] -4小时后测量的pH为9.6 [0化6] -6小时后测量的pH为9.6 [0化7] -24小时后测量的pH为9.3 [0化引 -48小时后测量的抑为9.1
[0059] -72小时后测量的抑为9.1
[0060] -96小时后测量的抑为9.0。
[0061 ]因此观察到水凝胶与生物活性玻璃的组合物的pH值基本维持在9 W上的值，在该 值处表现出非特异性抗菌活性，其为生物玻璃的典型特点。
[006。 示例3
[0063] 评估抗菌活性
[0064] 对按照W上示例1中所述制备的可吸收载体联合抗生素(如庆大霉素和万古霉素） W及联合N-乙酷半脫氨酸(NAC)对表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌的抗菌活性进行评估。 通过根据EUCAST(欧洲委员会药敏实验，European Committee on Antimicrobial Susce^ptibiIity Testing)指南的肉汤微量稀释法对MIC(最小抑菌浓度)进行评价。
[0065] 将各个细菌分离物的标准化接种体接种在含有连续稀释的上述物质的96孔板中。 在37°C下在合适的气氛中解育18小时后，将能够抑制细菌的可见生长的试剂的最低浓度定 义为MIC。采用含有水凝胶形式的可吸收载体的=种不同的注射器，它们中的每个含有按照 W下制备的进行测试的=种抗菌产品之一：
[0066] 用Iml注射用水将60mg的按照上述实施例1中所制备的冷冻干燥形式的可吸收载 体复原，所述注射用水含有在W下浓度下进行评估的抗菌产品：
[0067] -庆大霉素:256iig/ml [006引-万古霉素：256]ig/ml
[00例 -N-乙酷半脫氨酸：lOOmg/ml
[0070] 得到的结果总结在下表1中，其中观察到用庆大霉素、万古霉素和NAC复原的水凝 胶如何具有比单独测试的抗菌物质低的MIC和因此相对于单独测试的各个试剂的测试具有 对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的高的抗菌活性，仅仅除外金黄色葡萄球菌中的水凝胶 +万古霉素，无论如何其维持了单独万古霉素的相同MIC。基于运些结果，结论是水凝胶和本 发明的组合物中测试的=种抗菌物质之间的相互作用导致单独抗菌活性的扩增。
[0071] 表1
[007；3]示例4
[0074] 素万古霉素联合后对水凝胶形式的可吸收载体的流变稳定性进行控制
[0075] 为了检查本发明的组合物的稳定性，通过在室溫（<25°C)和在2-8°C的溫度下(冰 箱)在0、4小时、8小时和24小时处对组合物的粘度进行测量对与抗生素万古霉素联合后的 水凝胶形式的可吸收载体的粘度的变化进行评估。
[0076] 特别地，用2ml在水溶液中为2%的抗生素万古霉素将按照上述示例1中所制备的 120mg冷冻干燥的可吸收载体素复原。对根据示例1的相同的过程但是在不同的时间内制备 的1和2两批次的注射器中的无菌可吸收载体进行测试。
[0077] 在下列时间对批次1和批次2获得的两批水凝胶的粘度进行测试：
[0078] ^^时间为o(与万古霉素水化后即刻进行）
[0079] ^分别在室溫和在2-8°C的溫度下在4小时的时间处
[0080] ^分别在室溫和在2-8°C的溫度下在8小时的时间处 [0081 ] ^^分别在室溫和在2-8°C的溫度下在24小时的时间处
[0082] 结果公开于下表2中：
[0083] 表 2
[0084]
[0085] 示例5
[0086] 在体内研究中，对植入本发明的可吸收水凝胶之后的局部效应进行评估。
[0087] 通过严格按照目前对动物实验的立法(第116/92条法规)和UNI EN ISO 10993-2， 2009的规定在博洛尼亚(意大利）的里佐利(Rizzoli)骨科研究所的临床前和外科研究实验 室进行对植入本发明水凝胶的局部效应的评估。
[0088] 在兔子动物模型中通过外科植入如上所述制备的组合物水凝胶+万古霉素进行试 验，并随后对植入一些时间后的局部效应进行评估。该评估试验的结果表明，水凝胶形式的 本发明的组合物在实验条件下和在所考虑的时间内没有引起对骨骼炎症反应和/或骨组织 的退化过程。此外，对不同的组织形态参数，特别是注射了本发明的水凝胶的动物的骨膜周 长、内皮质周长、髓质区、皮质区、皮质骨的厚度，进行了评估，没有检测到相对于用由在骨 组织修复中具有已被证明的疗效的透明质酸钢盐的商业产品（即由Fidia化rmaceutici (阿己诺泰尔梅，帕多瓦，意大利)生产的用于关节内使用的可注射溶液形式的HYALGAN'e 产品)组成的作为阳性对照的水凝胶处理的动物的任何显著差异。
[0089] 在植入本发明的组合物和植入对照的水凝胶12周时进行的组织学和组织形态研 究表明在骨组织中没有结构和形态改变。定性评估已检测到存在本发明的组合物的残留物 和对照材料的残留物，它们还存在于植入位点和形成的具有新骨形成区域的结缔组织。
[0090] 图1示出了取自植入本发明的水凝胶12周后的动物的组织样本用甲苯胺蓝、酸性 品红和快速变绿染色并放大10倍的光学显微镜的组织学图像。在图1的图像中，箭头表明随 着新骨形成的初始过程(绿色着色区域)存在围绕残留材料(M)的结蹄组织。
【主权项】
1. 一种组合物，包含至少负载有抗菌剂的可吸收载体，所述组合物用于通过局部外科 应用或内窥镜应用或者通过在患有下背痛的受试者的腰椎间盘和/或邻近的椎骨、韧带、肌 肉和/或关节中经皮注射所述组合物来治疗归类为的1型或2型Modic改变的所述下背痛或 治疗由化脓性椎间盘炎引起的所述下背痛，其中所述可吸收载体为可吸收的水凝胶。2. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述可吸收的水凝胶为包括水和浓度在1重量％ 和30重量％之间的透明质酸衍生物或其盐的水凝胶，其中所述透明质酸衍生物为分子量包 含于50.000和3.500.000道尔顿之间的透明质酸或其盐，其上连接有分子量包含于3.000和 900.000道尔顿之间的生物可降解并且生物可相容的聚酯的链，所述透明质酸或其盐具有 使所述衍生物的每100个透明质酸的D-葡萄醛酸/N-乙酰基-D-氨基葡萄糖重复单元包括1 至15个所述聚酯链的量。3. 根据权利要求1所述的组合物，包括至少选自以下的抗菌剂： -浓度包含于0.01重量％和30重量％之间的一种或多种抗生素； -浓度包含于0.01重量％和30重量％之间的一种或多种抗真菌类； -浓度包含于0.01重量％和20重量％之间的一种或多种金属； -浓度包含于0.01重量％和50重量％之间的一种或多种生物活性玻璃;和 -浓度包含于〇. 〇 1重量％和20重量％之间的N-乙酰基-半胱氨酸和其它抗菌半胱氨酸 衍生物;和 -浓度包含于〇. 〇 1重量％和20重量％之间的抗坏血酸或其盐类， 所有上述重量百分数是相对于所述组合物的总重量计算的。4. 根据权利要求3所述的组合物，其中 -所述一种或多种抗生素选自达托霉素、替加环素、特拉万星、氯霉素、夫西地酸、杆菌 肽、利福平、乙胺丁醇、链霉素、异烟肼、糖肽类、氨基糖苷类、头孢菌素类、大环内酯类、噁唑 烷酮类、喹诺酮类和氟喹诺酮类、多粘菌素类、磺胺类、四环素类和青霉素类； -所述一种或多种抗真菌类选自多烯抗真菌类、咪唑和三唑抗真菌类、烯丙胺类、棘白 菌素类和灰黄霉素； -所述一种或多种金属选自银、锌、铜、钴、钛和镍； -所述生物活性玻璃为S53P4玻璃， -所述抗坏血酸的盐类选自钠盐、钾盐、钙盐、镁盐和锌盐。5. 根据权利要求4所述的组合物，其中所述糖肽类选自替考拉宁和万古霉素，所述氨基 糖苷类选自庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星和奈替米星，所述头孢菌素类选自头孢唑林、头 孢西丁、头孢噻肟、头孢呋辛和拉氧头孢，所述大环内酯为红霉素，且所述噁唑烷酮类为利 奈唑胺。6. 根据前述权利要求中任一项所述的组合物，还包括不透射线的化合物。7. 根据权利要求6所述的组合物，其中所述不透射线的化合物为硫酸钡。8. 根据前述权利要求中任一项所述的组合物，临用时通过将分别包装在一次性无菌试 剂盒中的水中的所述抗菌剂和经过冷冻干燥的所述可吸收载体进行混合来制备。
【专利摘要】本发明涉及包含可吸收载体和至少抗菌剂的组合物，所述组合物用于通过局部外科应用该组合物治疗下背痛。
【IPC分类】A61K9/00, A61L26/00, A61L24/00
【公开号】CN105682640
【申请号】
【发明人】达维德·科瑞玛斯蔻理, 卡洛·卢卡·罗曼诺, 恩佐·米尼, 埃德加多·科瑞玛斯蔻理
【申请人】诺维格尼特股份有限公司, 梅罗股份有限公司
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2014年10月20日