作为对象的蛋白质(包括蛋白质片断及其部分肤），得到针对它的抗体(一次 抗体)的情况下，可使用W下方法。
[0097] 本发明优选通过免疫印迹法、Western印迹法、酶或巧光或放射性物质标记法、质 谱法、immunoMS法、表面等离子体共振法中的任一种W上的方法进行测定。
[0098] 另外，本发明的生物标记物在种类、量不同的情况下也可同时或分别测定。
[0099] 本发明更优选将运些蛋白质、肤或肤片断通过使用组合了二维色谱法和质谱的 2D-LC-MALDI-T0F-MS法、SRM/MRM法、immunoMS法，一次性测定多个蛋白质或它们的部分肤。
[0100] 此处，本发明中，将使用酶联免疫吸附试验（ELISA;Enzyme Linked Immmunosorbent Assay)、化学发光测J定法（CLIA;ChemiLuminescent Immunoassay)、方义身才 性免疫测定法(RIA; Radio Immunoassay)、酶活性测定法等的方法称为"酶或巧光或放射性 物质的标记法"。将使用抗体的运些方法称为"酶或巧光或放射性物质标记抗体法"。
[0101] 1.免疫印迹法
[0102] 最简单的方法。准备多级稀释的受试血清，将其中的一定量（1微升左右)滴加到硝 基纤维素膜等适当的膜上，进行风干。用含BSA等蛋白质的封闭液进行处理后，进行清洗，使 一次抗体反应，清洗后，使用于检测一次抗体的被标记的二次抗体反应。将膜清洗后，将标 记可视化，进行浓度测定。
[0103] 2. We stern 印迹法
[0104] 进行包含等电点或SDS-PAGE的一维或二维凝胶电泳后，将被分离的蛋白质暂时转 录到PVDF膜等适当的膜上，使用一次抗体和被标记的二次抗体，与上述免疫印迹法同样地 操作，对目标蛋白质的存在量进行测定。
[0105] 3.ELISA法
[0106] 使针对蛋白质或其部分肤的抗体结合在预先进行了特殊的化学修饰的微型滴定 板等载体上，将试样分级稀释后，在结合有抗体的微型滴定板上加入适当量的试样，进行培 养。然后进行清洗，除去没有被捕捉的蛋白质及部分肤。接下来，加入结合有巧光或化学发 光物质或酶的二次抗体，进行培养。
[0107] 检测是在加入各基质后，测定通过巧光或化学发光物质或酶反应而产生的可见光 来进行评价判定。可W代替抗体，使用能够与蛋白质或其部分肤结合的物质。例如可W使用 适体等。
[0108] 本发明优选使用针对上述(a)~(C)中记载的生物标记物的物质(例如抗体或适体 等)。
[0109] 进一步列举W下方法(参见专利文献2)，但并不限定于此。
[0110] 4.使用微阵列(微忍片)的方法
[0111] 微阵列是在载体(基板)上使能够与要进行测定的物质结合的物质整列（阵列）固 定化而得到的器件的总称。本发明的情况下，只要将针对蛋白质或部分肤的抗体或适体整 列固定化进行使用即可。
[0112] 测定是在固相化的抗体等中添加生物体试样，使要进行测定的蛋白质或部分肤结 合在微阵列上，接下来加入结合有巧光或化学发光物质或酶的二次抗体，进行培养。检测只 要在加入各基质后，对通过巧光或者化学发光物质或酶反应而产生的可见光进行测定即 可。
[0113] 5.质谱法
[0114] 质谱法中，例如使针对特定的蛋白质或其部分肤的抗体结合在预先进行了特殊的 化学修饰的微珠或基板(蛋白质忍片)上。微珠也可W是磁珠。基板的原料无限制。
[0115] 使用的抗体可W是（1)仅识别特定的蛋白质全长的抗体、（2)仅识别部分肤的抗 体、（3)识别特定的蛋白质和其部分肤两方的全部抗体、或上述（1)和(2)、（1)和(3)、或(2) 和(3)的组合。
[0116] 将试样用原液或缓冲液进行分级稀释后，将适当的量加入到结合有抗体的微珠或 基板上，进行培养。然后进行清洗，除去没有被捕捉的蛋白质及部分肤。然后，通过使用 MLDI-T0F-MS、SELDI-T0F-MS等的质谱仪对被捕捉到微珠或基板上的蛋白质及部分肤进行 分析，测定蛋白质、蛋白质片断及部分肤的峰的质量数和峰强度。将适当的内部基准物质W 一定量加入到原生物体试样中，对其峰强度进行测定，求出与作为对象的物质的峰强度之 比，由此能够确定原生物体试样中的浓度。该方法称为immunoMS法。
[0117] 另外，将试样用原液或缓冲液稀释或除去一部分蛋白质后，通过HPLC进行分离，通 过使用电喷雾电离化SI)法的质谱分析，能够进行定量。此时，根据通过使用进行了同位素 标记的内部基准肤的SRM/MRM法而获得的绝对定量，能够确定试样中的浓度。
[0118] 进而，除了上述方法，还可W通过使用二维电泳的方法、使用表面等离子体共振的 方法等，对蛋白质W及部分肤进行解析。
[0119] 本发明还包括如下方法:对从受试者采集到的生物体试样实施二维电泳或表面等 离子体共振法，W上述生物标记物的有无或量为指标，检测认知功能障碍疾病。
[0120] 本发明还包括能够检测上述生物体试样中的生物标记物的装置(例如检测装置、 测定装置、解析装置等）。本发明的该装置优选具备抗体或适体固定部(捕捉部)及测定部。 抗体或适体固定部优选具有将抗体或适体固定化的载玻片、96孔滴定板等固相载体。另外， 测定部中，优选设置分光光度计、巧光分光计等对应于检测对象的光检测机构。
[0121] 进而，本发明的装置也可W包含对得到的数据进行解析的解析部，解析部优选包 含数据处理装置及解析用软件。
[0122] 进而，在本发明装置所具备的包含CPU等的控制部或能够与之连接的系统（例如、 个人计算机、计算机?网络系统等）中，设置有能够执行上述本发明的认知功能障碍疾病的 检测、诊断等方法的程序或存储该程序的存储部或系统等。
[0123] 根据本发明，能够对受试者的认知功能障碍进行判定。进而，根据本发明，在轻度 阶段也能够对受试者的认知功能障碍进行评价，作为预防医学也是有用的。进而，对罹患认 知功能障碍疾病的患者实施屯、理疗法、药物疗法的情况下，障碍的发展如果得到了抑制，也 在血清等生物体试样中的蛋白质/部分肤的量上反映出来。通过对其进行测定，能够进行治 疗效果的评价和判定，还能够对药物开发祀生物体分子进行筛选。
[0124] 如后述实施例所示，本发明人准备多个肤，制作针对各肤的各抗体。使用运些抗 体，探索用于检测认知功能障碍疾病的生物标记物。此时，通过受试者操作特性曲线(R0C曲 线)进行分析，对各生物标记物的有用性进行评价。结果发现由序列号1所表示的氨基酸序 列形成的来自载脂蛋白A1的肤、包含序列号2所表示的氨基酸序列的来自甲状腺素运载蛋 白的肤、由序列号3所表示的氨基酸序列形成的来自补体C3的肤在利用受试者操作特性曲 线(R0C曲线)分析时是显示AUC 0.6W上的标记物。
[0125] 进而，研究能否通过多标记物区分认知功能障碍疾病(MCI及AD)和非认知功能障 碍的健康人。此时，利用逻辑回归分析进行调查研究。
[0126] 逻辑回归分析的解析结果，通过W甲状腺素运载蛋白及补体C3为多标记物，能够 W九成左右非常高的精度检测出认知功能障碍疾病。
[0127] 目P，本发明提供一种准确率高的多个认知功能障碍疾病检测用生物标记物的组合 选定方法，包括：（i)对受试者的生物体试样中的认知功能障碍疾病的巧巾W上生物标记物 分别进行测定，（ii)通过逻辑回归分析，对上述巧巾W上的生物标记物各自的测定结果进行 解析，（iii)基于上述解析结果选定认知功能障碍疾病的准确率高的生物标记物的组合。
[0128] 此时，优选使用逻辑回归分析，对NDC和MCI进行比较，与MCI区分的准确率优选为 80% W上、更优选为85% W上时，或对NDC和AD进行比较，与AD区分的准确率优选为85% W 上、更优选为90% W上时，区分为MCI或AD，选作用于对它们进行检测的生物标记物。
[0129] 另外，在上述(i)之前，可W对与受试者的生物体试样中的认知功能障碍疾病相关 的蛋白质或其部分肤利用R0C曲线进行分析，基于此，将AUC高的试样选定为认知功能障碍 疾病检测用生物标记物。将AUC达到0.6W上的蛋白质或其部分肤作为认知功能障碍疾病检 测用生物标记物是有用的。
[0130] 应予说明，R0C曲线及逻辑回归曲线如后述实施例所述。
[0131] 由此，能够选出最佳的生物标记物的组合，从而使认知功能障碍疾病的检测或诊 断等的准确率提高。因此，通过对选定的多个生物标记物进行测定，能够更客观且更高精度 地对认知功能障碍疾病进行检测、诊断等。
[0132] 该组合中，同时或分别测定上述(b)生物标记物及上述(C)生物标记物，基于运些 测定结果，能够用于认知功能障碍疾病的检测、诊断等，因为准确率最高，所W是优选的。
[0133] 本发明的方法可作为程序存储在包含CPU等的控制部及具备存储介质（USB存储 器、皿D、CD、DVD等）的硬件资源中，通过检查装置、选定装置等的控制部来执行。
[0134] 本发明也能够W使用上述(a)~（C)记载的生物标记物的认知功能障碍疾病检测 试剂盒的形式利用。
[0135] 本发明可制成认知功能障碍疾病的检测试剂盒，所述检测试剂盒用于测定选自上 述(a)生物标记物(ApoAl)、上述(b)生物标记物(TTR)及(C)生物标记物(C3)中的1种或巧中 W上的用于检测认知功能障碍疾病的生物标记物。
[0136] 其中，优选组合了（ C)生物标记物(C3)和上述(a)生物标记物(ApoAl)或(b)生物标 记物(TTR)的检测试剂盒。
[0137] 另外，本发明的检测试剂盒可W制成W能够同时或分别检测出运些标记物的方式 一并包含能够检测出上述(a)~（C)记载的生物标记物的全部试剂的一液型认知功能障碍 用检测试剂盒，或具有将能够检测出各生物标记物的试剂存放在各自的容器内的多个(2或 3W上)检测试剂盒的认知功能障碍疾病用检测试剂盒。
[0138] 另外，该检测试剂盒中，优选包含针对本发明的各生物标记物的抗体或适体。
[0139] 作为本发明的认知功能障碍疾病的检测方法，优选同时或分别测定生物体试样中 的、选自上述(a)生物标记物、上述(b)生物标记物及上述(C)生物标记物中的巧巾或巧巾W上 的用于检测认知功能障碍疾病的生物标记物。
[0140] 作为本发明的认知功能障碍疾病的检测方法，更优选包含：（i)同时或分别测定受 试者的生物体试样中的、选自上述(a)生物标记物、上述(b)生物标记物及上述k)生物标记 物中的巧巾或3种W上的用于检测认知功能障碍疾病的生物标记物，（ii)在至少巧巾W上的 生物标记物的测定结果被归类于认知功能障碍疾病的情况下，判断受试者为认知功能障碍 疾病。
[0141] 本发明也可采用W下的构成。
[0142] 旨P，本发明如下所述。
[0143] -种用于检测认知功能障碍疾病的生物标记物，所述用于检测认知功能障碍疾病 的生物标记物选自下述(a)、（b)及(C)中的1种或巧巾W上，
[0144