施例1所制备的20克从三七参中提取的原人参三醇类皂苷(主要含Rgl、Re、Rl 皂苷）中加入30毫升乙醇和270毫升0.02摩尔、pH5.0的柠檬酸缓冲液，搅拌溶解，加入上述 制备的粗酶液300毫升，在45°C搅拌反应48小时，用TLC法检测，反应液中主要为F1皂苷； c. 提取反应液中皂苷，得到人参稀有皂苷F1: 在反应液中加入1800毫升的乙醇混合，静止过夜使酶蛋白沉淀，离心分离酶蛋白沉淀， 加入210毫升缓冲液，即成回收酶，如上所述可重复使用。
[0044] 分离酶沉淀得到的酶反应上清液，经预先处理好的700毫升体积的D-280脱色大孔 树脂脱色，再用1500毫升质量浓度75%的乙醇液洗脱柱内的皂苷、其脱色液减压浓缩（回收 乙醇），用300毫升水稀释、经大孔树脂柱(AB-8或HP-20树脂）反复吸附皂苷，用4200毫升的 去离子水洗脱柱中的糖类等杂质，然后用3500毫升的质量浓度85%乙醇洗脱皂苷，减压浓 缩，结晶、干燥，得11克反应产物FI，HPLC检测，其纯度90%以上。
[0045]上述反应中，从人参或者西洋参根或者三七参根提取的人参三醇类皂苷，利用含 有机溶剂(丙醇、丙酮、乙醇或甲醇）的缓冲液(醋酸缓冲液、柠檬酸缓冲液或磷酸缓冲液）， 配制成人参三醇类皂苷(PPT)的底物溶液;底物溶液中缓冲液pH为4.5~6.0，浓度为0.01~ 0.5M，有机溶剂含量为质量浓度5~40%，人参三醇类皂苷(PPT)底物含量为质量浓度0.5~ 8%。其底物溶液粗酶液按照体积比1:0.1~10混合，在35~60 °C反应16~48小时，产物几乎都 是F1皂苷。加入反应液2~4倍体积的有机溶剂(丙醇、丙酮、乙醇或甲醇），同样沉淀酶蛋白、 离心收集酶蛋白，溶解在原酶液质量浓度70~80%的pH5的缓冲液(醋酸缓冲液、柠檬酸缓冲 液或磷酸缓冲液)中，酶可重复使用。
[0046]分离酶蛋白的离心上清，经脱色大孔树脂柱（柱体积，PPT皂苷原料重量的20倍体 积)脱色、减压浓缩、回收有机溶剂，其浓缩液经大孔树脂柱(柱体积，PPT皂苷原料重的20倍 体积)反复吸附皂苷，用5~8倍柱体积的去离子水洗脱糖等杂质;再用4~6倍柱体积的质量 浓度80~94%的有机溶剂(丙醇、丙酮、乙醇或甲醇)洗脱皂苷，浓缩、结晶、干燥、同样得到纯 度90%以上的F1稀有皂苷。
[0047] 实施例3: 人参自身皂苷酶复合物制备:取1公斤实施例1所述人参提取皂苷后的渣中加入6升的 去离子水，在55~65°C搅拌2~3小时，离心收集上清，高真空浓缩（品温65°C以下）至波美度 25(大约500毫升左右），即为人参自身皂苷酶复合物。
[0048] 将所得到的人参自身皂苷酶复合物与实施例1所得到C-K反应，在反应体系中加入 反应体积0.1~50%的甲酸、乙酸或柠檬酸降低pH反应，可制备四种异构体的人参二醇皂苷 J L· 〇
[0049] 具体如下:取20克实施例1的产物C-K皂苷、50克的人参自身皂苷酶复合物、去离子 水350毫升、柠檬酸25克混合，在70~75°C反应2小时。用TLC法检测，反应彻底后，加入400毫 升水饱和正丁醇萃取皂苷反应物，重复三次，合并正丁醇层，用600毫升的去离子水洗涤正 丁醇3~4次，减压浓缩（回收正丁醇）、干燥，得到12~14克人参二醇皂苷元。经HPLC检测，其 苷元是四种异构体组成，具体如图1及表1所示： 表1四种异构体人参二醇皂苷元的HPLC数据
从图1中可以看到，所制备的人参二醇皂苷元是由四种异构体组成，经核磁共振法测定 结构，四种异构体为20(S)_人参二醇皂苷元[20(S)-PPD01]、20(R)_人参二醇皂苷元[20 (R)-PPDol]、其20-羟基脱水的20(21) ,24-二烯人参二醇皂苷元[PPD01(-H20_20(21) ,24-diene] 和 20(22) ,24-二烯人参二醇皂苷元 [ΡΗ)ο1(-Η20-20(22) ， 24-diene]; 各皂苷元在总 皂苷元中的含量比32.4:16.7:23.3:27.6，产物中总皂苷元的质量含量为90%以上。
[0050] 上述结果，人参皂苷C-K水溶液和人参自身酶复合物酶(人参根干品原料计算）的 比例(重量)是1:0.1~10倍；甲酸、乙酸或柠檬酸的加量为反应体积的0.1~50%;反应液中 人参皂苷C-K质量浓度为0.1~10%，在60~85°C反应1.5~10小时内，得到同样的结果;产品 经HPLC检测，四种异构体人参二醇皂苷元含量为总苷元至质量的90%以上，其中20(S)_人参 二醇皂苷元和20(R)_人参二醇皂苷元在总皂苷元的含量比例为质量20~80%之间。
[0051 ] 实施例4: 人参自身皂苷酶复合物制备同实施例3。
[0052]将所得到的人参自身皂苷酶复合物与实施例2所得到F1反应，在反应体系中加入 反应体积0.1~50%的甲酸、乙酸或柠檬酸降低pH反应，可制备四种异构体的人参三醇苷元。 [0053] 具体方法可如下： 10克的F1皂苷、50克的人参自身皂苷酶复合物、去离子水120毫升、醋酸（乙酸)30毫升 混合，在70~75°C反应2小时；用TLC法检测，反应彻底后，加入200毫升水饱和正丁醇萃取皂 苷反应物，重复三次，合并正丁醇层，用300毫升的去离子水洗涤正丁醇3~4次，减压浓缩 (回收正丁醇）、干燥，得到6克人参三醇皂苷元。经HPLC检测，其苷元是四种异构体组成：如 图2及表2所示： 表2四种异构体人参三醇皂苷元的HPLC数据
从图2及表2中可以看到，所制备的人参三醇皂苷元是由四种异构体组成，经核磁共振 法测定结构，四种异构体为20(S)_人参三醇皂苷元[20(S)-PPT01]、20(R)_人参三醇皂苷元 [20(R)-PPT01]、其 20-羟基脱水的 20(21)，24-二烯人参三醇皂苷元[??1'01(-!120-20(21)， 24-diene]和20(22) ,24-二烯人参三醇皂苷元[PPT01(-H20_20(22)，24-diene];各皂苷元 在总皂苷元中的含量比26.5:22.4:14.4:36.7;产物中总皂苷元的质量含量为90%以上。 [0054]上述结果，人参皂苷F1水溶液和人参自身酶复合物(人参根干品原料计算）的比例 (重量)是1 :〇. 1~10倍；甲酸、乙酸或梓檬酸的加量为反应体积的0.1~50%;反应液中人参 皂苷F1质量浓度为0.1~10%，在60~85°C反应1.5~10小时内，得到同样的结果;既产物中四 种异构体的人参三醇苷元质量含量为90%以上，其中20(S)_人参三醇皂苷元和20(R)_人参 三醇皂苷元在总皂苷元的含量比例是20~80%之间。
[0055] 实施例5: 实施例3所制备的四种异构体人参二醇皂苷元的各皂苷元单体分离:采用常用的市销 的高效液相制备色谱仪(任何产品均可用）、用C18制备色谱柱、乙腈-水梯度洗脱分离。
[0056] 取10克实施例3所得人参二醇皂苷元，用C18制备色谱柱、乙腈-水梯度洗脱分离， 依次分别得到2.5克的20(S)_人参二醇皂苷元，1.2克的20(R)_人参二醇皂苷元，1.6克的 20-羟基脱水的20(21) ,24-二烯人参二醇皂苷元，1.8克的20-羟基脱水的20(22) ,24-二烯 人参二醇皂苷元;经HPLC检测，其四种皂苷元纯度均为90%以上。
[0057] 如图3所示：1，20 (S)-人参二醇皂苷元;2，20 (R)-人参二醇皂苷元;3，20-羟基脱水 的20 (21 )，24-二烯人参二醇皂苷元;4、20-羟基脱水的20 (22 )，24-二烯人参二醇皂苷元。
[0058] 实施例6: 实施例4所制备的四种异构体人参三醇皂苷元的各皂苷元单体分离:采用常用的市销 的高效液相制备色谱仪(任何产品均可用）、用C18制备色谱柱、乙腈-水梯度洗脱分离。
[0059] 取10克的实施例4制备的人参三醇皂苷元，用C18制备色谱柱、乙腈-水梯度洗脱分 离，依次分别得到1.4克的20(S)_人参三醇皂苷元，1.2克的20(R)_人参三醇皂苷元，0.9克 的20-羟基脱水的20(21) ,24-二烯人参三醇皂苷元，2.2克的20(22) ,24-二烯人参三醇皂苷 元;经HPLC检测，各皂苷元的纯度为90%以上。
[0060] 如图4所示： 1，20(3)-人参三醇皂苷元;2,20(1〇-人参三醇皂苷元;3,20-羟基脱水的20(21)，24-二 烯人参三醇皂苷元;4、20-羟基脱水的20 (22 )，24-二烯人参三醇皂苷元。
[0061] 为了确认实施例所制备的产物分别是人参皂苷C-K和人参二醇皂苷元的四种异构 体，人参皂苷F1和人参三醇皂苷元的四种异构体，用瑞士Bruke AVANCE 600超导核磁共振 波谱仪，探头为5mm ΒΒ0,溶剂为Pyridine-D5 (氖代吡啶），测定了上述所制备的C-K和人参 二醇皂苷元四种异构体单体，人参皂苷F1和人参三醇皂苷元的四种异构体单体结构:其13C-NMR数据，如表3所示： 表3.人参皂苷C-K和人参二醇皂苷元四种异构体，人参皂苷F1和人参三醇皂苷元四种 异构体13C-NMR数据(ppm)
表3的人参皂苷C-K和人参二醇皂苷元四种异构体，人参皂苷F1和人参三醇皂苷元四种 异构体的测定数据与参考文献： 1) In Tanaka, 0. and Kasai , R.：Saponins of ginseng and related plants, Progress in the chemistry of organic natural