的年龄、体重、 一般健康状态、性别及饮食、给药时间、给药途径及组合物的分泌率、治疗期间、与具体的组 合物一起使用或者同时使用的药物等多样的因素和医药领域公知的类似因素来分别适用。
[0041] 发明的有益效果
[0042]本发明的单乙酰基二酰基甘油化合物在小鼠 T细胞淋巴瘤（mouse T cell lymphoma)细胞的EL-4细胞中抑制IL-4的表达，在诱发哮喘动物模型中减轻气道过敏性，且 抑制支气管内炎症细胞的扩散。另外，本发明的化合物在抑制血清和支气管肺泡灌洗液内 的IgE的生成，且对抑制肺部Th2细胞因子（IL-4、IL-5及IL-13)的表达上具有非常好的效 果，所以可以克服现阶段使用的哮喘治疗剂的副作用，作为无毒性且治疗效果卓越的化合 物可以有益的使用为哮喘的预防、治疗及改善用组合物。
【附图说明】
[0043]图1是表示关于本发明实验的整体概略图；
[0044]图2是表示EC-18对气道过敏性的效果的曲线图，NC为正常对照群、OVA为哮喘诱发 群、Mon为药物对照群、EC18-30及EC18-60为样品给药群（分别给药EC-18 30mg/kg及60mg/ kg)；
[0045] 图3是表示EC-18对肺泡灌洗液的炎症细胞数的效果的曲线图；
[0046] 图4是表示EC-18对肺泡灌洗液的细胞因子的分泌效果的曲线图；
[0047]图5是表示EC-18对血清内总IgE及卵清蛋白特异性IgE的分泌效果的曲线图；
[0048]图6是表示EC-18对肺部组织内的炎症反应的效果图；
[0049] 图7是表示EC-18对肺部组织内的黏液分泌的效果图。
【具体实施方式】
[0050] 以下，在下述例中更加具体的说明本发明，但是下述例是为了帮助理解本发明，并 不是为了限定本发明。
[0051 ] 实施例1:EL_4细胞中单乙酰基二酰基甘油化合物的细胞毒性评价
[0052] 添加胎牛血清(Fetal Bovine Serum) 10%的RPMI培养基(Gibco)中，将小鼠 T淋巴 瘤细胞的EL-4细胞以5xl04 cdk/mti的浓度悬浮，每100 M在96壁板上接种后培养12小时。之 后，用如下述表1所示的种类及浓度的单乙酰基二酰基甘油化合物(MADG)处理上述培养液 后，追加培养24小时的时间。如可数细胞数量的CCK-8(Dojindo公司）工具(Kits)上说明的 一样，添加 CCK-8溶液各10试，反应最少30分钟最多4小时的时间后，测定波长570nm处的吸 光度(OD)。细胞生存率(cellviabiIity)按下述数学式1计算，将其结果表示在下述表1中。 数学式1中阴性对照群显示将DMSO 0.2%处理的培养液。在下述表1所示，PLAG是指1_ palmitoyl-2-linoleoyl-3-acetylglycerol、POAG是指I-paImitoy 1-2-〇Ieoy 1-3- palmi toy I _2_pa Imi toy I _3_ace ty I gl y cero I、OPAG是指 1_〇 leoyl _2_pa Imi toy 1-3- linoeoyl-2-palmitoyl-3_acetylglycerol、LSAG是指 1-1 inoeoy 1-2-stearoy 1_3_ acetylglycerol〇
[0053] [数学式1]
[0054]
[0055] 【表1】
[0057]如上述表1所示，观察依据本发明的单乙酰基二酰基甘油化合物(MADG)浓度的EL-4细胞的细胞生存率的结果，确认了 EC-18在200yg/mL以下的浓度没有显示细胞毒性，而其 他化合物在20yg/mL以下的浓度下没有显示细胞毒性。
[0058] 实施例2:单乙酰基二酰基甘油化合物的EL-4 mRNA表达抑制
[0059]以实施例1的结果为基础，将上述单乙酰基二酰基甘油化合物以20yg/mL的浓度给 药，测定了在EL-4细胞中的依据PMA的IL-4 mRNA的表达抑制效果。具体的，由PMA(lng/mL) 诱导的IL-4 mRNA的表达量用实时聚合酶链式反应（Real-time polymerase chain reaction,real-time PCR,quantitative real time polymerase chain reaction,qPCR) 来测定。细胞准备是将EL-4细胞以I x 106cells/well的浓度分注在6壁板上培养12小时的 时间后，将单乙酰基二酰基甘油化合物以20yg/mL的浓度处理1小时的时间，将PMA以I ng/M 的浓度处理后，培养12小时。为了提取总RNA，使用Trizol B(invitrogen公司，美国）提取了 核糖核酸（RNA)，定量后，利用Omni scrip t RT kit (Qiagen ,GmbH，Hi Iden ,Germany)合成了 互补核酸（cDNA)。将合成的cDNA与模具和下述表2上的IL-4以及GATOH引物分别混合，使用 PCR mix(PCR Master Mix ,Bioneer ,Korea)在94 °C 温度下用 5分钟时间变性 (Denaturation)，以在95°C 中30秒、在60°C 中45秒、在72°C 中45秒反应30周期（cycle)后，72 °C中10分钟进行了使酶惰性化的PCR。如上述测定的EL-4细胞的IL-4 mRNA的表达抑制率在 下述表3中表示如下。下述表3中各样品名称如表1所述说明。
[0060]【表2】
[0064] 如上述表3中所示，处理PMA的群中IL-4的表达量增加了，以此为基准（100% )的时 候可以看出，单乙酰基二酰基甘油化合物显示了 20%至50%的表达抑制率。
[0065] 实施例3:卵清蛋白诱导哮喘模型以及样品给药
[0066] 6周龄的SPF(specific pathogen_free)Balb/c母鼠（20g)由Samtako(Korea)公司 提供。截止到实验当日，向动物提供了充分的固型饲料(未添加抗生剂，三养饲料Co.)和水， 并在温度为22±2°C、湿度为55± 15%、12小时（light-dark cycle)的环境下，适应一周以 后，使用于实验的。对如上所述进行1周驯化的小鼠，每隔两周，把悬浊有2mg的氢氧化铝 (A8222，Sigma-Aldrich ,MO ,USA)和卵清蛋白 20yg(A5503，Sigma-Aldrich)的磷酸盐缓冲液 200成，注入腹腔致敏。第一个卵清蛋白腹腔给药之后，从第21天起到第23天，利用超声波喷 雾器(NE-U12,Omron Corp. ,Japan)让小鼠吸入1%的卵清蛋白，吸入时间为30分钟。最后把 卵清蛋白暴露24小时之后，测定了气道过敏性，48小时之后，通过腹腔给药戊巴比妥钠 (50mg/kg，Entobal，HaniI，Korea)实施麻醉，然后，通过腹部静脉采血，实施切开支气管，利 用共1.4 ml的PBS对支气管肺泡实施灌洗，以此方法采样试料。把正常对照群(NC，给药卵清 蛋白及未吸入的群、哮喘诱发群(0VA，给药卵清蛋白及吸入的群）、药物对照群(Mon，给药 montelukast 30mg/kg+给药卵清蛋白及吸入的群）、样品给药群(EC18-30和EC18-60,把EC-18分别给药30mg/kg及60mg/kg+给药卵清蛋白及吸入的群)设定为实验群实施实验。药物及 样品是在第一个卵清蛋白给药之后，从第18天起到第23天，经口腔进行给药（图1)。每个群 各使用了 7只小鼠。
[0067] 实施例4:气道过敏性(Airway hyperresponsiveness)测定
[0068] 为了测定作为哮喘的主要症状之一的气道过敏性，利用了一腔体积描记法(one chamber plethysmography ,All Medicus，Korea)。气道阻力的程度通过测定enhanced Pause(Pehn)来进行评价。Pehn的测定是在正常呼吸状态下测定其基础值之后，利用超声波 喷雾器吸入I3BS，吸入时间为3分钟，然后测定了 3分钟。之后，将乙烯甲胆碱(A2251，Sigma-Aldrich)以12，25，50的浓度递增吸入后测定Pehn值，其结果如下述表4。
[0069] [耒 41
[0070]如上述表4所示，哮喘诱导群比起正常对照群其Pehn值大幅增加，作为药物对照群 的montelukast给药群则比起哮喘诱导群有意义地减少。同样，在EC-18给药群中，在30mg/ kg及60mg/kg下，均比起哮喘诱导群，其气道过敏性显著减少，此与montelukast给药群类似 (图 2)。
[0071] 实施例5:支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)分离及炎症 细胞数测定嗜酸粒细胞的增加是哮喘的主要特征之一，为了对其进行测定，按下列方法实 施:各个个体的支气管肺泡灌洗液回收后即刻利用台盼蓝(Trypan Blue)进行染色，以此利 用血球计(hemocytometer)计算除了死掉的细胞以外的总细胞数，然后，利用细胞离心涂片 器(Cytospin ,Hanil ,Korea)将细胞粘贴到幻灯片上之后，进行Diff-Quik染色（Sysmex， Switzerland)，然后通过利用显微镜对嗜酸粒细胞在内的其他炎症细胞进行镜检，然后，对 各