H,s, -OCH3),3. 82 (2H,d,J= 6. 9Hz, -OCH2-),3. 80 (6H,s, 2X-OCH3),2. 86 (4H,brs,-CH 2CH2-),I. 40-1. 72 (9H,m), 0. 95 (6H,t,J= 6. 9Hz, 2X-CH3) 〇
[0166] 实施例19 2-(环戊氧基）-5-(3, 4-二甲氧基苯乙基）-1, 3-二甲氧基苯（CTX-18) 的制备
[0167]
[0168]参照CTX-12的合成方法，在50mL单颈瓶中加入鼓槌石斛素30mg(0. 094mmol)， K2C0326mg(0. 188mmol)，加DMF 3mL。滴加溴代环戊烷30 y L，80°C加热回流8h。冷却至室温， 加20ml乙酸乙酯混溶，水洗5次，每次10mL。有机层用无水Na2SO 4干燥，减压浓缩。产物 过硅胶柱纯化，PE: EA (15:1-5:1)洗脱，得黄色晶体13. Omg，产率35. 8 %。经鉴定为2-(环 戊氧基）_5_(3, 4-二甲氧基苯乙基）_1，3-二甲氧基苯。
[0169] ESI-MS m/z :404. 2 [M+NHJ+, 387. 2 [M+H]+,相对分子质量 386。
[0170] 1H-匪R(300MHz,CDCl3)S:6. 81 (1H,d,J= 8. 1Hz,H-5'），6. 73(1H,d,J= I. 8, 8. 1Hz,H-6'），6. 67 (1H,d,J=I. 8Hz,H-2'），6. 37 (2H,s,H-3, 5)，4. 76 (1H,t,J= 5. 4Hz ,-0CH-),3. 88 (3H,s, -OCH3),3. 85 (3H,s, -OCH3),3. 80 (6H,s, 2X-OCH3),2. 86 (4H,brs, -CH2C H2-),I. 91，I. 67,I. 58(8H，m)。
[0171] 实施例20 2-苄基-5-(3, 4-二甲氧基苯乙基）-1,3-二甲氧基苯（CTX-19)的制 备
[0172]
[0173]参照CTX-12的合成方法，在50mL单颈瓶中加入鼓槌石斛素30mg(0. 094mmol)， K2C0326mg (0. 188mmol)，加DMF 3mL。滴加溴苄30 y L，80°C加热回流8h。冷却至室温，加20ml 乙酸乙酯混溶，水洗5次，每次10mL。有机层用无水Na2SO 4干燥，减压浓缩。产物过硅胶柱纯 化，PE: EA (15:1-5:1)洗脱，得黄色晶体37. 3mg，产率96. 8 %。经鉴定为2-苄基-5- (3, 4-二 甲氧基苯乙基）-1，3-二甲氧基苯。
[0174] ESI-MS m/z: 426. 2 [M+NHJ+，409. 2 [M+H]+，相对分子质量 408。
[0175]1H-NMR (300MHz, CDCl3) 8：7. 5 2-7. 3 I (5H, m, ArH) , 6. 81 (1H, d, J = 8. 1Hz, H-5'），6. 71 (1H, d, J = I. 8, 8. 1Hz, H-6'），6. 67 (1H, d, J = I. 8Hz, H-2'），6. 37 (2H, s ，H-3, 5)，5. 00 (2H，s，-CH2-)，3. 88 (3H，s，-OCH3)，3. 86 (3H，s，-OCH3)，3. 81 (6H，s，2 X -OCH3)， 2. 87 (4H，s，-CH2CH2-)。
[0176] 表1本发明制得的鼓槌石斛素及鼓槌石斛素联苄类衍生物
[0177]
[0179] 实施例21鼓槌石斛素联苄类衍生物对A P诱导的PC12细胞毒性的保护作用实验 研究
[0180] 2.1细胞培养和给药
[0181] PC12细胞（肾上腺嗜铬细胞瘤，购自中科院上海细胞研究所）在湿度为95 %空气 并且含有5% 0)2的37°C环境下进行培养，培养液为添加青霉（lOOU/ml)，链霉素（100 yg/ ml)和10% FBS的DMEM。当培养瓶中的细胞长满后，细胞以1. 5*104个/孔接种在96孔板 上作为后续正常组、模型组和给药组使用。12h后，细胞换用含1 % FBS DMEM的培养基进行 培养，给药组先用不同浓度的化合物（终浓度为50, 25, 10 y M)预孵育0. 5h，然后给药组和 模型组分别加入A 0 25 35 (购自sigma公司）（终浓度为10 y M)，正常组不加药物和A 0 25 35 培养，空白组只加培养液（青霉（l〇〇U/ml)，链霉素（lOOμg/ml)和10%FBS的DMEM)，均培 养 24h。
[0182] 2. 2细胞活力检测
[0183] 细胞活力通过MTT比色法来进行定量检测。在药物作用结束后给药组、模型组和 正常组和空白组分别加入MTT溶液（终浓度0. 5mg/ml)，37°C下培养4小时。然后吸掉上清 液，细胞内的甲瓒用IOOyL DMSO进行溶解。每孔的吸光度用1500酶标仪（Thermo Fisher Scientific Co.)在570nm波长下进行检测。分别计算正常组、模型组和给药组的细胞存活 率，结果见表2。
[0184] 细胞存活率=(测试组OD值-空白组OD值V(正常组OD值-空白组OD 值）*100%，其中测试组指给药组或模型组。对于正常组，细胞存活率为100%。
[0185] 表2鼓槌石斛素及鼓槌石斛素联苄衍生物对AP诱导的PC12细胞毒性的实验结 果
[0188] 对合成的鼓槌石斛素联苄类衍生物进行抗A P诱导的PC12细胞毒性的保护作用 实验发现，这些化合物大多具有神经保护作用，优于或相当于鼓槌石斛素和模型组，其中 CTX-6、CTX-7、CTX-8、CTX-17、CTX-18和CTX-19的神经保护作用优于鼓槌石斛素和模型组， CTX-7、CTX-8、CTX-18和CTX-19在50 y M时细胞存活率均大于70% (模型组为53. 82% )， 且CTX-7保护作用最强，25 yM，50 y M的细胞存活率分别达到80. 12%和100. 78%，是一种 理想的神经保护化学实体，对治疗阿尔茨海默病有重要意义。
【主权项】
1. 一种鼓槌石斛素联苄类衍生物或其在药学上可接受的盐、水合物，所述的鼓槌石斛 素联苄类衍生物如结构式I所示：其中：R1Sc = 0、CH2、NH、S = O或共价键；R2为烷基、苯基、取代苯基、苯环取代的C13 烷基、C5-C6环烷基、含1个或多个0、S、N的5-6元不饱和杂环基团。2. 根据权利要求1所述的鼓槌石斛素联苄类衍生物，其特征在于：R C = 0、CH 2或 共价键；R2为C i 7烷基、苯基、卤素取代的苯基、苯环取代的C i 3烷基、C5-C6环烷基、含1个N 的5-6元不饱和杂环基团。3. 根据权利要求2所述的鼓槌石斛素联苄类衍生物，其特征在于：R C = 0时，R 2为 C1 7烷基、苯基、氯取代的苯基、苯环取代的C i 3烷基、含1个N的5-6元不饱和杂环基团； R1SCH2时，R2选自C17烷基； R1为共价键时，R 2为苯基、氯取代的苯基、苯环取代的C i 3烷基、C 5-C6环烷基、含1个N 的5-6元不饱和杂环基团。4. 根据权利要求3所述的鼓槌石斛素联苄类衍生物，其特征在于：所述的鼓槌石斛素 联苄类衍生物选自：4_ (3, 4-二甲氧基苯乙基）-2, 6-二甲氧基苯基乙酸酯、4-(3, 4-二甲 氧基苯乙基）-2, 6-二甲氧基苯基丙酸酯、4-(3, 4-二甲氧基苯乙基）-2, 6-二甲氧基苯基 丁酸酯、4-(3, 4-二甲氧基苯乙基）-2, 6-二甲氧基苯基异丁酸酯、4-(3, 4-二甲氧基苯乙 基）-2, 6-二甲氧基苯基戊酸酯、4- (3, 4-二甲氧基苯乙基）-2, 6-二甲氧基苯基-3-甲基丁 酸酯、4-(3,4_二甲氧基苯乙基）-2,6_二甲氧基苯基-2-丙基戊酸酯、4-(3,4_二甲氧基苯 乙基）-2, 6-二甲氧基苯基苯甲酸酯、4- (3, 4-二甲氧基苯乙基）-2, 6-二甲氧基苯基-4-氯 苯甲酸酯、4-(3,4_二甲氧基苯乙基）-2,6_二甲氧基苯基-3-苯基丙酸酯、4-(3,4_二甲氧 基苯乙基）-2,6_二甲氧基苯基-吡啶甲酸酯、4-(3,4_二甲氧基苯乙基）-2,6_二甲氧基 苯基异烟酸甲酯、5-(3, 4-二甲氧基苯乙基）-2-乙氧基-1，3-二甲氧基苯、5-(3, 4-二甲氧 基苯乙基）_1，3_二甲氧基_2_丙氧基苯、2_ 丁氧基_5_(3, 4_二甲氧基苯乙基）_1，3_二 甲氧基苯、5- (3, 4- >甲氧基苯乙基）异丁氧基-1，3- >甲氧基苯、5- (3, 4- >甲氧基苯 乙基）-2-异戊氧基-1，3_二甲氧基苯、5_(3, 4_二甲氧基苯乙基）-2-((2-乙基己基）氧 基）_1，3_二甲氧基苯、2_ (环戊氧基）_5_ (3, 4_二甲氧基苯乙基）_1，3_二甲氧基苯、2_辛 基_5_ (3, 4_二甲氧基苯乙基）_1，3_二甲氧基苯D5. 权利要求1-4任一一项所述的鼓槌石斛素联苄类衍生物的制备方法，其特征在于包 括：先合成鼓槌石斛素，再对鼓槌石斛素的4位羟基进行结构修饰得到鼓槌石斛素联苄类 衍生物； 鼓槌石斛素的合成方法为：以丁香醛为原料与乙酸酐反应得到4-甲酰基2, 6-二甲氧 基苯基乙酸酯，通过原得到4-羟甲基-2, 6-二甲氧基苯基乙酸酯，再与二氯亚砜 反应得到4-氯甲基-2, 6-二甲氧基苯基乙酸酯，进一步与三苯基膦反应得到（4-乙酰氧基 3, 5-二甲氧基苄基）-三苯基氯化磷，（4-乙酰氧基3, 5-二甲氧基苄基）-三苯基氯化磷 与3, 4-二甲氧基苯甲醛反应得到4-[ (Z/E)-3, 4-二甲氧基苯乙烯基）]-2, 6-二甲氧基苯 基乙酸酯，4- [ (Z/E) -3, 4-二甲氧基苯乙烯基）]-2, 6-二甲氧基苯基乙酸酯催化还原得到 4-(3, 4-二甲氧基苯乙基）-2, 6-二甲氧基苯基乙酸酯，最后得到鼓槌石斛素：鼓槌石斛素的4位羟基进行结构修饰得到鼓槌石斛素联苄类衍生物的线路为：其中：R1SC = 0、CH2、NH、S = O或共价键；R2为烷基、苯基、取代苯基、苯环取代的C13 烷基、C5-C6环烷基、含1个或多个0、S、N的5-6元不饱和杂环基团；X为OH、Br或Cl。6. 权利要求1-4任一一项所述的鼓槌石斛素联苄类衍生物或其在药学上可接受的盐、 水合物在制备神经保护药物中的用途。7. 权利要求1-4任一一项所述的鼓槌石斛素联苄类衍生物或其在药学上可接受的盐、 水合物在制备治疗阿尔茨海默病药物中的用途。
【专利摘要】本发明公开了一种鼓槌石斛素联苄类衍生物，所述的鼓槌石斛素联苄类衍生物如结构式Ⅰ所示，其中：R1为C＝O、CH2、NH、S＝O或共价键；R2为烷基、苯基、取代苯基、苯环取代的C1-3烷基、C5-C6环烷基、含1个或多个O、S、N的5-6元不饱和杂环基团。本发明还公开了一种简单高效的制备鼓槌石斛素联苄类衍生物的制备方法，以及在制备神经保护药物中和制备治疗阿尔茨海默病药物中的用途。本发明的鼓槌石斛素4-O-取代的联苄类衍生物对Aβ诱导的神经细胞凋亡有显著的保护作用，是潜在治疗AD的新化学实体。？。
【IPC分类】C07C69/24, C07C43/205, C07C67/08, A61P25/00, C07C69/612, C07C69/78, C07C41/01, C07C43/235, C07D213/803, C07D213/79, A61P25/28
【公开号】CN105175262
【申请号】
【发明人】冯锋, 曲玮, 关丽, 柳文媛, 李凌超, 郝艳峰, 陈垒
【申请人】中国药科大学
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年8月7日