列公式计算耐盐指数，各拟南芥的平均耐盐指数如表5所示：
[0150]
[0151] 使用SPSS统计软件17.0(SPSS Inc.，USA)对数据进行学生t测验分析。
[0152] 表5、转基因拟南芥的根长平均耐盐指数
[0153] _
[0154] 结果发现，野生型拟南芥（WT)、At-pGFPGUS、At-pCAMBIA33〇UPAt-pGFPGUS+ PCAMBIA3301 的耐盐指数基本无差异。结果显示，35S: SRRP1、35S: SRRP2和35S: SRRP1+35S: SRRP2的耐盐指数分别为WT的1.25、1.27和1.58倍；35S: SRRP1+35S: SRRP2的耐盐指数分别 为 35S: SRRP1 和35S: SRRP2的 1.27和 1.25 倍。表明，35S: SRRP1 和35S: SRRP2 可以提高拟南芥 的耐盐指数，35S:SRRP1和35S:SRRP2的联用可以进一步提高拟南芥的耐盐指数。
[0155] 3、苗期耐盐实验
[0156] 分别在MS培养基中点种消毒后的野生型拟南芥(WT)和步骤一的各转基因拟南芥 (35S:SRRPl-l、35S:SRRPl-2、35S:SRRPl-3、At-pGFP(iUS、35S:SRRP2-l、35S:SRRP2-2、35S: SRRP2-3、At-pCAMBIA3301、35S:SRRP1+35S:SRRP2-1、35S:SRRP1+35S:SRRP2-2、35S:SRRP1+ 35S: SRRP2-3 和 At-pGFPGUS+pCAMBIA3301)种子。
[0157] 播种10天后，各株系各取45株转移至营养土与蛭石（1:1)混合土中，每盆移栽5株， 正常培养浇水45d后，在托盘底部浇灌350mM NaCl，但土壤吸收盐溶液饱和后，去除盐溶液， 正常条件下培养，培养条件为相对湿度80%，温度20~24°C，光照强度80~200μπι 〇1/(πι2 · s)，光周期为16h光照和8h黑暗，观察植物在盐胁迫下的表型，盐胁迫8天后测定植株叶绿素 含量。
[0158]叶绿素含量的测定方法如下：80%丙酮萃取叶绿素，使用DU800分光光度计（Fy llerton，CA，USA)测量663和645nm的吸光率。叶绿素含量计算公式Chi = (0.0802 XA663+ 0.202\4645)/1，单位为11^/^，其中4663 4645分别是叶绿素溶液在波长66311111和64511111处的 吸光值。每个株系测定5个植株，W为植株重量。结果如图1、图2、图3和图4以及表6所示。使用 SPSS统计软件17.0(SPSS Inc.，USA)对数据进行学生t测验分析。
[0159] 表6、转基因拟南芥的在不同处理下的叶绿素平均含量(mg/g)
[0160]
[0161] 从图 1-图4可以看出35S: SRRP1、35S: SRRP2和35S: SRRP1+35S: SRRP2均比WT耐盐， 盐胁迫条件下野生型拟南芥失绿严重。野生型拟南芥(WT)、At-pGFPGUS、At-pCAMBIA3301和 At-pGFPGUS+pCAMBIA3301 的叶绿素含量基本无差异；35S: SRRP1、35S: SRRP2 和 35S: SRRP1+ 35S: SRRP2的叶绿素平均含量分别为WT的1.23、1.25和1.62倍;35S: SRRP1+35S: SRRP2的叶 绿素平均含量分别为35S:SRRP1和35S:SRRP2的1.31和1.29倍。表明，35S:SRRP1和35S: SRRP2可以提高拟南芥在NaCl模拟的盐胁迫环境中的叶绿素含量，35S: SRRP1和35S: SRRP2 的联用可以进一步提尚拟南芥在NaClfe；拟的盐胁迫环境中的叶绿素含量。
[0162] 结果表明，SRRP1和SRRP2可以提高拟南芥对NaCl模拟的盐环境的耐盐性，并且 SRRP1和SRRP2在提高拟南芥对NaCl模拟的盐环境的耐盐性中具有协同作用。
【主权项】
1. 成套耐盐蛋白质在下述1)-3)中任一种中的应用： 1) 调控植物耐盐性； 2) 制备提尚植物耐盐性广品； 3) 培育耐盐性植物； 所述成套蛋白质由耐盐相关蛋白1和耐盐相关蛋白2组成，所述耐盐相关蛋白1为如下 A11)、A12)或A13): All)氨基酸序列是序列1的蛋白质； A12)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺 失和/或添加且与植物耐盐性相关的蛋白质； A13)在A11)或A12)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质； 所述耐盐相关蛋白2为如下A21)、A22)或A23): A21)氨基酸序列是序列3的蛋白质； A22)将序列表中序列3所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺 失和/或添加且与植物耐盐性相关的蛋白质； A23)在A21)或A22)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。2. 成套生物材料在权利要求1中所述1) -3)中任一种中的应用;所述成套生物材料由与 权利要求1中所述耐盐相关蛋白1相关的生物材料和与权利要求1中所述耐盐相关蛋白2相 关的生物材料组成； 所述与权利要求1中所述耐盐相关蛋白1相关的生物材料为下述B11)至B17)中的任一 种： B11)编码权利要求1中所述耐盐相关蛋白1的核酸分子； B12)含有B11)所述核酸分子的表达盒； B13)含有B11)所述核酸分子的重组载体、或含有B12)所述表达盒的重组载体； B14)含有B11)所述核酸分子的重组微生物、或含有B12)所述表达盒的重组微生物、或 含有B13)所述重组载体的重组微生物； B15)含有B11)所述核酸分子的转基因植物细胞系、或含有B12)所述表达盒的转基因植 物细胞系； B16)含有B11)所述核酸分子的转基因植物组织、或含有B12)所述表达盒的转基因植物 组织； B17)含有B11)所述核酸分子的转基因植物器官、或含有B12)所述表达盒的转基因植物 器官； 所述与权利要求1中所述耐盐相关蛋白2相关的生物材料为下述B21)至B27)中的任一 种： B21)编码权利要求1中所述耐盐相关蛋白2的核酸分子； B22)含有B21)所述核酸分子的表达盒； B23)含有B21)所述核酸分子的重组载体、或含有B22)所述表达盒的重组载体； B24)含有B21)所述核酸分子的重组微生物、或含有B22)所述表达盒的重组微生物、或 含有B23)所述重组载体的重组微生物； B25)含有B21)所述核酸分子的转基因植物细胞系、或含有B22)所述表达盒的转基因植 物细胞系； B26)含有B21)所述核酸分子的转基因植物组织、或含有B22)所述表达盒的转基因植物 组织； B27)含有B21)所述核酸分子的转基因植物器官、或含有B22)所述表达盒的转基因植物 器官。3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于： B11)所述核酸分子为如下bll)-bl3)中任一种： bll)其编码序列是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子； bl2)与bll)限定的核苷酸序列具有75%或75%以上同一性，且编码权利要求1中所述 耐盐相关蛋白1的cDNA分子或基因组DNA分子； bl3)在严格条件下与bll)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1中所述耐盐相关 蛋白1的cDNA分子或基因组DNA分子； 1321)所述核酸分子为如下匕21)423)中任一种： b21)其编码序列是序列表中序列4的cDNA分子或DNA分子； b22)与b21)限定的核苷酸序列具有75%或75%以上同一性，且编码权利要求1中所述 耐盐相关蛋白2的cDNA分子或基因组DNA分子； b23)在严格条件下与b21)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1中所述耐盐相关 蛋白2的cDNA分子或基因组DNA分子。4. 下述H1-H4在权利要求1中所述1 )-3)中任一种中的应用： H1、权利要求1中所述耐盐相关蛋白2; H2、权利要求1中所述耐盐相关蛋白1; H3、权利要求2或3中所述与所述耐盐相关蛋白2相关的生物材料； H4、权利要求2或3中所述与所述耐盐相关蛋白1相关的生物材料。5. 根据权利要求1-4中任一所述应用，其特征在于:所述植物为双子叶植物或单子叶植 物。6. 植物耐盐产品，其特征在于:所述植物耐盐产品含有下述任一种： P1、权利要求1中所述成套耐盐蛋白质； P2、权利要求1中所述耐盐相关蛋白2; P3、权利要求1中所述耐盐相关蛋白1; P4、权利要求2或3中所述成套生物材料； P5、权利要求2或3中所述与所述耐盐相关蛋白2相关的生物材料； P6、权利要求2或3中所述与所述耐盐相关蛋白1相关的生物材料。7. 根据权利要求6所述产品，其特征在于:所述植物为双子叶植物或单子叶植物。8. -种培育具有耐盐性的转基因植物的方法，包括向受体植物中导入权利要求1中所 述耐盐相关蛋白2的编码基因和/或所述耐盐相关蛋白1的编码基因得到耐盐性高于所述受 体植物的耐盐性的转基因植物。9. 根据权利要求8所述方法，其特征在于:权利要求1中所述耐盐相关蛋白2的编码基因 为权利要求2或3中所述B21)所述核酸分子;权利要求1中所述耐盐相关蛋白1的编码基因为 权利要求2或3中所述B11)所述核酸分子。10.根据权利要求8或9所述方法，其特征在于:所述受体植物为双子叶植物或单子叶植 物。
【专利摘要】本发明公开了成套耐盐蛋白质及相关生物材料在调控植物耐盐性中的应用。本发明公开的成套耐盐蛋白质由耐盐相关蛋白1和耐盐相关蛋白2组成，耐盐相关蛋白1为氨基酸序列是序列1的蛋白质；耐盐相关蛋白2为氨基酸序列是序列3的蛋白质。实验证明，耐盐相关蛋白1和耐盐相关蛋白2可以提高植物对NaCl模拟的盐环境的耐盐性，并且耐盐相关蛋白1和耐盐相关蛋白2在提高植物对NaCl模拟的盐环境的耐盐性中具有协同作用，可利用耐盐相关蛋白1与其编码基因以及耐盐相关蛋白2与其编码基因提高植物的耐盐性。
【IPC分类】C12N1/15, C12N15/29, C12N1/21, C12N1/13, C07K14/415, C12N15/82, A01H5/10, A01H5/00, C12N1/19, C12N5/10
【公开号】CN105646683
【申请号】
【发明人】姜奇彦, 李丽丽, 张辉, 牛风娟, 孙现军, 胡正
【申请人】中国农业科学院作物科学研究所
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年3月1日