后冷冻干燥。
[0059]在一个优选实施例中，上述具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法中，所述步骤(I)中的所述OEGMA的分子量为100-50000。
[0060]在一个优选实施例中，上述具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法中，所述步骤(I)中的所述溶剂选自DMF、DMS0、NMP、异丙醇、甲醇、乙醇、二氧六环和四氢呋喃中的一种或多种。
[0061 ] 在一个优选实施例中，上述具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法中，所述步骤(I)中的所述自由基引发剂选自过氧化环己酮、过氧化二苯甲酰、叔丁基过氧化氢、偶氮二异丁腈、偶氮二异庚腈中的一种或多种。
[0062]在一个优选实施例中，上述具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法中，所述步骤⑴中的所述引发剂BPTPA:0EGMA:BSMA:BEMA:自由基引发剂的摩尔比为1:10-200:0.5-200:0.5-200:0.0l-10
[0063]在一个优选实施例中，上述具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法中，所述步骤⑵中的所述溶剂选自DMF、DMS0、NMP、异丙醇、甲醇、乙醇和四氢呋喃中的一种或多种。
[0064]在一个优选实施例中，上述具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法中，所述步骤⑵中的所述铜盐配体选自联吡啶、PMDETA和Me6TREN中的一种或多种。
[0065]在一个优选实施例中，上述具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法中，所述步骤(2)中的所述铜盐选自溴化亚铜、氯化亚铜、溴化铜和氯化铜中的一种或多种。
[0066]在一个优选实施例中，上述具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法中，所述步骤(2)中的所述P (OEGMA-co-BSMA-co-BEMA)中的BEMA:DEA:BMA:铜盐:铜盐配体的摩尔比为 1:10-500:10-500:0.1-10:0.1-1O0
[0067]在一个优选实施例中，上述具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法中，所述步骤(3)中的所述缩合剂选自DCC、EDC、DIC中的一种或多种。
[0068]在一个优选实施例中，上述具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法中，所述步骤(3)中的所述催化剂选自吡啶、二甲氨基吡啶、三乙胺和羟基苯并三氮唑中的一种或多种。
[0069]在一个优选实施例中，上述具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的制备方法中，所述步骤⑶中的所述 P (OEGMA-co-BSMA)-g-P (DEA-co-BMA)中的 BSMA:NHS-OH:BUF:缩合剂:催化剂:cRGD 的摩尔比为 I:0.01-0.1:0.1-0.99:1-10:0.01-0.5:0.01-0.1。
[0070]第三方面，本发明提供了一种上述具有内涵体逃逸功能的肿瘤靶向前药的纳米制剂，其特征在于，其中的纳米粒子的粒径为10?2000nm，包含的所述靶向前药为P(0EGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA)。其中，以 P (OEGMA-co-RGD)为亲水壳层，以 BUF 和P (DEA-co-BMA)为疏水核。
[0071]在一个优选实施例中，所述纳米制剂为纳米粒溶液，其中，所述P (OEGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA)的浓度为 0.001_30g/L，所述 P (OEGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA)经过人体内代谢后，释放的活性药物BUF的摩尔浓度为0.001-10000 μmol/L。
[0072]在一个优选实施例中，本发明提供了一种上述纳米粒溶液的制备方法，其特征在于，选自以下方法中的一种:复乳法，薄膜乳化法，乳化蒸发法，界面沉淀法，自组装法。其中，所用到的有机溶剂包括乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙醇和二甲亚砜等各种适合于制备纳米粒溶液的有机溶剂。
[0073]在一个优选实施例中，所述制备方法为复乳法，包括步骤:取4mg P (0E GMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA)溶于200 μ L 二氯甲烷或二氯甲烷和丙酮的混合溶剂中，超声乳化(1s χ 4)，再加入2.2mL浓度为1%的pluron ic F68水分散介质中，再次超声乳化(1s χ 4) ο然后室温下搅拌0.5-5h除去有机相，即得纳米粒溶液。
[0074]在一个优选实施例中，所述制备方法为薄膜乳化法，包括步骤:取4mg P (OEGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA)溶于400 μ L丙酮溶剂中，旋转蒸发成膜，随后加入4mL的水溶液，室温下搅拌0.5-6h，即得纳米粒溶液。
[0075]在一个优选实施例中，所述制备方法为乳化蒸发法，包括步骤:取4mg P (0EGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA)溶于400 μ L丙酮/ 二氯甲烷的混合溶剂中，加入到2.2mL浓度为2%的含聚乙烯醇(PVA)的水分散介质中，超声或高压乳匀乳化，乳液在室温下搅拌2_4h，挥尽有机溶剂，即得纳米粒溶液。
[0076]在一个优选实施例中，所述制备方法为界面沉淀法，包括步骤:取4mg P (0EGMA-co-BUF-co-RGD)-g-P(DEA-co-BMA)溶于400 μ L丙酮溶剂中，在不断的搅拌条件下，将上述溶液注入2.2mL的浓度为2%的PVA水分散介质中，加压挥发去除丙酮，即得纳米粒溶液。
[0077]在一个优选实施例中，所述制备方法为自组装法，包括步骤:取4mg P (OEGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA)溶于200 μ L DMSO中，将溶液滴入2mL搅拌着的水中，之后将溶液装入透析袋中透析3-72小时，除去有机溶剂，即得纳米粒溶液。
[0078]在一个进一步优选的实施例中，所述的纳米粒溶液的制备方法，其特征在于，所述水分散介质选自右旋糖昔40-70、pluronic F68或聚乙烯醇(PVA)中的一种或多种，并且所述水分散介质的质量百分比为0.01-10%。
[0079]在一个进一步优选的实施例中，所述的纳米粒溶液的制备方法，其特征在于，所述超声的强度为10-1000W。
[0080]在一个进一步优选的实施例中，所述的纳米粒溶液的制备方法，其特征在于，所述透析袋的截留分子量的范围为1000-10000Da。
[0081]在一个优选实施例中，所述纳米制剂为纳米冻干剂，其中，冻干支架剂选自海藻糖、葡萄糖、乳糖、煎糖、右旋糖苷、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇中的一种或多种，且所述冻干支架剂的质量百分浓度为0.01-20%。
[0082]实施例1
[0083]CR⑶修饰的具有内涵体逃逸功能的聚(甲基丙烯酸寡聚乙二醇酯-Co-蟾毒灵-co-RGD)-g-聚(N，N-二乙氨基乙基甲基丙烯酸酯-Co-甲基丙烯酸正丁酯)肿瘤靶向前药，即 P (OEGMA-co-BUF-co-RGD)-g-P (DEA-co-BMA)的制备:
[0084](I) P (OEGMA-co-BSMA-co-BEMA)的制备:将 BPTPA(33mg 0.lmmol)、OEGMA (3.0g, 6mmol)、BSMA(686mg, 2.5mmol)、BEMA(140mg, 0.5mmol)和 AIBN(1.6mg)加入玻璃管中，并加入1mL 二氧六环，真空冻融三次后封管。之后，70°C反应5小时。反应所得粗产物在水中透析24小时除去杂质，冷冻干燥后，得到所述P (OEGMA-co-BSMA-co-BEMA)。经GPC测定所得 P (OEGMA-co-BSMA-co-BEMA)的分子量Mn= 30, 300，分子量分布 Mw/Mn= 1.07。
[0085](2) P (OEGMA-co-BSMA) -g_P (DEA-co-BMA)的制备:将 P (OEGMA-co-BSMA-co-BEMA) (606mg, 74 μ mo I Br)、DEA (822mg, 4.44mmol)、BMA (420mg, 2.96mmol)和PMDETA (13mg，74 μ mo I)加入玻璃管中，并加入10m L DMF，真空冻融三次后加入CUBr(llmg，74ym0l)，再真空冻融两次，然后封管。之后，60°C反应3小时。反应所得粗产物过硅胶柱除去铜盐，浓缩，然后在水中透析48小时除去杂质，冷冻干燥后，得到所述P (0EGMA-co-BSMA) -g-P (DEA-co-BMA)。经 GPC 测定所得 P (OEGMA-co-BSMA) -g-P (DEA-co-BMA)的分子量Mn= 70, 900，分子量分布Mw/Mn= 1.22，其核磁氢谱如图2所示。
[0086](3) P (OEGMA-co-BUF-co-RGD)-g-P (DEA-co-BMA)的制备:
[0087]将P (OEGMA-co-BSMA)-g-P (DEA-co-BMA) (709mg, 259 μ mol C00H)、NHS-OH (1.7mg, 15 μ mol)、BUF(70mg, 181 μ mol)、DCC(53mg, 259 μ mol)和 DMAP (3mg)溶于二氯甲烷中室温搅拌48小时。然后加入cRGD(3.7mg，6ymol)继续反应24小时。反应所得粗产物纯化:水中透析24小时除去杂质，冷冻干燥后，制得目标产物P (OEGMA-co-BUF-co-R⑶)-g-P (DEA-co-BMA)。经 GPC 测定所得 P (OEGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA)的分子量Mn= 77，500，分子量分布Mw/Mn= 1.21，其核磁氢谱如图3所示。
[0088]实施例2
[0089]P (OEGMA-co-BUF-co-RGD)-g-P (DEA-co-BMA)纳米粒溶液的制备:
[0090]取1mg P (OEGMA-co-BUF-co-RGD) -g-P (DEA-co-BMA)溶于 ImL DMSO 中，将溶液滴入9mL搅拌着的水中，之后将溶液装入透析袋(截留分子量为