一种二咖啡酰亚精胺衍生物糖苷及其用图_4

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for C37H56N3O16,798 · 3661),确定该化合物的分子式为C37H55N3O16; 13C和1H NMR见表3。
[0084] 式(XIV)化合物:绿色油状液体;[a]f -25. 5: (c0.50,Me0H) iimMeOiOA^aoge) 205(4.68),279(3.74)nm;IR(KBr)vmax3353,2928,2868,1648,1508,1283,1076,815cm _1; ESIMS(positive)m/z 798.7;ESIMS(negative)m/z 796.7;HRESIMS(positive)m/z 798 · 3632(calcd · for C37H56N3O16,798 · 3661),确定该化合物的分子式为C37H55N3O16; 13C和1H NMR见表3。
[0085] 表1式(II)-式(VI)化合物的13C NMR及1H NMR数据和归属
[0088]
[0089] a Measured in 01^0-(16(? NMR for 600MHz,13C NMR for 150MHz).
[0090] *Assignment may be interchanged.
[0091] 表2式(VII)-式(XI)化合物的13C NMR及1H NMR数据和归属
[0092]
[0094]
[0095] a Measured in DMS〇-d6(4 NMR for 600MHz,13C NMR for 150MHz).
[0096] b Measured in CD30D(4 NMR for 300MHz,13C NMR for 75MHz).
[0097] c Measured in DMS〇-d6( 4 NMR for 300MHz,13C NMR for 75MHz).
[0098] *Assignment may be interchanged.
[0099] 表3式(XII)-式(XIV)化合物的13C NMR及1H NMR数据和归属
[0100]
[0101]
[0102] a Measured in DMS〇-d6(4 NMR for 600MHz,13C NMR for 150MHz).
[0103] b Measured in DMS〇-d6(4 NMR for 600MHz,13C NMR for 100MHz).
[0104] *Assignment may be interchanged.
[0105]实施例2、二咖啡酰亚精胺衍生物糖苷抗氧化活性结果
[0106] 化合物的抗氧化活性是采用oxygen radical absorbance capacity(ORAC)实验 来评价的,具体实验流程如下。将〇.248g AAPH(2,2'_偶氮二异丁基脒二盐酸盐)加入到 50mL磷酸缓冲液体系中配置成18.3mM的AAPH储备溶液。依次将20mL磷酸缓冲液、20mL待检 测样品或标准物质Trolox溶液(浓度为6 · 25mM)和20mL焚光物质disodium f luorescein (FL,浓度为630nM)加入到96孔板板孔中。接下来,迅速将140mL AAPH(浓度为18.3mM)加入 到96孔板板孔中,并即刻将96孔板置于瑞士Tecan公司生产的GENios Luciferase-based微 孔板读数仪中,设定激发波长为485nm,发射波长为527nm,每2分钟测定其荧光强度,共记录 100min〇
[0107] 活性物质的抗氧化能力如下计算&S:RelativeORACvalue = (AUCsampie-AUCblank) / ( AUCtrolox-AUCbl - )。其中,AUCsampie指的是测试样品的荧光衰退曲线下积分面积, AUCtrolox指的是标准物质Trolox的荧光衰退曲线下积分面积,AUCblank指的是未加入测试样 品或标准物质Tro lox时的荧光衰退曲线下积分面积。
[0108] 具体结果如表4:
[0109] 表4二咖啡酰亚精胺衍生物糖苷抗氧化活性结果
[0110]
[0111]
[0112] EGCG(epigallocatechin gallate)代表阳性对照药治疗组。
[0113] 表4的实验结果显示了本发明的二咖啡酰亚精胺衍生物糖苷具有明显的抗氧化活 性。其中大部分化合物的抗氧化能力强于阳性对照药EGCG。因此,本发明的化合物可用作抗 氧化剂用于相应疾病的预防和治疗。
[0114] 实施例3、化合物提高老年痴呆果蝇学习记忆活性测试方法
[0115] (1)老年痴呆果蝇的培育
[0116] w1118(iS〇CJl)作为实验的对照组背景果蝇,简记为"2U"。成功转入致病性Αβ 42蛋白 的果蝇为(UAS-Ai342;简记为"Η29.3")。该品系果蝇通过与全脑表达Gal4启动子果蝇进行杂 交,获得携带elav-GAL4 Gl55(P35)与Αβ42的果蝇品系。
[0117] (2)老年痴呆果蝇的给药
[0118] 试验设置健康果蝇无药对照、疾病果蝇无药对照和疾病果蝇给药的三种组别。
[0119] 所有测试果绳的亲本均在恒温24°C,恒湿42%RH(Relative humidity)的绳房饲 养和繁殖。果蝇羽化后的第一天将对照组果蝇及疾病组果蝇和待喂药组果蝇通过二氧化碳 麻醉之后,挑选正确性状的果蝇在含有食物的玻璃管中。在给药阶段,所有测试果蝇在28°C 恒温和42%恒湿的保温箱内饲养,以保证果蝇吃药的效率。每日果蝇喂药4小时,从挑出果 蝇的第二天一直喂药到第8天。
[0120] 所喂药物在挑蝇第二天配制并与配制当天给果蝇喂药。100%DMS0溶解使其浓度 为10mM。在配制工作液时,利用含有4%的蔗糖将10mM母液稀释至100μΜ。另外,对照组果蝇 喂含有1%DMS0的糖水。对于每个行为指数(Performance Index),需要有2管果绳组,每管 中含有约100只果蝇。
[0121] 实验在恒温25°C、恒湿70%,避光的行为房中进行,方法可见参考文献[1_3]。
[0122] 1)在训练阶段,将100只左右的果蝇装入安置有铜网交叉电极的训练管,先后通入 辛醇(0CT)和甲基环己醇(MCH)两种气味各60s,中间间隔45s的新鲜空气。在通入第一种气 味(CS+)的同时给予果蝇60V的脉冲电击刺激(US,脉冲时长1.5s,间隔3.5s)。通入第二种气 味(CS-)时不给予电击。如此完成一个训练周期。
[0123] 2)在瞬时记忆(学习)能力测试中,完成一个训练周期的果蝇被立即转移到T-Maze 的选择点,同时从相对的两个方向通入CS+和CS-。经过2min的选择后两侧的果蝇被分别收 集,麻醉或处死后进行计数。行为指数(Performance index,PI)的计算公式如下:PI = [(CS-)-(CS+)]/[(CS-)+(CS+)]XIOOo
[0124] 分别使用0CT和MCH作为CS+进行训练和测试,得到的两个PI的平均值作为一次实 验的PI使用。PI = 〇表示测试中果蝇对于两种气味的选择为50: 50,即没有形成记忆;PI = 100表示测试中果蝇全部逃避伴随电击的气味,即完美记忆。进行活性测试时,同时进行不 喂药的同遗传背景健康蝇(2U*H29.3)、不喂药的老年痴呆疾病蝇(P35*H29.3)、喂测试药的 老年痴呆疾病蝇的嗅觉短期记忆缺陷测试,分别计算它们的总学习记忆行为指数(PI)。将 喂测试药的老年痴呆疾病蝇学习记忆行为指数与不喂药的同遗传背景健康蝇(2U*H29.3) 行为指数、不喂药的老年痴呆疾病蝇(P35*H29.3)行为指数相比较,评价测试药物抗老年痴 呆的作用。喂食测试物的老年痴呆疾病蝇学习记忆行为指数相对越高则说明测试物抗老年 痴呆作用越强。采用One-way analysis of variance(ANOVA)比较,喂食测试物的老年痴呆 疾病蝇学习记忆行为指数和不喂药(仅给不含药样品的溶剂)的老年痴呆疾病蝇学习记忆 行为指数,P〈〇. 05为有明显差别,P〈0.01为有显著差别,P〈0.001为有极显著差别。
[0125] 数据分析和图形展示通过GraphPad Prism 5.01进行处理;具体结果见表5:
[0126] 表5二咖啡酰亚精胺衍生物糖苷提高老年痴呆果蝇学习记忆活性结果
[0127]
[0128] 2U*H29.3代表健康果蝇;P35*H29.3代表疾病果蝇;美金刚代表阳性对照药治疗 组。药物治疗组给药浓度为1〇〇μΜ。与2U*H29.3组比较, #P〈0.001;与P35*H29.3组比较,*P〈 0.05 ,**P<0.01 ,***P<0.001 ;n = 6,One-way analysis of variance(AN0VA) 〇
[0129] 表5的实验结果表明本发明的所有化合物可提高老年痴呆果蝇的学习记忆功能, 大部分化合物效果优于阳性对照药物美金刚或与阳性对照药物相当。
[0130] 实施例4二咖啡酰亚精胺衍生物糖苷抗呼吸道合胞病毒(RSV)活性结果
[0131] (1)细胞毒性测定
[0132] 1 )HEp-2细胞接种于96孔细胞培养板中,100μL7孔,细胞密度为2.5 X 105/mL,置于 37°C,5%C02培养箱中培养,约20h长成细胞单层。
[0133] 2)弃去96孔板中的培养液,用维持液将待测样品倍半稀释成不同浓度,每个稀释 度设置3个复孔,100μL7孔,同时设置细胞对照孔,然后置于培养箱中继续培养。
[0134] 3)每天观察样品毒性引起的细胞病变,72h后,弃去培养液,参照ΜΤΤ法,每孔加入 30yL5mg/mL的MTT溶液,置于培养箱中避光继续孵育4h,使其形。
[0135] (2)细胞致病变法(Cytopathic effect assay,CPE)
[0136] 1 )HEp-2细胞接种于96孔细胞培养板中,100μL孔,细胞密度2.5 X 105/mL,置于37 °C,5 % C02培养箱中培养,约20h长成细胞单层。
[0137] 2)弃去细胞培养液,维持液倍半稀释待测样品,单体化合物起始浓度为50μΜ,每孔 加入50yL样品和50yL 100 X TCID50的病毒稀释液,设置阳性对照药利巴韦林组、病毒对照 组和细胞对照组。置于37 °C,5 % C02培养箱中培养。
[0138] 3)继续培养60~72h,待病毒对照组完全病变时,记录各组病毒病变情况。
[0139] 4)病毒致细胞病变效应的记录方法为:无细胞病变记为"一",0~25%细胞病变记 为"+",25 %~50 %细胞病变记为"++",50 %~75 %细胞病变记为"+++",75 %~100 %细胞 病变记为"++++"。病变程度为"++"对应的样品浓度即为该样品抗病毒的半数抑制浓度IC50。
[0140] 5)每个实验独立进行三次实验。
[0141] 具体结果如表6:
[0142] 表6二咖啡酰亚精胺衍生物糖苷抗呼吸道合胞病毒(RSV)活性结果
[0143]
[0144] 表6的实验结果显示了本发明的化合物I
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