为10mmol/L、pH值为6.2的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠平衡缓冲液对S印hadex G_25Medium脱盐层析柱进行平衡，将步骤(8)中收集的洗脱蛋白液上样到脱盐层析柱进行脱盐，收集脱盐的蛋白液，然后将收集的蛋白液进行除病毒纳滤即获得目的蛋白原液。
[0068]所获得的目的蛋白原液采用SEC-HPLC方法检测，纯度可以达到99.5 %。
[0069]实施例2
[0070]—种纯化重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白的方法，其具体步骤为:
[0071]亲和层析
[0072](I)用 100mL 含有 lmol/L NaCl 的浓度为 10mmol/L、pH 值为 7.0 的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠平衡缓冲液对Mabselect亲和层析柱(5.0 X 20cm)进行平衡，将重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白的细胞培养上清进行上样，使重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白吸附于亲和层析介质上，上样结束后继续用含有lmol/L NaCl的浓度为10mmol/L、pH值为7.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠平衡缓冲液进行冲洗，再用浓度为10mmol/L、pH值为5.5的梓檬酸-梓檬酸钠缓冲液进行冲洗；
[0073](2)用浓度为lOmmol/L、pH值为3.0的醋酸平衡缓冲液对步骤(I)处理的亲和层析柱进行洗脱，使重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白从亲和层析柱上洗脱下来，收集洗脱蛋白液，然后用浓度为0.5mol/L的柠檬酸调节pH值至3.0进行病毒灭活；
[0074]阴离子交换层析
[0075](3)用 1200mL含有 lmol/L NaCl 的浓度为 10mmol/L、pH值为 7.0 的 Tris-HCl 平衡缓冲液对阴离子交换层析柱Capto Q (5.0 X 30cm)进行预平衡，再用浓度为10mmol/L、pH值为7.0的Tris-HCl平衡缓冲液进行平衡，将步骤(2)中病毒灭活后的蛋白液进行上样，使重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白吸附于阴离子交换层析介质上，上样结束后继续用浓度为10mmol/L、pH值为7.0的Tris-HCl平衡缓冲液进行冲洗，再用含有0.05mol/L NaCl的浓度为10mmol/L、pH值为7.0的Tris-HCl平衡缓冲液进行冲洗；
[0076](4)用含有 0.15mol/L NaCl 的浓度为 10mmol/L、pH 值为 7.5 的 Tris-HCl 平衡缓冲液对步骤(3)处理的阴离子交换层析柱进行洗脱，使重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白从阴离子交换层析柱上洗脱下来，收集洗脱蛋白液；
[0077]阳离子交换层析
[0078](5)用200mL含有lmol/L NaCl的浓度为20mmol/L、pH值为6.0的柠檬酸-柠檬酸钠平衡缓冲液对Capto S阳离子交换层析柱(2.6 X 20cm)进行预平衡，再用浓度为20mmol/L、pH值为6.0的柠檬酸-柠檬酸钠平衡缓冲液进行平衡，将步骤(4)中收集的洗脱蛋白液进行上样，使重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白吸附于阳离子交换层析介质上，上样结束后继续用浓度为20mmol/L、pH值为6.0的柠檬酸-柠檬酸钠平衡缓冲液进行平衡；
[0079](6)用含有0.lmol/L NaCl的浓度为20mmol/L、pH值为6.0的柠檬酸-柠檬酸钠平衡缓冲液对步骤(5)处理的阳离子交换层析柱进行洗脱，使重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白从阳离子交换层析柱上洗脱下来，收集洗脱蛋白液；
[0080]疏水作用层析
[0081](7)用 250mL 含有 0.9mol/L (NH4) #04的浓度为 20mmol/L、pH 值为 7.0 的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠平衡缓冲液对Butyl Sepharose 4B疏水层析柱进行平衡，将步骤￠)中收集的洗脱蛋白液进行上样，使重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白吸附于疏水层析介质上，上样结束后继续用含有0.9mol/L (NH4)2SOd^浓度为20mmol/L、pH值为7.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠平衡缓冲液进行平衡；
[0082](8)用含有 0.35mol/L(NH4)2S0^浓度为 20mmol/L、pH值为 6.5 的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠平衡缓冲液对步骤(7)处理的疏水层析柱进行洗脱，使重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白从疏水层析柱上洗脱下来，收集洗脱蛋白液；
[0083]脱盐层析
[0084](9)用含有0.02mol/L NaCl的浓度为10mmol/L、pH值为5.5的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠平衡缓冲液对Sephadex G_25Fine脱盐层析柱进行平衡，将步骤(8)中收集的洗脱蛋白液上样到脱盐层析柱进行脱盐，收集脱盐的蛋白液，然后将收集的蛋白液进行除病毒纳滤即获得目的蛋白原液。
[0085]所获得的目的蛋白原液采用SEC-HPLC方法检测，纯度可以达到99.3 %。
[0086]实施例3
[0087]—种纯化重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白的方法，其具体步骤为:
[0088]亲和层析
[0089](I)用 100mL 含有 0.9mol/L NaCl 的浓度为 20mmol/L、pH 值为 7.5 的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠平衡缓冲液对Mabselect Sure亲和层析柱(5.0X20cm)进行平衡，将重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白的细胞培养上清进行上样，使重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白吸附于亲和层析介质上，上样结束后继续用含有0.9mol/LNaCl的浓度为20mmol/L、pH值为7.5的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠平衡缓冲液进行冲洗，再用浓度为30mmol/L、pH值为6.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液进行冲洗；
[0090](2)用浓度为40mmol/L、pH值为4.5的柠檬酸-柠檬酸钠平衡缓冲液对步骤(I)处理的亲和层析柱进行洗脱，使重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白从亲和层析柱上洗脱下来，收集洗脱蛋白液，然后用浓度为0.lmol/L的磷酸调节pH值至3.5进行病毒灭活；
[0091]阴离子交换层析
[0092](3)用 1200mL 含有 0.9mol/LNaCl 的浓度为 30mmol/L、pH 值为 7.5 的 Tris-HCl 平衡缓冲液对阴离子交换层析柱DEAE Sepharose Fast Flow(5.0X30cm)进行预平衡，再用浓度为30mmol/L、pH值为8.0的Tris-HCl平衡缓冲液进行平衡，将步骤(2)中病毒灭活后的蛋白液进行上样，使重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白吸附于阴离子交换层析介质上，上样结束后继续用浓度为30mmol/L、pH值为8.0的Tris-HCl平衡缓冲液进行冲洗，再用含有0.02mol/L NaCl的浓度为30mmol/L、pH值为8.0的Tris-HCl平衡缓冲液进行冲洗；
[0093](4)用含有 0.lmol/L NaCl 的浓度为 30mmol/L、pH 值为 8.0 的 Tris-HCl 平衡缓冲液对步骤(3)处理的阴离子交换层析柱进行洗脱，使重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白从阴离子交换层析柱上洗脱下来，收集洗脱蛋白液；
[0094]阳离子交换层析
[0095](5)用200mL含有0.9mol/L NaCl的浓度为20mmol/L、pH值为6.0的柠檬酸-柠檬酸钠平衡缓冲液对CM Sepharose Fast Flow阳离子交换层析柱(2.6 X 20cm)进行预平衡，再用浓度为20mmol/L、pH值为6.0的柠檬酸-柠檬酸钠平衡缓冲液进行平衡，将步骤
(4)中收集的洗脱蛋白液进行上样，使重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白吸附于阳离子交换层析介质上，上样结束后继续用浓度为20mmol/L、pH值为6.0的梓檬酸-梓檬酸钠平衡缓冲液进行平衡；
[0096](6)用含有0.2mol/L NaCl的浓度为20mmol/L、pH值为6.0的柠檬酸-柠檬酸钠平衡缓冲液对步骤(5)处理的阳离子交换层析柱进行洗脱，使重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白从阳离子交换层析柱上洗脱下来，收集洗脱蛋白液；
[0097]疏水作用层析
[0098](7)用 250mL 含有 lmol/L (NH4) #04的浓度为 20mmol/L、pH 值为 6.5 的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠平衡缓冲液对Phenyl Sepharsoe 6Fast Flow疏水层析柱进行平衡，将步骤(6)中收集的洗脱蛋白液进行上样，使重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白吸附于疏水层析介质上，上样结束后继续用含有lmol/L (NH4) #04的浓度为20mmol/L、pH值为
6.5的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠平衡缓冲液进行平衡；
[0099](8)用含有0.6mol/L