7，OOODa)中透析24小时，除去有机溶剂，即得纳米粒溶液。其粒径约148.4nm(±0.65)(见图4)，电势_7.6mV(±0.37)。细胞毒性实验表明，其对多种癌细胞的杀伤效果明显优于自由蟾毒灵药物。如图5所示，靶向纳米药物对结直肠癌细胞株LoVo的杀伤效果，其IC50远低于自由蟾毒灵的IC50。
[0091]以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。
【主权项】
1.一种具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药，其为P(OEGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA)ο2.一种根据权利要求1所述的具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法，包括以下步骤: (1)制备中间产物P(OEGMA-co-BSMA-co-BEMA): 将一定量可逆加成断裂链转移引发剂BPTPA，寡聚乙二醇甲基丙烯酸酯0EGMA，含β -硫代羧基的单体BSMA，含有原子转移自由基引发剂的单体ΒΕΜΑ，溶剂和自由基引发剂加入玻璃管中，真空冻融三次后封管；之后，在20-80°C条件下反应0.5-40小时，得粗产物P (OEGMA-co-BSMA-co-BEMA)，最后将该粗产物 P (OEGMA-co-BSMA-co-BEMA)纯化处理得所述 P(OEGMA-co-BSMA-co-BEMA)； (2)制备中间产物P (OEGMA-co-BSMA)-g-P (DEA-co-BMA): 将一定量P (OEGMA-co-BSMA-co-BEMA)、DEA、BMA、溶剂和铜盐配体加入玻璃管中，真空冻融三次后加入铜盐，再真空冻融两次，然后封管；之后，在20-80°C条件下反应0.5-20小时，得粗产物P (OEGMA-co-BSMA) -g-P (DEA-co-BMA);最后将该粗产物P (OEGMA-co-BSMA) -g-P (DEA-co-BMA)过硅胶柱除去铜盐，浓缩，再经纯化处理得所述P (0EGMA-co-BSMA)-g-P(DEA-co-BMA)； (3)制备目标产物P (OEGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA): 将一定量 P (OEGMA-co-BSMA)-g-P (DEA-co-BMA)、NHS-OH、BUF、缩合剂和催化剂溶于有机溶剂中室温搅拌3-72小时；然后，加入一定量cRGD继续反应1-48小时，得粗产物P (0EGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA);最后将该粗产物 P (OEGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA)纯化处理得所述 P (OEGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA)。3.根据权利要求2所述的具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法，其特征在于，所述纯化处理为:水中透析，然后冷冻干燥。4.根据权利要求2所述的具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法，其特征在于，所述步骤(I)中的所述OEGMA的分子量为100-50000。5.根据权利要求2所述的具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法，其特征在于，所述步骤(I)中的所述溶剂选自DMF、DMS0、NMP、异丙醇、甲醇、乙醇、二氧六环和四氢呋喃中的一种或多种。6.根据权利要求2所述的具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法，其特征在于，所述步骤(I)中的所述自由基引发剂选自过氧化环己酮、过氧化二苯甲酰、叔丁基过氧化氢、偶氮二异丁腈、偶氮二异庚腈中的一种或多种。7.根据权利要求2所述的具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法，其特征在于，所述步骤(I)中的所述引发剂BPTPA:0EGMA:BSMA =BEMA:自由基引发剂的摩尔比为I:10-200:0.5-200:0.5-200:0.0l-108.根据权利要求2所述的具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的所述溶剂选自DMF、DMS0、NMP、异丙醇、甲醇、乙醇和四氢呋喃中的一种或多种。9.根据权利要求2所述的具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法，其特征在于，所述步骤⑵中的所述铜盐配体选自联吡啶、PMDETA和Me6TREN中的一种或多种。10.根据权利要求2所述的具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的所述铜盐选自溴化亚铜、氯化亚铜、溴化铜和氯化铜中的一种或多种。11.根据权利要求2所述的具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的所述P (OEGMA-co-BSMA-co-BEMA)中的BEMA:DEA:BMA:铜盐:铜盐配体的摩尔比为 1:10-500:10-500:0.1-10:0.1-1O012.根据权利要求2所述的具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中的所述缩合剂选自DCC、EDC、DIC中的一种或多种。13.根据权利要求2所述的具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法，其特征在于，所述步骤⑶中的所述催化剂选自吡啶、二甲氨基吡啶、三乙胺和羟基苯并三氮唑中的一种或多种。14.根据权利要求2所述的具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中的所述P (OEGMA-co-BSMA) -g-P (DEA-co-BMA)中的BSMA:NHS-OH:BUF:缩合剂:催化剂:cRGD 的摩尔比为 I:0.01-0.1:0.1-0.99:1-10:0.01-0.5:0.01-0.1o15.一种根据权利要求1所述的具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的纳米制剂，其特征在于，其中的纳米粒子的粒径为10?2000nm，包含的所述靶向前药为P(0EGMA-co-BUF-co-RGD)-g-P(DEA-co-BMA)。16.根据权利要求15所述的纳米制剂，其特征在于，所述纳米制剂为纳米粒溶液，其中，所述 P (OEGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA)的浓度为 0.001_30g/L，所述 P (0EGMA-co-BUF-co-RGD)-g-P (DEA-co-BMA)经过人体内代谢后，释放的活性药物BUF的摩尔浓度为 0.001-10000 μmol/Lo17.一种根据权利要求16所述的纳米粒溶液的制备方法，其特征在于，选自以下方法中的一种:复乳法，薄膜乳化法，乳化蒸发法，界面沉淀法，自组装法。18.根据权利要求17所述的纳米粒溶液的制备方法，其特征在于，所述制备方法为复乳法，包括步骤:将所述P (OEGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA)溶于二氯甲烷或二氯甲烷和丙酮的混合溶剂中，超声乳化，再加入到水分散介质中，再次超声乳化，然后室温下搅拌0.5-5小时，除去有机相，即得纳米粒溶液。19.根据权利要求17所述的纳米粒溶液的制备方法，其特征在于，所述制备方法为薄膜乳化法，包括步骤:将所述P (OEGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA)溶于丙酮中，旋转蒸发成膜，随后加入水溶液，室温下搅拌0.5-6小时，即得纳米粒溶液。20.根据权利要求17所述的纳米粒溶液的制备方法，其特征在于，所述制备方法为乳化蒸发法，包括步骤:将所述P (OEGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA)溶于丙酮/ 二氯甲烷的混合溶剂中，加入到水分散介质中，进行超声或高压乳匀乳化，所得乳液在室温下搅拌2-4小时，挥尽有机溶剂，即得纳米粒溶液。21.根据权利要求17所述的纳米粒溶液的制备方法，其特征在于，所述制备方法为界面沉淀法，包括步骤:将所述P (OEGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA)溶于丙酮中，在不断搅拌条件下，将所得丙酮溶液注入到水分散介质中，加压挥发去除丙酮，即得纳米粒溶液。22.根据权利要求17所述的纳米粒溶液的制备方法，其特征在于，所述制备方法为自组装法，包括步骤:将所述 P (OEGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA)溶于 DMSO 中，将所得溶液滴入一定量搅拌着的水中，之后将溶液装入透析袋中透析3-72小时，除去有机溶剂，即得纳米粒溶液。23.根据权利要求18、20、21中任一项所述的纳米粒溶液的制备方法，其特征在于，所述水分散介质选自右旋糖昔40-70、pluronic F68或聚乙烯醇(PVA)中的一种或多种，并且所述水分散介质的质量体积百分浓度为0.01-10%。24.根据权利要求18或20中所述的纳米粒溶液的制备方法，其特征在于，所述超声的强度为10-1000W。25.根据权利要求22所述的纳米粒溶液的制备方法，其特征在于，所述透析袋的截留分子量的范围为1000-10000Da。26.根据权利要求15所述的纳米制剂，其特征在于，所述纳米制剂为纳米冻干剂，其中，冻干支架剂选自海藻糖、葡萄糖、乳糖、煎糖、右旋糖苷、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇中的一种或多种，且所述冻干支架剂的质量百分浓度为0.01-20%。
【专利摘要】本发明提供了一种具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药，其为P(OEGMA-co-BUF-co-RGD)-g-P(DEA-co-BMA)；其中，POEGMA为具有长循环功效的水溶性高分子，BUF为具有抗肿瘤活性的化疗药物蟾毒灵，cRGD为能够有效主动靶向肿瘤组织的多肽，P(DEA-co-BMA)为具有内涵体逃逸功能的高分子；还提供了制备所述肿瘤靶向前药的方法，所述具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的纳米制剂及其制备方法，该纳米制剂，可在较低剂量条件下有效地杀伤癌细胞，其对多种癌细胞的杀伤效果明显优于自由蟾毒灵药物。
【IPC分类】A61K47/48, A61K31/585, A61P35/00
【公开号】CN105168230
【申请号】
【发明人】刘涛, 殷佩浩, 袁易, 彭文, 袁夏, 贾婷婷, 邱艳艳, 邹瑜, 石晓静, 于卉
【申请人】上海市普陀区中心医院
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年9月2日