓110对管200的第五液柱50侧的端部进行密封的状态,则在使粒子等在管200的内部移动时,能够抑制各液柱在管200内的移动,因此能够使清洗、提取更加容易化。在此基础上,该栓110可自由拆卸,因此能够使管200的第五液柱50侧的端部开放,从而容易将溶出核酸的第四液柱40的溶出液从管200的第五液柱50侧的端部排出。
[0124]容器120与核酸提取用设备1000的项目中进行了说明的容器120相同。
[0125]在图14的例子中,管200的两端被可自由拆卸的栓110密封。另外,核酸提取用试剂盒2000可以包含将容器120的开口 121密封为可自由拆卸的盖122,容器120的开口121也可以被可自由拆卸的盖122密封。并且,在核酸提取用试剂盒2000中,也可以将吸附液的成分的一部分或全部收容于容器120。
[0126]另外,在核酸提取用试剂盒2000中,容器120也可以收容吸附液以及磁性粒子。由此,在将检体导入容器120时,能够在容器120进行使检体所包含的核酸吸附于磁性粒子的工序。由此,不需要准备其他的容器,而能够更加迅速地进行PCR的前处理。另外,在该情况下,容器120的开口 121也可以根据需要被可自由拆卸的盖122密封。对磁性粒子后面详述。
[0127]另外,如已经叙述的那样,若将容器120形成具有挠性的材质,则在将容器120与管200连接的状态下,通过使容器120变形,能够对管200的内部进行加压。由此,在将溶出核酸的第四液柱40的溶出液从管200的第五液柱50侧的端部排出时,能够容易地从管200的第一液柱10侧施加压力。由此,能够将溶出液容易地分注于例如用于PCR的反应容益寺O
[0128]在核酸提取用试剂盒2000除包含管200以及容器120之外,例如也可以包含栓、盖、操作说明书、试剂、箱体等其他的结构。另外,此处示出了在管200内配置有五个液柱的例子,但与“1.6.核酸提取用设备“的项目中进行了说明的情况同样地,也可以在管200(管部100)内根据需要配置有第六液柱60、第七液柱70等其他的液柱是容易理解的。
[0129]本实施方式的核酸提取用试剂盒2000具有能够在管200的第一液柱10侧的端部使内部连通而连接的容器120,因此只要在容器120内收容粒子等与检体,则能够使核酸吸附于粒子等,只要将容器120与管200的第一液柱10侧的端部连接,则能够将该粒子等容易地从管200的第一液柱侧导入管200内。另外,本实施方式的核酸提取用试剂盒2000具有容器120,因此使容器120振摇,从而能够对容器120内的液体充分地进行搅拌。由此能够使核酸迅速地吸附于粒子等。
[0130]另外,使容器120与管200连接,从而容易将吸附有核酸的粒子等从管200的第一液柱10侧的端导入而使之移动至第四液柱40。由此,能够在极短时间内容易地进行核酸的提取。核酸提取用试剂盒2000使吸附有核酸的粒子等在管200内移动,从而能够以较高的纯度获得含有核酸的溶出液。因此,根据核酸提取用试剂盒2000,能够大幅度地减少用于PCR的前处理所需的时间与精力。
[0131]3.核酸提取方法
[0132]上述的核酸提取用设备、核酸提取用试剂盒及它们的变形方式以及后述的核酸提取用装置均能够适用于本实施方式的核酸提取方法。以下,作为本实施方式的核酸提取方法的一个例子,叙述利用了上述的核酸提取用试剂盒2000的方法。
[0133]本实施方式的核酸提取方法包括如下工序:向收容有磁性粒子M以及吸附液的具有挠性的容器120导入含有核酸的检体的工序、摇动容器120而使核酸吸附于磁性粒子M的工序、在管200的第一液柱10侧的端部使容器120内部与管200内部连通而连接容器120的工序、施加磁力而使磁性粒子M从容器120内部通过管200内部移动至第五液柱50的位置的工序、以及使核酸从磁性粒子M溶出至第四液柱40的溶出液的工序,其中,上述管200在内部依次配置有由油构成的第一液柱10、由不与油混和的第一清洗液构成的第二液柱20、由油构成的第三液柱30、由不与油混和的溶出液构成的第四液柱40以及由油构成的第五液柱50。
[0134]在本实施方式的核酸提取方法中,只要是使用吸附液能够吸附核酸且能够在管200内移动的粒子,则能够使用各种(例如二氧化硅粒子、聚合物粒子、磁性粒子等)粒子,在以下进行说明的核酸提取方法的一个实施方式中,使用含有磁性体且能够在粒子表面吸附核酸的磁性粒子M0此外,当使磁性粒子M以外的粒子等在管内移动的情况下,例如能够利用重力、电位差来执行此动作。
[0135]在本实施方式的核酸提取方法中,在容器120以及管200选择透过磁力的材质,通过从容器120以及管200的外部施加磁力而使磁性粒子M在容器120以及管200的内部移动。
[0136]在检体含有称为靶的核酸。以下,有时将其简称为靶核酸。靶核酸例如是DNA、RNA (DNA:Deoxyribonucleic Acid 和 / 或 RNA:Ribonucleic Acid)。革巴核酸通过本实施方式的核酸提取方法而从检体被提取,在将其溶出至溶出液后,例如利用为PCR的模板。作为检体,能够列举血液、鼻腔粘液、口腔粘膜、其他各种生物体试料等。
[0137]3.1.向容器导入检体的工序
[0138]向容器120导入检体的工序例如能够使检体附着于棉棒,从容器120的开口 121插入该棉棒,将其浸渍在吸附液来进行。另外,检体也可以利用移液管等从容器120的开口121导入。另外,若检体为糊状、固体状,则例如也可以从容器120的开口 121利用匙、镊子等使其在容器120的内壁附着而将其投入。
[0139]3.2.使核酸吸附于磁性粒子的工序
[0140]使核酸吸附的工序通过摇动容器120来进行。对于该工序而言,若存在对容器120的开口 121进行密封的盖122,则使用该盖122对容器120进行密封而进行,则能够更加有效地进行。通过该工序,靶核酸因促溶剂的作用而吸附于磁性粒子M的表面。该工序中,除靶核酸之外,也可以在磁性粒子M的表面吸附靶核酸以外的核酸、蛋白质。
[0141]作为摇动容器120的方法,也可以使用旋涡式振动筛等装置,也可以利用操作人员的手使其振摇。另外,也可以利用磁性粒子M的磁性,边从外部赋予磁场边摇动容器120。摇动容器120的时间能够被适当地设定,但例如在容器120的大致形状是直径为20mm且高度为30mm左右的圆筒状的情况下,以利用手将容器120振摇10秒钟的程度将其充分地搅拌,从而核酸吸附于磁性粒子M的表面。
[0142]3.3.将容器与管连接的工序
[0143]接下来如图15所示,在管200的第一液柱10侧的端部连接容器120。对于管200内的各液柱而言,即使取下第一液柱10侧的栓110,由于存在第七液柱70侧的栓110,所以也难以在管200内移动。该工序当在管200的第一液柱10侧的端部安装有栓110的情况下取下该栓110来进行。而且,容器120以及管200以内容物不漏出的方式被连接,以内容物能够在容器120内部与管200的内部之间流通的方式被连通。
[0144]3.4.使磁性粒子移动的工序
[0145]若经过上述工序,则成为容器120内的吸附有核酸的磁性粒子M能够流通至管200的状态。作为将吸附有核酸的磁性粒子M导入管200的方法,可以使用利用重力、离心力的方法,不被特别地限制,但在本实施方式中,从容器120以及管200的外部施加磁力来进行。磁力例如能够通过永久磁铁、电磁铁等施加,但在从不产生发热等这点考虑,更加优选使用永久磁铁来施加。另外,在使用永久磁铁的情况下,可以利用操作人员的手移动磁铁来进行,也可以利用机械装置等来进行。磁性粒子M具有被磁力吸引的性质,因此利用该性质,使容器120以及管200与永久磁铁的相对配置变化,而从容器120内移动至管200。由此,磁性粒子M从第一液柱10依次通过各液柱移动至第四液柱40。磁性粒子M通过各液柱时的在各液柱的滞留时间不被特别地限定,也可以以在同一液柱内沿管200的长边方向往返的方式移动。
[0146]3.5.使核酸溶出的工序
[0147]若磁性粒子M到达第四液柱40,则通过溶出液的作用,使吸附于磁性粒子M的核酸溶出至第四液柱40的溶出液。若经过本工序,则成为核酸在溶出液中从检体溶出,而从检体中提取出核酸的状态。
[0148]3.6.作用效果
[0149]根据本实施方式的核酸提取方法,能够在极短时间内容易地进行核酸的提取。本实施方式的核酸提取方法使吸附有核酸的磁性粒子M在管200内移动,从而能够以较高的纯度获得含有核酸的溶出液。根据本实施方式的核酸提取方法,能够大幅度地减少用于PCR的前处理所需的时间与精力。
[0150]3.7.从管排出第四液柱的工序
[0151]本实施方式的核酸提取方法也可以包括使容器120变形而将第五液柱50以及第四液柱40从管200的与供容器120连接的端部相反一侧的端部排出的工序。
[0152]本工序能够在“3.5.使核酸溶出的工序”后,使容器120变形来进行。在排出第四液柱40时将第五液柱50先排出。此外,对管200的第五液柱50侧进行密封的栓110在本工序之前除去,从而预先使管200的第五液柱50侧的端部开放。
[0153]若对容器120施加外力以提高内压的方式使其变形,则因压力使各液柱从管200的第一液柱10侧向第五液柱50侧移动。由此,第五液柱50以及第四液柱40从管200的第五液柱50侧的端部依次被排出。第三液柱30 (或第七液柱70)也可以被排出,但第二液柱20 (或第六液柱60)不被排出。在该情况下,例如,只要将第三液柱30 (或第七液柱70)的体积设定为比其他液柱大,使第三液柱30 (或第七液柱70)在管200的长边方向的长度增大,则容易防止排出第二液柱20 (或第六液柱60)。
[0154]第四液柱40以及第五液柱50例如被排出至用于PCR的反应容器。因此,溶出液与油被分注于用于PCR的反应容器,但通常油不对PCR的反应带来影响,因此例如也能够在PCR的反应容器中预先收容与第五液柱50的油同种的油。另外,在该情况下,若在管200的前端位于油内的状态下进行本工序,则能够将含有靶核酸的溶出液在不与外部空气接触的情况下导入PCR的反应容器。在本实施方式的核酸提取方法包括本工序的情况下,能够将含有靶核酸的溶出液容易地分注于例如用于PCR的反应容器等。
[0155]3.8.变形例
[0156]3.8.1.使磁性粒子移动的工序的变形
[0157]图16是用于对本实施方式的核酸提取方法的一个变形方式进行说明的示意图。
[0158]在上述的“3.4.使磁性粒子移动的工序”中,对从外部对磁性粒子M施加磁力,由此使磁性粒子M从第一液柱10通过各液柱而移动至第四液柱40的过程进行了说明。但是,也可以在使磁性粒子M移动至第二液柱20时,使从外部施加的磁力变化,而使磁性粒子M在第二液柱20内振动、反复扩散凝聚来进行。由此,能够提高第二液柱20的第一清洗液所带来的磁性粒子M的清洗效果。
[0159]具体而言,如图16A、图16B所示,在使用一对永久磁铁410作为施加磁力的机构的情况下,利用永久磁铁410使磁性粒子M从容器120移动,通过第一液柱10,在磁性粒子M到达至第二液柱20时,若使一方的永久磁铁410远离管200,使另一方的永久磁铁410从对置的一侧靠近管200,则能够使磁性粒子M在第二液柱20内沿与管200的长边方向交叉的方向振动(图中A、B的方式的反复)。由此,能够提高第二液柱20的第一清洗液所带来的磁性粒子M的清洗效果。上述的磁性粒子M的清洗在将第二液柱20分割的情况、在管200内配置有第六液柱60的情况下,也可以适用于多个第二液柱20、第六液柱60。
[0160]另外,如图16C所示,仅使永久磁铁410远离管200,从而能够使磁性粒子M在第二液柱20内扩散。磁性粒子M的表面为亲水性,因此例如在第二液柱20中,即使减弱磁力使其扩散,也难以进入第一液柱10、第三液柱30的油中,因此也可以形成上述的方式。
[0161]具体而言,利用永久磁铁410使磁性粒子M从容器120移动,在磁性粒子M通过第一液柱10到达第二液柱20时,使永久磁铁410远离管200,而使磁性粒子M在第二液柱20内扩散。然后,能够再次利用永久磁铁410的磁力使磁性粒子M移动,通过第三液柱30
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