治疗的目的。具体的，治疗时，将能有效降低人YEATS4基 因表达水平的物质给药于患者。
[0028] 本发明第二方面公开了一种降低肿瘤细胞中YEATS4基因表达的分离的核酸分 子，所述核酸分子包含 ：
[0029] a)双链RNA，所述双链RNA中含有能够在严紧条件下与YEATS4基因杂交的核苷酸 序列；或者
[0030] b) shRNA，所述shRNA中含有能够在严紧条件下与YEATS4基因杂交的核苷酸序列。
[0031] 进一步的，所述双链RNA包含第一链和第二链，所述第一链和所述第二链互补共 同形成RNA二聚体，并且所述第一链的序列与YEATS4基因中15-27个连续的核苷酸序列基 本相同。较佳的，所述第一链的序列与YEATS4基因中19-23个连续的核苷酸序列基本相同； 更佳的，所述第一链的序列与YEATS4基因中19、20或者21个连续的核苷酸序列基本相同。
[0032] 更进一步的，所述双链RNA包含第一链和第二链，所述第一链和所述第二链互补 共同形成RNA二聚体，并且所述第一链的序列与YEATS4基因中的靶序列基本相同。
[0033] 所述双链RNA第一链和第二链的长度均为15-27个核苷酸；较佳的，长度均为 19-23个核苷酸；最佳的，长度均为19、20或者21个核苷酸。
[0034] 进一步的，所述双链RNA为小干扰RNA (siRNA)。更进一步的，所述小干扰RNA第一 链的序列如 SEQ ID N0 :17 所示，具体为 5' -CCAAUAGUUUACGGUAAUGUU-3'。
[0035] SEQ ID NO :17所示的siRNA为以SEQ ID NO: 1所示的序列为RNA干扰靶序列设 计的、针对人YEATS4基因的小干扰RNA的一条链，另一条链即第二链的序列与第一链序列 互补，该siRNA可以起到特异性沉默肿瘤细胞中内源YEATS4基因表达的作用。
[0036] 进一步的，所述shRNA包括正义链片段和反义链片段，以及连接所述正义链片段 和反义链片段的茎环结构，所述正义链片段和所述反义链片段的序列互补，并且所述正义 链片段的序列与YEATS4基因中15-27个连续的核苷酸序列基本相同。所述shRNA经加工后 可成为小干扰RNA (siRNA)进而起到特异性沉默肿瘤细胞中内源YEATS4基因表达的作用。
[0037] 更一步的，所述shRNA包括正义链片段和反义链片段，以及连接所述正义链片段 和反义链片段的茎环结构，所述正义链片段和所述反义链片段的序列互补，并且所述正义 链片段的序列与YEATS4基因中的靶序列基本相同。
[0038] 较佳的，所述正义链片段与YEATS4基因中19-23个连续的核苷酸序列基本相同； 更佳的，所述正义链片段与YEATS4基因中19、20或者21个连续的核苷酸序列基本相同。
[0039] 进一步的，所述shRNA的茎环结构的序列可选自以下任一 ：UUCAAGAGA、AUG、CCC、 UUCG、CCACC、CTCGAG、AAGCUU 和 CCACACC。
[0040] 更进一步的，所述shRNA的序列如SEQ ID N0:18所示，具体为：5' -CCAAUAGUUUAC G⑶AA腳UUUCAAGAGA AACAUUACC⑶AAACUAUUGG-3 '
[0041] shRNA经酶切加工后可成为siRNA，进而起到特异性沉默肿瘤细胞中内源性人 YEATS4基因表达的作用。
[0042] 编码本发明所述shRNA的基因片段的干扰慢病毒载体含有SEQ ID N0:1-5的任一 序列及其互补序列。
[0043] 所述双链RNA的第一链或所述shRNA的正义链片段与YEATS4基因中的靶序列基 本相同，所述YEATS4基因的靶序列即为siRNA用于特异性沉默YEATS4基因表达时，被所述 siRNA识别并沉默的mRNA片段所对应的YEATS4基因中的片段。
[0044] 较佳的，所述YEATS4基因中的靶序列含有SEQ ID N0:1-5的任一序列。
[0045] 进一步的，所述YEATS4基因来源于人。
[0046] 本发明第三方面，公开了一种YEATS4基因干扰核酸构建体，含有编码本发明所述 分离的核酸分子中的shRNA的基因片段，能表达所述shRNA。
[0047] 所述的人YEATS4基因干扰核酸构建体可以是将编码前述人YEATS4基因 shRNA的 基因片段克隆入已知载体获得。进一步的，所述YEATS4基因干扰核酸构建体为YEATS4基 因干扰慢病毒载体。
[0048] 本发明的YEATS4基因干扰慢病毒载体是将编码前述YEATS4基因 shRNA的DNA片 段克隆入已知载体获得，所述已知载体多为慢病毒载体，所述YEATS4基因干扰慢病毒载体 经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒后，感染肿瘤细胞，进而转录出本发明所述shRNA， 通过酶切加工等步骤，最终获得所述siRNA，用于特异性沉默YEATS4基因的表达。
[0049] 进一步的，所述YEATS4基因干扰慢病毒载体还含有启动子序列和/或编码肿瘤 细胞中可被检测的标记物的核苷酸序列；较优的，所述可被检测的标记物如绿色荧光蛋白 (GFP)〇
[0050] 进一步的，所述慢病毒载体可以选自：pLK0. l-puro、pLKO. 1-CMV-tGFP、 pLKO. 1-puro-CMV-tGFP、pLKO. 1-CMV-Neo、pLKO. 1-Neo、pLKO. 1-Neo-CMV-tGFP、 pLKO. 1-puro-CMV-TagCFP、pLKO. 1-puro-CMV-TagYFP、pLKO. 1-puro-CMV-TagRFP、 pLKO. l-pur〇-CMV-TagFP635、pLKO. 1-puro-UbC-TurboGFP、pLKO. l-pur〇-UbC-TagFP635、 pLKO-puro-IPTG-lxLacO、pLK0-pur〇-IPTG-3xLac0、pLPl、pLP2、pLP/VSV-G、pENTR/U6、 pLenti6/BLOCK-iT-DEST、pLenti6-GW/U6-laminshrna、pcDNAl. 2/V5-GW/lacZ、pLenti6. 2/ N-Lumio/V5-DEST、pGCSIL-GFP 或 pLenti6. 2/N-Lumio/V5-GW/lacZ 中的任一。
[0051] 本发明实施例具体列举了以pGCSIL-GFP为载体构建的人YEATS4基因干扰慢病毒 载体,命名为 pGCSIL-GFP-YEATS4-siRNA。
[0052] 本发明分离的核酸分子可用于制备预防或治疗肿瘤的药物，所述肿瘤为结肠癌。
[0053] 本发明的YEATS4基因 siRNA可用于抑制肿瘤细胞的增殖，进一步地可以用作治疗 肿瘤的药物或制剂。YEATS4基因干扰慢病毒载体则可用于制备所述YEATS4基因 siRNA。当 用作治疗肿瘤的药物或制剂时，是将安全有效量的所述核酸分子施用于哺乳动物。具体剂 量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
[0054] 本发明第四方面，公开了一种YEATS4基因干扰慢病毒，由前述YEATS4基因干扰慢 病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装而成。该慢病毒可感染肿瘤细 胞并产生针对YEATS4基因的小分子干扰RNA，从而抑制结肠癌细胞的增殖。该YEATS4基因 干扰慢病毒可用于制备预防或治疗肿瘤的药物。
[0055] 本发明第五方面，公开了一种用于预防或治疗肿瘤的药物组合物，其有效物质含 有前述的分离的核酸分子，YEATS4基因干扰核酸构建体或YEATS4基因干扰慢病毒中的一 种或多种的组合。
[0056] 进一步的，所述药物组合物含有1~99wt%所述双链RNA、shRNA、YEATS4基因干 扰核酸构建体或YEATS4基因干扰慢病毒，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
[0057] 在制备这些组合物时，通常将活性成分与赋形剂混合，或用赋形剂稀释，或包在可 以胶囊或药囊形式存在的载体中。当赋形剂起稀释剂作用时，它可以是固体、半固体或液体 材料作为赋形剂、载体或活性成分的介质。因此，组合物可以是片剂、丸剂、粉剂、溶液剂、糖 浆剂、灭菌注射溶液等。合适的赋形剂的例子包括：乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀 粉、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、等。制剂还可包括：湿润剂、乳化剂、防腐剂 (如羟基苯甲酸甲酯和丙酯）、甜味剂等。
[0058] 本发明还公开了所述药物组合物在制备治疗结肠癌的肿瘤治疗药物中的应用。
[0059] 该药物组合物的应用为肿瘤的治疗提供了一种方法，具体为一种预防或治疗对象 体内肿瘤的方法，包括将有效剂量的所述的药物组合物施用于对象中。进一步的，所述肿瘤 选自结肠癌。
[0060] 所述药物组合物用于预防或治疗对象体内肿瘤时，需要将有效剂量的所述的药物 组合物施用于对象中。采用该方法，所述肿瘤的生长、增殖、复发和/或转移被抑制。进一 步的，所述肿瘤的生长、增殖、复发和/或转移的至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、 70 %、80 %、90 %、95 %或99 %的部分被抑制。
[0061] 所述方法的对象可以为人。
[0062] 本发明第六方面，公开了一种用于降低肿瘤细胞中的YEATS4基因表达的试剂盒， 所述试剂盒包括：存在于容器中的所述分离的核酸分子，YEATS4基因干扰核酸构建体，和/ 或所述的YEATS4基因干扰慢病毒。
[0063] 综上所述，本发明设计了针对人YEATS4基因的5个RNAi靶点序列，构建相应的 YEATS4RNAi 载体，其中编码序列 SEQ ID N0 :1 的 RNAi 载体 pGCSIL-G