接入装有灭菌后固体发酵培 养基的500L固体发酵罐中，培养条件：装料量50%，培养温度20-27 °C，湿度75-90%，通风 量0. 3-1. 0 (V/V)，培养时间15-40天。每隔3-10天开启搅拌10分钟。采用SGF固体发酵 罐；
[0032] 4.发酵培养结束，选择流化床等多种干燥方法，将物料干燥到水分含量在7 %以 下，对固体发酵物料进行粉碎既得灵芝菌固体发酵培养物。
[0033] 本发明固体发酵培养基的碳源主要选择麸皮、葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉、玉米芯 (粉碎后）等常用原料，氮源可以选择花生饼粉、蛋白胨、脱脂大豆蛋白粉、豆饼粉、酵母粉 等；需要添加的无机盐有磷酸二氢钾，硫酸镁。
[0034] 优选的，在上述固体发酵培养基中添加有质量比为2-6%粉碎后，过40-50目的当 归、3-8 %的粉碎后，过40-50目的板蓝根，2-5 %粉碎后，过40-50目的麝香草。
[0035] 所述红酵母培养物的制备方法如下：
[0036] 种子培养按酵母常规培养方法进行培养；
[0037] 发酵培养：初始pH为8,将种子培养液按接种量3-8%接种于发酵培养基，摇床转 速为50-80r/min，24-28°C培养10-15小时后调整温度为16-20°C进行低温静止培养，停止 搅拌，pH调整为3-5,保持2-4小时；之后阶梯形升温到24-30°C，pH调整为4. 6-5. 5,按照 2. 5%的添加量添加蛋白胨，按照2%的量添加酵母粉；摇床转速为50-100r/min，继续发酵 10-15h〇
[0038] 发酵结束后，发酵液经孔径10-1000ym粗滤，然后与10-20°C循环超滤浓缩去除 水分得固形物含量20-40 %浓缩液，浓缩液经真空冷冻干燥、超微粉碎得红酵母培养物。
[0039]发酵培养基质量体积比组成为：葡萄糖1 %，酶解玉米粉1-3%，蛋白胨2. 5%，硫 酸镁0. 02 %，磷酸二氢钾0. 15 %，铜含量150-200mg/L，氯化钠20 %，其余为水；
[0040] 所述酶解玉米粉的制备方法为：将玉米粉配料罐中，以V:m为2:1加入纯净水，调 节pH值3-7,加入中温淀粉酶，酶活为30u/g玉米粉，与酶活为30u/g玉米粉的蛋白酶，边 搅拌边升温至45-55°C保温15-30min，然后缓慢升温至60-65°C保温15-30min，冷冻干燥备 用。
[0041] 所述饲料添加剂由以下方法制得：
[0042] 粉碎后灵芝菌培养物、抗菌肽、蜂胶、女贞子萃取物、杜仲叶提取物、羊肚菌酶解 粉、红酵母培养物按照比例混合得到饲料添加剂。
[0043] 有益效果：
[0044] 1、本发明利用从海洋环境中分离获得一株高产胡萝卜素的富铜海洋红酵母WYN1， 通过静止培养方法有效的提高了酵母中胡萝卜素和铜产量。采用上述方法发酵培养海洋 红酵母WYN1，其生物量、类胡萝卜素产量及胞内铜含量分别为27g/L以上、35-40mg/L和 7240-8000yg/g干菌。研发中，发明人意外发现低温静止培养可以有效提高胡萝卜和铜含 量，是本发明的重要成果。
[0045] 2、由于本发明所使用的红酵母能够高产胡萝卜素，并且将培养基中的无机铜转化 为螯合铜进行富集，更好的促进了动物的生长发育，提高饲料利用率，对于哺乳母猪断奶窝 重可以提高59. 3 %，仔猪头日增重提高43. 3 %，腹泻率减少54. 1 %，对于断奶仔猪日增重 提高49. 1%，料肉比提高14. 7%，腹泻率减少10%，死淘率提高3. 7%。
[0046] 3、由于螯合铜具有良好的热稳定性，使得本发明所提供的饲料添加剂具有较好的 保存活性和热稳定性，使得添加剂的保存活性提高35%，热稳定性提高25%以上
[0047] 4、本发明女贞子进行粉碎破壁处理，使女贞子中功能因子实现全价溶出和高效提 取利用，分别采用有机溶剂和热水实现其中不同功效成分的有效提取，特别是控制温度分 段提取更是有效提高了女贞子提取物的提取效率和质量。
[0048] 5、本发明通过科学复配，将红酵母、灵芝菌实现了有机组合，特别是灵芝菌培养中 添加了中药成分，本发明产品可以有效降低抗生素类药物在饲养动物中的使用量，提高动 物肉制品的安全性，提尚动物的伺料利用效率，增强动物的免疫力，提尚伺养效益。
【具体实施方式】：
[0049] 实施例1:海洋红酵母菌WYN1的获得及耐铜能力驯化
[0050] (1)将从黄海海边采集新鲜的海虾、海星、海藻等生物样本，置于无菌的YEH)培养 基中，挑取红色或粉红色圆形菌落，进一步纯化培养。根据各菌种类胡萝卜素的积累量，筛 选类胡萝卜素产量高的菌种。其中类胡萝卜素产量较高的海洋红酵母WYN1，细胞为卵圆形， 没有假菌丝；在海水配置的YEro培养基上形成红色菌落，表面光滑，边缘整齐；在产孢培养 基上不产子囊孢子，多边芽殖，无掷孢子；不发酵糖，不形成类淀粉化合物，不同化肌醇。根 据上述特点，初步确定属于红酵母属（Rhodotorula)。斜面保存于冰箱中。
[0051] (2)海洋红酵母WYN1的发酵培养
[0052] 将菌种转接到斜面培养基上活化，28°C培养24h后，接种于液体种子培养基中， 28°(：振荡培养3611得种子液，按10%接种量接入装有6〇1^发酵培养基的25〇1^三角瓶中， 28°C，振荡培养48h(摇床转速为180r/min)。发酵培养基组成为葡萄糖2%，蛋白胨1%， 酵母膏1%，硫酸镁〇. 02%，磷酸二氢钾0. 15%，盐度20。28°C摇床培养48h，转速为180r/ min〇
[0053] (3)耐铜能力驯化
[0054] 将海洋红酵母菌WYN1接种于铜离子含量为50mg/L(硫酸铜配置）培养基中，置于 28°C，180r/min恒温摇床上震荡培养24h。然后从该培养物中取3ml发酵物接种到不含铜 的麦芽汁培养基中，培养24h。反复培养几代，使酵母在含铜的培养基中生长稳定，且数量不 再增多时，再逐步提高培养基的铜浓度。如此反复便可使得酵母菌能够适应铜离子含量为 300mg/l的环境，获得了耐铜的特性。本发明经过对海洋红酵母进行耐铜能力驯化后，能有 效地提高细胞生物量、类胡萝卜素的产量及酵母的富铜能力。
[0055] (4)细胞生物量的测定
[0056] 将发酵液3000r/min离心lOmin，弃上清液，菌体经无菌水洗2~3次后再次离心， 所得菌体置于60°C烘箱中干燥至恒重，准确称重。
[0057] (5)类胡萝卜素的提取：
[0058] 将lg干菌体放入100mL三角瓶中，加入5mL3mol/L的盐酸室温浸泡lh，沸水浴 4min，迅速冷却，3000r/min离心15min沉淀为细胞残渣，用丙酮定容至20mL萃取，得类胡萝 卜素浸提液。
[0059] (6)类胡萝卜素的测定
[0060] 将提取液适当稀释后，用722型分光光度计在475nm条件下测定光吸收值。按下 式计算类胡萝卜素含量：
[0061]
[0062] 式中：AAmax为475nm波长处的吸光度；D为测定试样时的稀释倍数；V为丙酮用 量（mL) ;0. 16为类胡萝卜素的克分子消光系数;W为红酵母菌体干重（g)。
[0063] (7)酵母含铜量测定
[0064] 用原子吸收法测定。
[0065] (8)菌种保藏
[0066] 将上述经过驯化的富铜海洋红酵母WYN1保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏 编号为：CCTCCNo:M2014592。
[0067] 胡萝卜素产量及胞内螯合铜含量分别为27. 52g/L、25. 12mg/L和6240yg/g干菌。 [0068] 实施例2 -种热稳定性好的饲料添加剂
[0069] 复合饲料添加剂重量分数组成如下：
[0070] 抗菌肽8份，蜂胶15份，女贞子萃取物20份，红酵母培养物25份，灵芝菌固体发 酵培养物30份，羊肚菌酶解粉25份，杜仲叶提取物12份；红酵母为CCTCCNo:M2014592 ;
[0071] 抗菌肽为上海楚肽生物科技有限公司销售产品；
[0072] 蜂胶为市售；
[0073] 所述女贞子萃取物制备方法如下：
[0074] 女贞子粉碎，过45目筛后，添加女贞子5倍重量无水乙醇浸渍提取，控制温度 40°C，3小时后调整温度为58°C维持1. 5小时，之后提取液浓缩、干燥得到乙醇提取物；乙醇 提取后的女贞子残渣中添加80°C热水，热水添加量为女贞子残渣重量的3倍，处理时间40 分钟，连续提取2次，将提取液真空浓缩后喷雾干燥，得到热水提取物；将上述乙醇提取物 和热水提取物合并粉碎，过60目筛，即得女贞子提取物。
[0075] 所述杜仲叶提取物的制备方法如下：
[0076] 杜仲粉碎后加入6倍软水，用粗磨研磨，并加入板蓝根，加入量以杜仲重量的 1. 5%，混合后经胶体磨研磨，调整胶体磨定子与转子的间隙为75微米，胶体磨流量控制为 0. 25吨/小时，之后浆液加入混合酶进行酶解，pH5. 3,温度48°C，酶解时间3. 5hr，所述混合 酶用量为浆