速为2000-3000转/分钟，例如可以是2000转/分钟、2100转/ 分钟、2200转/分钟、2300转/分钟、2400转/分钟、2500转/分钟、2600转/分钟、2700转/分钟、 2800转/分钟、2900转/分钟、3000转/分钟;所述离心的时间为10-20分钟，例如可以是10分 钟、11分钟、12分钟、13分钟、14分钟、15分钟、16分钟、17分钟、18分钟、19分钟、20分钟。
[0065] 优选地，所述细胞悬液的浓度为5-10 X IO6个细胞/mL，例如可以是5 X IO6个细胞/ mL、6 X IO6个细胞/mL、7 X IO6个细胞/mL、8 X IO6个细胞/mL、9 X IO6个细胞/mL、10 X IO6个细 胞/mL，优选为7 X IO6个细胞/mL。
[0066]本发明中所述免疫细胞为外周血单个核细胞，优选为T细胞、自然杀伤细胞或NTK 细胞中的任意一种。
[0067]与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
[0068] (1)本发明的免疫细胞冻存液和冻存方法，使得复苏细胞存活率达到93%以上，细 胞生物学特性不发生变化，保证了免疫细胞的生物学活性；
[0069] (2)本发明的免疫细胞冻存液中不含动物血清，因此不会引入外源蛋白，降低了动 物病原污染的可能性，不会对人体过继免疫治疗产生影响；
[0070] (3)本发明的免疫细胞冻存液和冻存方法有效解决了免疫细胞无法存储、长时间 运输的问题，实现了免疫细胞的本地采集、异地制备以及即时复苏的应用。
【附图说明】
[0071] 图1是本发明的免疫细胞冻存液冻存1个月复苏后的再次扩增NK细胞生长曲线图。
【具体实施方式】
[0072] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。本领域技术人员将会理 解，以下实施例仅为本发明的优选实施例，以便于更好地理解本发明，因而不应视为限定本 发明的范围。对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化，凡在本发明的精 神和原则之内，所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。 下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法;所用的实验材料，如无特殊说明， 均为自常规生化试剂厂商购买得到的。
[0073]实验材料及其来源：
[0074] I、实验环境:GMP实验室里的生物安全柜中操作。
[0075] 2、试剂:RPMI-1640培养基(THERMO,美国）、GT-T551/561 培养基(TAKARA)、人淋巴 细胞分离液(天津灏洋生物制品科技有限责任公司）、胎牛血清(GIBC0,美国）、二甲基亚砜 DMS0(WAK，德国）、生理盐水（杭州民生药业）、重组人白介素-2、人血白蛋白（上海莱士）、 Ultroser G(PALL)0
[0076] 3、器材：离心机（THERMO,美国）、T175培养瓶（NUNC，丹麦）、GT-A610培养袋 (TAKARA，日本）、程控降温仪(THERMO,美国）、生物安全柜（力康生物医疗科技控股有限公 司，香港）、ImL和5mL冻存管、50mL离心管(BD，美国）。
[0077] 实施例1:制备免疫细胞冻存液（重组人白介素-2+聚乙二醇+1，2_丙二醇+RPMI- 1640培养基+人血白蛋白）
[0078] 按体积含量，将1.0g/ml人血白蛋白、lOOU/mL的重组人白介素-2、0.1g/mL的聚乙 二醇、0.2g/mL的1，2-丙二醇和99 %的RPMI-1640培养基混匀，制得免疫细胞冻存液，于4°C 保存备用。
[0079] 实施例2:制备免疫细胞冻存液（重组人白介素-2+聚乙二醇+1，2_丙二醇+RPMI- 1640 培养基 + 人血白 蛋白）
[0080] 按体积含量，将1.0g/ml人血白蛋白、50U/mL的重组人白介素-2、0.15g/mL的聚乙 二醇、0.25g/mL的1，2_丙二醇和98%的RPMI-1640培养基混匀，制得免疫细胞冻存液，于4°C 保存备用。
[0081 ] 实施例3:制备免疫细胞冻存液（重组人白介素-2+聚乙二醇+1，2_丙二醇+RPMI- 1640 培养基 + 人血白 蛋白）
[0082] 按体积含量，将1.0g/ml人血白蛋白、200U/mL的重组人白介素-2、0.2g/mL的聚乙 二醇、0.3g/mL的1，2-丙二醇和95 %的RPMI-1640培养基混匀，制得免疫细胞冻存液，于4°C 保存备用。
[0083] 实施例4:制备免疫细胞冻存液(重组人白介素-2+聚乙二醇+1，2_丙二醇+淋巴细 胞培养基GT-T561+Ultroser G)
[0084] 按体积含量，将lOOU/mL的重组人白介素-2、0.2g/mL的聚乙二醇、0.3g/mL的1，2- 丙二醇和95%的淋巴细胞培养基GT-T561以及0.2g/mL的Ultroser G混匀，制得免疫细胞冻 存液，于4 °C保存备用。
[0085]实施例5:制备免疫细胞冻存液(重组人白介素-2+聚乙二醇+1，2_丙二醇+淋巴细 胞培养基GT-T561+Ultroser G+人血白蛋白）
[0086] 按体积含量，将50U/mL的重组人白介素-2、0. lg/mL的聚乙二醇、0.2g/mL的1，2-丙 二醇和86%的淋巴细胞培养基GT-T561以及0.5g/mL的Ultroser G和0.2g/mL的人血白蛋白 混匀，制得免疫细胞冻存液，于4°C保存备用。
[0087]实施例6:制备免疫细胞冻存液(重组人白介素-2+聚乙二醇+1，2_丙二醇+注射用 氯化钠 +Ultroser G+人血白蛋白）
[0088] 按体积含量，将50U/mL的重组人白介素-2、0. lg/mL的聚乙二醇、0.2g/mL的1，2-丙 二醇和86%的注射用氯化钠以及0.5g/mL的Ultroser G和0.2g/mL的人血白蛋白混勾，制得 免疫细胞冻存液，于4 °C保存备用。
[0089]实施例7:制备免疫细胞冻存液(重组人白介素-2+聚乙二醇+1，2_丙二醇+注射用 氯化钠 +Ultroser G)
[0090] 按体积含量，将lOOU/mL的重组人白介素-2、0.2g/mL的聚乙二醇、0.3g/mL的1，2-丙二醇和95%的注射用氯化钠以及0.2g/mL的Ultroser G混匀，制得免疫细胞冻存液，于4 °C保存备用。
[0091] 对比例1:制备免疫细胞冻存液(肽牛血清+DMS0+RPMI-1640)
[0092] 按体积百分比，将10 %的胎牛血清与10 %的DMSO和80 %的RPMI-1640培养基混匀， 制得免疫细胞冻存液，于4 °C保存备用。
[0093] 对比例2:制备免疫细胞冻存液(供体血浆+DMS0+RPMI-1640)
[0094] 按体积百分比，将10%的供体血浆与10%的DMSO和80%的RPMI-1640培养基混匀， 制得免疫细胞冻存液，于4 °C保存备用。
[0095] 对比例3:制备免疫细胞冻存液(供体血浆+DMSO+淋巴细胞培养基GT-T561)
[0096] 按体积百分比，将10 %的供体血浆与10 %的DMSO和80 %的淋巴细胞培养液GT- T561培养基混匀，制得免疫细胞冻存液，于4 °C保存备用。
[0097] 对比例4:制备免疫细胞冻存液(供体血浆+DMS0+SFM培养基）
[0098] 按体积百分比，将10 %的供体血浆与10 %的DMSO和80 %的SFM培养基（OpTmizer? CTS? T-Cell Expansion)混匀，制得免疫细胞冻存液，于4°C保存备用。
[0099] 实施例8:采用实施例1-7和对比例1-4的免疫细胞冻存液进行免疫细胞的冻存
[0100] 外周血经2000转/分钟，离心10分钟，分离去除上层血浆于-20 °C备用，下层浓