科应用前，可W通过将其组分即刻进行混合来制备本发明的组合物，特别是 对于可W在低溫下保持直到临用时刻的抗生物。为了该目的，可W制备两种组分的一次性 无菌试剂盒。在使用前将组分进行混合还允许待加入组合物中的抗菌组分的量的多种变 化，运个量可W由外科医生在应用时根据腰椎疾病的程度来确定。
[0024] 除了上述两种基本组分，组合物可W包含其它组分，比如不透射线的化合物(如硫 酸领），W允许对组合物的位置和其再吸收的程度进行影像学评估。
[0025] 本发明的目的还在于一种通过局部外科手术应用或内窥镜应用或通过在腰椎间 盘和/或邻近的椎骨、初带、肌肉和/或关节中经皮注射水凝胶形式的本发明的组合物来治 疗患有归类为1型Modic变化或2型Modic变化的下背痛或由治疗化脈性椎间盘炎引起的下 背痛的患者。
[0026] 通过可W为或多或少侵入性的外科手术方法来局部应用本发明的组合物。
[0027] 可W通过开放手术应用，在运种情况下，对患者进行真实的手术，切开皮肤和下面 的部分W暴露出应用组合物的区域;该技术适合用于含有任何一种上述列出的生物可吸收 载体的组合物。
[0028] 可选地，可W采用具有显微手术途径，如具有经皮途径或内窥镜途径的较小侵入 性的方法;在运种情况下，优选地通过采用流体材料作为生物可吸收载体(如前面引用的改 性透明质酸的水凝胶)来制备组合物。
[0029] 在运两种情况下(开放手术或经皮/内镜镜途径），在应用组合物的手术期间，还可 W对椎间盘和/或邻近所感兴趣区域的组织和骨头进行外科清洗（"清创"）；其可W使用微 创或内窥镜刮匙、电动刀、射频和/或用生理盐水进行反复洗涂来完成。
[0030] 例如，在典型的经皮应用中，首先通过图像放大器或通过其它放射设备对患病的 椎间盘进行定位;随后引入直径逐渐增大的插管并从椎间盘和/或邻近的骨头和关节结构 取材，将其送检微生物和可能的组织学评估；用专用工具刮除病灶并优选地用生理盐水进 行洗涂。此时制备出添加有抗菌剂的水凝胶，并通过经皮途径将其引入到经过预先清洗的 病灶中。
[0031] 提供W下示例用W说明本发明而不对其进行限制。
[00扣]示例1
[0033] 制备可吸收载体
[0034] 在W下示例中所测试的水凝胶为下文报道的如在W申请人的名义的专利申请WO 2010/086421的1至3示例中所公开的W冷冻干燥的形式制备的透明质酸衍生物和聚乳酸衍 生物HA-PLA(B),且然后如在同一申请的示例5中所公开的将其转化为水凝胶。
[0035] 将分子量为1 SOOkDa的Ig透明质酸化A)溶解在100mL的抑为5.0的HCl的水溶液中， 然后使其在37°C下反应24小时。形成的产物具有通过尺寸排阻色谱法分析SEC确定的 230W)a的平均分子量。向该产物中加入四下基氨氧化锭(TBA-OH)直到pH为7;然后将反应混 合物进行彻底透析。
[0036] 通过冷冻干燥回收所形成的盐HA-TBA并通过Ih-醒R分析(〇2〇)对所形成的盐HA-TBA进行表征，其证实发生与TBA的交换且产率为100% dHA-TBA的Ih-NMR(化0)光谱显示W下 信号：S0.97(m，12H，N+-(Ol2-ai2-ai2-ai3)4);Sl.40(m，8H，N+-(afe-afe-afe-ai3)4);Sl.64 (m，8H，护-(CH2-CH2-CH2-CH3)4);S2.04(s，3H,-NH-CO-C出）；S3.82(m，8H，护-(CH2-CH2-C出-C 出)4)。
[0037] 然后按照论文"Folate receptor targeted biodegradable polymeric doxorubicin micelles"，Yoo H. S.等人，Journal of Controlled Release(2004)96:273-283中所描述的聚乳酸-共乙醇酸(PLGA)的合成路线制备聚乳酸(PLA)和N-径基班巧酷亚胺 的聚醋。
[003引将平均分子量为SkDa的2.4g PLA溶解在30ml二氯甲烧中。首先向该溶液中加入 0.25g的二环己基碳二亚胺(DCC)缩合剂，然后加入0. Hg的NHS，使反应在室溫下在24小时 内发生。在运段时间后，通过部分蒸发二氯甲烧将反应混合物进行浓缩且将产物沉淀在乙 醇中并用相同的溶剂对产物进行反复洗涂。然后对由此得到的固体在真空下进行过滤和干 燥。得到白色结晶固体，产率相对于起始PLA的量超过80重量％。Ih-醒R光谱证实发生了N-径基班巧酷亚胺对PLA的簇基的活化。衍生程度(表示为NHS连接的摩尔数和单独的PLA链的 摩尔数之间的比）为90%。
[0039] 产物化A-NHS(CDC13)的Ih-匪R光谱显示 W 下信号：S1.5eS 1.6 (d，3H，O-CO-CH (邸3)-OH;S，3H，〇-C〇-CH(C曲）-0-;S2.80(m，4H，OC-C此-C此-CO-) ;S4.3eS5.2(m，lH，O-CO-CH (C出）-OH; m，1H，O-CO-CH (C出）-0-)。
[0040] 使如上所述制备的透明质酸的四下基锭盐HA-TBA与聚乳酸和N-径基班巧酷亚胺 的聚醋PLA-N服反应得到如下的透明质酸和聚乳酸的水凝胶HA-PLA。
[0041 ] 在57化1的二乙胺(DEA)催化剂的存在下将600mg的HA-TBA溶解在48ml的无水DMSO 中。然后通过将3.6g的PLA-NHS溶解在6ml的无水DMSO中制备溶液;然后在I小时的时间内将 该溶液逐滴加入HA-TBA的第一溶液中；PLA-NHS的摩尔数和HA的N-乙酷基-D-氨基葡萄糖单 元的摩尔数之间的标称比为0.5。
[0042] 在40°C下在无水氣气氛围下24小时后，使反应混合物通过Dowex钢离子交换树脂 W将TBA与Na+进行交换。然后将洗脱液用蒸馈水进行透析W除去DMS0,然后进行冷冻和冻 干。将固体用丙酬反复洗涂并进一步进行干燥。
[0043] 得到的HA-PLA衍生物的FT-IR光谱在3540cm-i(HA的Vas OH+Vas NH)处显示谱带，在 1757畑1-1。1^\的乂33(：00)，1623畑1-1(齡的酷胺1)，1456畑1-1(乂33，口1^\的(：曲），1382畑1-1(乂3?1^\ 的邸3)，1189cm-i(vs PLA的醋基的C-0-C)，1089cm-i和1048cm-i(HA的醇和酸的C-0)处显示谱 带。
[0044] HA-PLA衍生物的Ih-NMR光谱（DMS〇-d6/D2〇 90:10)显示：51.25651.45(2(1，-0-(：0-CH(邸3)-0-二PLA); S1.85 (S，3H，-NH-CO-C出二HA);化.1 ppm(m，-O-CO-CH(邸3)-二PLA)。
[0045] 通过由与在SI.25和51.45(可归因于PLA链的甲基基团）处的质子相关的两个峰的 积分对PLA链的数目进行评估和由与可归因于-NHCOC曲基团的在SI.85处的质子相关的积 分对存在于HA中的N-乙酷基-D-氨基葡萄糖单元进行评估，且然后采用下式:DD= (PLA的摩 尔数/氨基葡萄糖单元的摩尔数）X 100对HA-PLA衍生物的化A中的衍生度(DD，％ )进行计 算。计算出按上述公开所制备的HA-PLA(B)衍生物的衍生度为3.5。
[OOW 示例2
[0047] SSt可吸收载体与生物玻璃结合并控制结合的pH的变化来制备本发明的组合 物。
[004引对于该试验，采用了BonAlive Biomaterials Ltd(S53P4)的生物活性玻璃。该生 物玻璃为尺寸<45wii的颗粒形式。所采用的可吸收载体为按照WO 2010/086421的示例5中 所公开的制备的水凝胶。下文中所采用的水为注射用水。
[0049] 首先，对通过将250mg的生物玻璃与Iml的水混合而得到的悬浮液的pH进行测量。 混合后立即形成凝胶状的悬浮液，该凝胶状的悬浮液迅速分开。将生物玻璃与水进行混合 物后立即测量的pH值为11.6。
[0050] 对于将生物玻璃与可吸收载体进行混合，程序如下:将60mg按照W上实施例1中所 述制备的注射器中的无菌冷冻干燥形式的可吸收载体与Iml的水进行水化，当水化完成后， 加入250mg生物玻璃553?4。1、2、4、6、24、48、72和96小时后对与生物玻璃混合的样品的抑进 行测量。
[0051] 混合物的外观为在96小时的观察过程中没有改变的凝胶状物质。组合物在24小时 后仅略微变得更加流杨。测量的pH值如下：
[0化2]-混合后立即测量的抑为10.3 [0化3] -1小时后测量的抑为9.9 [0054] -2小时后测量的抑为9.9 [0化5