[0024]进一步地,所述改性膳食纤维是将膳食纤维经物理、化学或生物的方法处理而得 到的具有强持水性、膨胀性、增稠性、吸附性且网格结构丰富的可溶性纤维素含量高、生物 活性强、对人体益生菌群有重要的、积极作用的纤维素,与普通膳食纤维相比,其生物活性 作用更强大;
[0025]优选地,所述改性纤维是由菊粉、苹果纤维、燕麦纤维、小麦纤维中的一种或多种 经生物酶酶解而得到的;
[0026]更优选地,所述改性膳食纤维的制备方法,包括以下步骤:将菊粉、燕麦纤维、小麦 纤维按质量比5-7:2-4:1-2均匀混合,加入其质量3-7倍的水,室温100-3001、35-401(抱条件 超声提取l〇_15min,然后在电场强度20-40kV/cm,脉冲时间300-500ys,脉冲频率200-400HZ 条件下进行高压脉冲电场处理10-15min;用乳酸调节pH值为4.5-6.5,加入混合物质量0. Ιο. 3 % 的生物酶 ,于 45-55 °C 酶解 2〇-48min; 酶解液减压浓缩 、冷冻干燥 、低温粉碎至粒径为 0.1-0.3_即得改性膳食纤维;
[0027]所述生物酶为纤维素酶、木聚糖酶、漆酶、果胶酶按质量比3-5 :1-3:1-3:1-2均匀 混合。
[0028] 进一步地,所述益生菌粉剂益生菌活菌含量为:6X1012-8X1012cfu/g;
[0029] 所述益生菌粉剂包括以下益生菌粉剂中的任意一种或多种:例如:植物乳杆菌 (Lactobacillus plantarum)、两岐双岐杆菌(Bifidobacterium bifidum)、婴儿双岐杆菌 (B. infantis)、长双岐杆菌(B. longum)、短双岐杆菌(B.breve)、青春双岐杆菌 (B.adolescentis)、乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)、保加利亚乳杆菌 (Lactobacillus .Bulgaricus)、嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus )、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus);
[0030] 优选地,所述益生菌粉剂由以下重量份数的粉剂均匀混合而成:植物乳杆菌30-40 份,两岐双岐杆菌25-35份,乳双歧杆菌20-30份,嗜热链球菌10-20份,保加利亚乳杆菌12-15份,干酪乳杆菌8-10份,鼠李糖乳杆菌5-10份;
[0031] 更优选地,所述植物乳杆菌粉剂是以植物乳杆菌CGMCC N0.11763为出发菌按按常 规方法制备的,其中的冷冻保护剂以含有抗冻蛋白的动物或植物为原料,经高压脉冲电场 提取、超声波辅助微波提取和复配酶酶解而制得的,可有效提高植物乳杆菌粉剂在冷冻干 燥过程活菌存活率;
[0032] 优选地,所述保护剂的制备方法,包括如下步骤:将冬黑麦、沙冬青、鲨鱼皮胶原蛋 白分别清洗、沥干,按质量比8-10: 3-5: 2-4均匀混合,加入混合物料质量0.1-1倍的pH值为 3.8-4.5的乳酸润湿3-811,于-18-22°(:冷冻1-211后立即进行粉碎,冷冻料层厚度3-5〇11,粉 碎物粒径0.5-3mm,接着加入粉碎物质量10-20倍的水,用乳酸调节pH值为3.5-5.5,于室温 下在电场强度25-35kV/cm,脉冲时间300-500ys,脉冲频率200-300HZ条件下进行高压脉冲 电场处理20-30min;然后于室温在功率150-300W条件下进行微波辐照提取15-20min,同时 在功率200-300W,频率30-40KHZ条件下进行超声波辅助提取;加入提取液质量1-2%的复配 酶,于45-55 °C酶解30-50min;酶解液过滤、滤液浓缩、低温粉碎至粒径为0.1-0.3mm即得保 护剂;
[0033] 所述复配酶为纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、果胶酶、单宁酶按质量比3-5:2-4:1-3: 1-3:1-2均匀混合;
[0034]更优选地,所述微波辐照提取为间歇式提取,即微波辐照10s,间隔20s。
[0035] 本发明另一目的是提供上述干白葡萄酒的制备方法:包括以下步骤:
[0036] 1)按照配方,称取各组份原料,首先将玫瑰花分成花瓣,放入装有0.8-1.2%碳酸 氢钠溶液的超声波清洗机中于200-400W、20-40KHZ清洗3-5min,沥干,然后浸泡在质量百分 比为8-12%的丝胶肽溶液中10-15min,于-18-22°C冷冻30-50min后立即进行粉碎,冷冻料 层厚度3-5cm,粉碎物粒径0.3-0.5mm,接着加入粉碎物质量2-4倍的水,升温至30-40°C,用 乳酸调节pH值为2.5-4.0,加入粉碎物质量0.5-0.9 %的漆酶和0.1-0.3 %的硅藻土,搅拌均 匀,静置1.5-2.5h,接着于室温下在电场强度25-35kV/cm,脉冲时间300-500ys,脉冲频率 200-300HZ条件下进行高压脉冲电场处理20-30min;然后于室温在功率150-300W条件下进 行微波辐照提取15_20min,同时在功率200-300W,频率30-40KHZ条件下进行超声波辅助提 取;加入提取液质量1.5-2.5 %的混合酶,于40-50°C酶解30-50min得玫瑰花酶解液;
[0037] 进一步地,所述混合酶为纤维素酶、蛋白酶、果胶酶、单宁酶按质量比3-5:2-4:1-3:1-2均匀混合;
[0038] 进一步地,所述漆酶为多孔真菌漆酶;
[0039] 2)取干白葡萄酒质量的20-30%,控制温度40-45°C,边搅拌边加入改性膳食纤维、 低聚果糖、乳糖和玫瑰花酶解液,充分溶解20-40min,加入益生菌粉剂质量的50-60 %恒温 发酵3-5h,接着以0.8-1.0°(:/1^11的速率升温至50-55°(:,加入益生菌粉剂质量的40-50%恒 温发酵1.5-3.5h,最后以0.6-0.8°C/min的速率降温至40-45°C,继续发酵0.5-lh,发酵液依 次经40目、80目双联过滤器过滤,滤液经超高压均质机于2-4°C、140-160MPa均质,均质液经 130-135Γ超高温瞬时灭菌4-6s,最后依次经微滤、循环超滤浓缩至固形物含量为20-30% 得玫瑰干白生物活性浓缩液;
[0040] 3)将剩余干白葡萄酒和玫瑰干白生物活性浓缩液均匀混合,向其中加入过氧乙酸 溶液,使过氧乙酸浓度为400-450ppm,混合液于功率200-400W,频率30-40KHZ条件下进行超 声波处理5-10min,控制混合液温度为25-35Γ,然后通过连续式高压脉冲处理室处理,静 置、过滤即得干白葡萄酒;
[0041] 进一步地,所述过氧乙酸溶液的质量百分比浓度为10-30% ;
[0042] 进一步地,所述高压脉冲电场处理条件为电场强度25-30kV/cm、脉冲数40-50。
[0043] 本发明植物乳杆菌(1^(:1:(^&(3;[11118口1&1^&1'11111)乂!1于2015年11月30日保藏于中国 微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC),保藏号为CGMCC N0.11763,保藏 地址为:中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编:100101。
[0044] 植物乳杆菌益生特性如下:
[0045]本发明所提供的植物乳杆菌CGMCC N0.11763经实验发现能够在pH为1.50的条件 下存活,在1%胆盐培养4小时后仍处于存活状态;植物乳杆菌CGMCC N0.11763降解亚硝酸 盐速度快,分解能力达到10.9mg/h/kg,该菌种在生产泡菜时,整个发酵过程中亚硝酸盐浓 度在4.8mg/kg以下;CGMCC N0.11763在发酵60h小时后,对胆固醇降解率可达到64.76%。 CGMCC N0 · 11763黏附能力测定的自凝集率为95 · 71 %。
[0046] 植物乳杆菌CGMCC N0.11763对胆固醇降解能力研究和测定:
[0047] 取lml CGMCC N0.11763母液接种于10mL的MRS胆固醇液体培养基(胆固醇含量 0. 1mg/ml,pH 6.2)中,37°C的恒温静置分别培养20h、40h、60h备用,以接入lmL无菌水的MRS 胆固醇培养基为对照,取以上培养不同时间的菌液样品及对照液各lml,9000r/min,4°C下 离心10min,得到发酵上清液,邻苯二甲醛法测定上清液中胆固醇含量(具体为:取各上清液 0 . lml于相应的试管中,加冰醋酸0.3ml,lmg/ml的邻苯二甲醛0.15ml,缓缓加入浓硫酸 1. 〇ml,混合均匀。室温静置10min,于550nm下测吸光值)。每一处理3个重复,以同样方法制 作胆固醇标准曲线,计算上清液中胆固醇含量及降解率,结果见表1。可知,CGMCCN0.11763 对胆固醇有很好的降解作用,在发酵60h小时后,降解率可达到64.76%。
[0048]表1对胆固醇的降解情况。
[0049]
[0050] 植物乳杆菌CGMCC NO. 11763菌株的耐胆盐试验:
[0051 ] 取CGMCCNO. 11763菌液lmL接种菌种于含有不同胆盐(含量梯度为0.0%、0.2 %、 0.4%、0.6%、0.8%、1%)的1011^]\?5液体培养基(?!1=6.4),置于37°(:下分别培养0、2、411, 每个处理3个重复。各取lml样品菌液于9ml生理盐水中混匀,制备稀释度溶液,取0.1ml稀释 液于MRS中涂布,于37°C生化培养箱中倒置培养48小时(每个稀释度做3个平行)记录计算平 板上的菌数个数。结果见表2。可知该菌在胆盐浓度为1 %处理4h后菌的生长量依然达到 0· 59±0·92 X 107(cfu/ml),有很好的耐胆盐能力。
[0052] 表2耐胆盐能力检测[(土s) X 107cfu/ml]
[0053]
[0054] 植物乳杆菌CGMCC NO. 11763菌株的耐酸试验
[0055] 取HLX37母液按lml接种菌种于不同pH值(pH梯度为1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0)的 lOmLMRS液体培养基,置于37°C下分别培养0、2、4h,每一处理3个重复。各取lml样品菌液于 9ml生理盐水中混匀,制备稀释溶液,取0 . lml稀释液于MRS中涂布,于37 °C生化培养箱中倒 置培养48小时(每个稀释度做3个平行)记录平板上的菌落个数。结果见表3。说明该菌具有 很强的耐酸能力。
[0056] 表3耐酸能力检测[(土s) X 107cfu/ml]
[0057]
[0058] 植物乳杆菌CGMCC NO. 11763的黏附能力测定
[0059] 培养CGMCC NO. 11763(MRS液体培养基)、大肠杆菌DH5a(LB液体培养基)24h得发酵 液,分别置于3000r/min、4°C下离心10min,收集菌泥,分别用pH = 7.0的无菌磷酸盐缓冲液 (PBS)洗涤菌泥2次(即在菌落中加入PBS,震荡混合均匀后,置于3000r/min、4°C下离心 10min,收集菌体)。自凝集率(% :用无菌的roS将菌泥CGMCC NO. 11763制成在波长600nm处 的吸光值为0.4 ±0.1 (A 0)的悬浮菌液及菌悬液,静置24h后测定吸光值A 24,自凝集率 (%)公式为(A 0-A 24)/A 0。;他凝集率(%):将CGMCC如.11763和大肠杆菌0耶€[的悬菌 液调节成在波长600nm处的吸光值为0.6±0.1 (A 0)的混合悬浮菌液。静置24H后测定吸光 值A 24,他凝集率(% )公式为(A 0 -A 24)/A 0。测定结果见表5,可知CGMCC N0.11763的自 凝集率为95.71 %,有很强的黏附能力。
[0060] 表4黏附能力表
[0061]
[0062] 植物乳杆菌CGMCC NO. 11763的菌株生理特性
[0063] 所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)XH于2015年11月30日保藏于中国微 生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC),保藏号为CGMCC N0.11763,保藏地 址为:中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编:100101。 [0064]该菌株特点如下:在显微镜下观察,该菌株为短杆状,革兰氏染色呈阳性,无鞭毛, 不产芽孢;在固体培养基上,该菌菌落为白色,表面光滑,致密,形态为圆形,边缘较整齐。
[0065] 理化特征为:过氧化氢酶(-),明胶液化(-),吲哚实验( + ),运动性(-),发酵产气 (_),亚硝酸盐还原