方法的步骤(c)中，进行所述第二向SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳时，采用的浓缩胶中聚丙烯酰胺的质量百分含量可为3%_6%，采用的分离胶中聚丙烯酰胺的质量百分含量可为10%-20%。
[0043]更进一步，进行所述第二向SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳时，采用的浓缩胶中聚丙烯酰胺的质量百分含量具体为4%，采用的分离胶中聚丙烯酰胺的质量百分含量具体为15%。
[0044]在所述方法的步骤(c)中，进行所述第二向SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳时，可按照包括如下步骤的方法制备电泳胶:先在灌胶模具中灌入所述分离胶，静置直至所述分离胶凝固，接着灌入所述浓缩胶，得到垂直胶板，位于所述垂直胶板上部的所述浓缩胶的高度为1-3cm(如2cm)，位于所述垂直胶板下部的所述分离胶的高度10_15cm(如13cm)。
[0045]在所述方法的步骤(C)中，进行所述第二向SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法可包括如下步骤:将经步骤(b)平衡后的胶条放在所述电泳胶的顶端，用质量百分含量为0.8-
1.2%的琼脂糖溶液密封后置于电泳槽上，在电泳槽中加满电极缓冲液后，先在电流为3mA-5mA的条件下预电泳15-35分钟，然后在电流为30mA的条件下电泳2.5-4小时，完成所述第二向SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳;其中，所述电极缓冲液的溶剂为水，溶质及浓度如下:质量百分含量为0.2%-0.5%的Tris、质量百分含量为1.0%_1.6%的甘氨酸、质量百分含量为0.05%-0.15% 的 SDS。
[0046]更进一步，进行所述第二向SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法具体包括如下步骤:将经步骤(b)平衡后的胶条放在所述电泳胶的顶端，用质量百分含量为I %的琼脂糖溶液密封后置于电泳槽上，在电泳槽中加满电极缓冲液后，先在电流为4mA的条件下预电泳20分钟，然后在电流为30mA的条件下电泳3小时，完成所述第二向SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳;其中，所述电极缓冲液的溶剂为水，溶质及浓度如下:质量百分含量为0.3 %的Tris、质量百分含量为1.44%的甘氨酸、质量百分含量为0.1 %的SDS。
[0047]在所述方法的步骤(d)中，进行所述考马斯亮蓝染色的方法可包括如下步骤:将经过所述第二向SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳后的凝胶置于固定液中固定，然后转入染色液中染色，在转入脱色液中脱色。其中，所述固定液的组成如下:质量百分含量为40%的乙醇、质量百分含量为10%的冰乙酸，余量为水。所述染色液的组成如下:质量百分含量为0.02%的考马斯亮蓝R-350、质量百分含量为10%的冰乙酸，余量为水。所述脱色液的组成如下:质量百分含量为1 %的冰乙酸，余量为水。
[0048]更进一步，进行所述考马斯亮蓝染色的方法具体包括如下步骤:将经过所述第二向SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳后的凝胶放入到含有10ml的所述固定液的染色盒中，然后放在转速为60次/分钟的摇床上摇动30分钟后，将所述凝胶转入90cClOOml的所述染色液中，在60次/分钟的摇床上摇动10分钟后;将所述凝胶转入10ml所述脱色液中，在60次/分钟的摇床上摇动30分钟，重复3次;即可得到蛋白点鲜明的考马斯亮蓝染色后的凝胶。
[0049]在所述方法的步骤(d)中，所述对染色结果进行扫描及图像分析的方法包括如下步骤:将经考马斯亮蓝染色后的凝胶用UMAX扫描仪在参数为256阶灰度、600dpi条件下透射扫描，所得图像用ImageMaster? 2D Platinum软件(Amersham B1science)进行分析。
[0050]在本发明中，所述植物具体为构树。
[0051 ]本发明采取PEG沉淀叶片蛋白质中RuBisco蛋白的策略，具有简便、稳定、高效地从植物如构树叶片蛋白质中去除RuBisco蛋白的特点。利用本发明可以有效地降低超高丰度RuBisc0蛋白在双向电泳检测中对其他蛋白的掩盖效果。同时，提高碱性端蛋白聚焦效果，减轻蛋白点横向拖尾现象。去除RuBisco蛋白，对提升中低丰度蛋白分离检测效果对蛋白质组学研究具有重大意义。本发明为优化植物如构树叶片蛋白质组检测，运用生物技术手段进一步改良品种打下基础。
【附图说明】
[0052]图1为未经PEG沉淀去除RuBisco蛋白的构树叶片蛋白质(对照组)的双向电泳图谱，pH 3-10。其中，A部分为RuBisco蛋白大亚基(LSU)，B、C、部分为低丰度蛋白质。
[0053]图2为经PEG沉淀去除RuBisco蛋白的构树叶片蛋白质(实验组)的双向电泳图谱，pH 3-10。其中，A部分为RuBisco蛋白大亚基(LSU)，B、C、部分为低丰度蛋白质。
[0054]图3为图1和图2中A、B、C部分放大显示后的双向电泳图谱，并对A、B、C部分蛋白点进行统计。T代表图1，S代表图分别对应图1和图2中A、B、C的位置。
【具体实施方式】
[0055]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0056]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[°°57]实施例1、去除构树叶片蛋白质中RuBisco蛋白及效果检测
[0058]—、去除构树叶片蛋白质中RuBisco蛋白
[0059]1、制备匀浆
[0060]将0.5g构树叶片放入600yL的GMI匀浆液中研磨得到第一匀浆，将600yL的GMII匀浆液加入到第一匀浆中，研磨均匀后得到第二匀浆。
[0061 ] 所述GMI匀浆液的溶剂为pH为8的500mM Tris-HCl缓冲液(用去离子水配制)，溶质及浓度为:20mM MgCl2和ImM PMSF。
[0062]所述GMII匀浆液的溶剂为pH为8的500mM Tris-HCl缓冲液(用去离子水配制)，溶质及浓度为:20mM MgCl2、lmM PMSF和4% (体积百分含量)Nonidet P-40。
[0063]2、匀浆离心
[0064]在1000g的条件下，将所述第二匀浆4°C离心1min，取上清，记为第一上清液。
[0065]3、第一上清液离心
[0066]在所述第一上清液中加入1500yL浓度为400g/L的PEG4000溶液(溶剂为去离子水)，冰上静置30min，然后在1000g的条件下，4°C离心lOmin，取上清，记为第二上清液。
[0067]4、第二上清液离心
[0068]在所述第二上清液中加入500yL浓度为500g/L的三氯乙酸(TCA)溶液(溶剂为去离子水)，冰上静置40min，然后在1000g的条件下，4°C离心1min后，弃上清，得到蛋白粗沉淀。
[0069]5、蛋白粗沉淀的洗涤
[0070]向所述蛋白粗沉淀中加入4°C预冷的溶液A，然后在1000g的条件下，4 °C离心1min后，弃上清，得沉淀，完成一次洗涤。以第一次洗涤所得沉淀替代所述蛋白粗沉淀重复洗涤一次，所得沉淀即为去除了 RuB i s Co蛋白的构树叶片蛋白。
[0071]其中，所述溶液A的溶剂为丙酮，溶质及浓度为10g/L二硫苏糖醇(DTT)。在每一次洗涤时，所述沉淀与所述溶液A的体积比为1:4。
[0072]二、RuBisco蛋白去除效果的检测
[0073]实验组:步骤一获得的去除了RuBisco蛋白的构树叶片蛋白。
[0074]对照组:按照如下步骤(1)-(4)进行处理后获得的构树叶片蛋白。
[0075](I)将0.5g构树叶片放入600yL的GMI匀浆液中研磨得到第一匀浆，将600yL的GMII匀浆液加入到第一匀浆中，研磨均匀后得到第二匀浆。
[0076]所述GMI匀浆液的溶剂为pH为8的500mM Tris-HCl缓冲液(用去离子水配制)，溶质及浓度为:20mM MgCl2和ImM PMSF。
[0077]所述GMII匀浆液的溶剂为pH为8的500mM Tris-HCl缓冲液(用去离子水配制)，溶质及浓度为:20mM MgCl2、lmM PMSF和4% (体积百分含量)Nonidet P-40。
[0078](2)在1000g的条件下，将所述第二匀浆4°C离心1min，取上清，记为上清液。
[0079](3)在所述上清液中加入300yL浓度为500g/L的三氯乙酸(TCA)溶液(溶剂为去离子水)，冰上静置40min，然后在1000g的条件下，4°C离心1min后，弃上清，得到蛋白粗沉淀。
[0080](4)向所述蛋白粗沉淀中加入4°C预冷的溶液A，然后在1000g的条件下，4°C离心1min后，弃上清，得沉淀，完成一次洗涤。以第一次洗涤所得沉淀替代所述蛋白粗沉淀重复洗涤一次，所得沉淀即为未经PEG沉淀去除RuBisco蛋白的构树叶片蛋白质。
[0081]将所述实验组和所述对照组的蛋白样品进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，根据两处理组的分离效果判定步骤一获得的构树叶片蛋白中RuBisco蛋白的去除效果。具体如下:
[0082]1、第一向等电聚焦电泳
[0083]选用内径为3mm、高度为13.5mm的玻璃管，选择一平整端用封口膜封好，固定好玻璃管后，将凝胶溶液(溶剂为去离子水，溶质及浓度如下:8M尿素、体积百分含量为2%的NP-40、体积百分含量为2.5%的Pharmalyte pH3_10、体积百分含量为2.5%的PharmalytePH5-8，凝胶浓度为3.6%)用注射