H),2.90(t, J = 4.4Hz,4H) ,2.63(s,lH) ,2.46(d,J = 7.4Hz,2H),2.40(t,J = 7.3Hz,2H),1.89-1.86(m, 2H) ·HRMS(ESI)calcd· for C3〇H35N8〇3[M+H] + = 555 · 2827，found 555 · 2829〇
[0088] 按照实施例5相同方法，采用不同原料，制备以下化合物。
[0089] 实施例7:4-(4-(2-丙烯酰基-氨基-4-( (5-氯-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基）嘧啶基-2_基)氨基)苯基)哌嗪-1 -基)-N-羟基丁酰胺盐酸盐
[0090] 其结构式为：
[0092] Yellow solid;m.p. :114.3-114.91^? 匪R(500MHz，DMS0-d6)S9.19(s，lH), 8.92(s,lH) ,8.55(s,lH) ,8.12(d,J = 7.7Hz,lH) ,7.38(d,J = 7.6Hz,lH) ,7.30-7.22(m, 5H) ,7.15-7.12(m,2H) ,6.42(dd ,J= 16.9,1.3Hz, 1H) ,6.32(dd ,J= 16.1,1.3Hz , 1H), 5.81 (dd ,J=16.1,1.2Hz,lH),3.91(s,3H),3.74-3.67(m,4H),2.90(t ,J = 4.4Hz,4H),2.634(s, 1H),2.46(d,J=7.4Hz,2H),2.42(t,J=7.3Hz,2H),1.89-1.86(m,2H).HRMS(ESI) calcd.for C3〇H34ClN8〇3[M+H] + = 589.2437,found 589.2440.
[0093] 实施例8:化合物对A431、H1975、HeLa细胞增殖抑制活性测定 [0094] 本例用于测定本发明化合物对于EGFR野生型高表达细胞株A431、T790M点突变细 胞株H1975、人宫颈癌细胞株Hela的增殖抑制活性，化合物对细胞增殖的抑制活性用半数抑 制浓度IC 5Q来表示。试验方案如下：EGFR野生型高表达细胞株A43UT790M点突变细胞株 H1975细胞及人宫颈癌细胞株Hela均购于ATCC，以适宜的细胞浓度(A431:20000个细胞/ml 培养基;H1975:15000个细胞/ml培养基)将细胞接种于白色透明的96孔培养板上;之后将细 胞放置于37°C，5%C0 2的环境中进行培养，24小时后，向培养的细胞培养基中加入一系列浓 度梯度的药物，一般选择10个浓度，之后将细胞放回原培养环境中继续培养48小时，之后按 照CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay的方法，测定受试化合物对A431 及 Η1 9 7 5、H e L a细胞增殖的影响，并计算不同浓度的化合物对细胞增殖的抑制活性， CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay检测试剂购自Promega。之后对不同 浓度的化合物下A431、H1975、HeLa细胞增殖抑制活性进行四参数拟合，本发明受试化合物 的IC50数据见表1。
[0095]表 1
[0097] 实施例9:部分化合物对31620、仙、此?62、160细胞增殖抑制活性测定 [0098]本例用于测定本发明化合物10对于人肝癌细胞株HepG2、人结肠癌细胞株SW620、 人口腔表皮样癌细胞株KB、人早幼粒白血病细胞株HL60的增殖抑制活性，化合物对细胞增 殖的抑制活性用半数抑制浓度IC 5Q来表示。试验方案如实施例8。本发明部分受试化合物的 IC50数据如下表2。
[0099]表 2
[0101]结论:本发明化合物结构上具有新颖性，首次将SAHA的药效团片段异羟肟酸引入 到第三代EGFR抑制剂AZD9291的2-芳胺基嘧啶母核上，合成含异羟肟酸片段的2-芳胺嘧啶 类化合物。同时体外生物活性评价结果显示，本发明的化合物对过表达EGFR的人表皮癌细 胞株A431、对Gefitinib耐药的人肺腺癌细胞株H1975及人宫颈癌细胞株HeLa具有明显的抑 制增殖活性，部分化合物与阳性WZ4002和SAHA相当。为设计新型克服Gefitinib耐药EGFR/ HDAC双靶点抑制剂提供了设计思路。
【主权项】
1. 一种如式I所示的含异径目亏酸片段的2-芳胺基喀晚类衍生物，其结构通式为： 其中：化为氨原子或氯原子。 化为氨原子、氣原子或N，N-二甲基。2. -种如式n所示的含异径目亏酸片段的2-芳胺基喀晚类衍生物，其结构通式为：其中：Ri为氨原子或氯原子。3. 如权利要求1所述的含异径目亏酸片段的2-芳胺基喀晚类衍生物，其特征在于，所述的 式I化合物为如下任一化合物： Ni-2-氣-5-( (4-(1-甲基-IH-吗I噪-3-基)-喀晚-2-基)氨基)苯基)-N4-^基马来酷胺盐 酸盐(化合物1); Ni-5-((4-(l-甲基-IH-吗隙-3-基)-喀晚-2-基)氨基）苯基)-N4-径基马来酷胺盐酸盐 (化合物2); Ni-(2-(二甲氨基)-5-( (4-(1-甲基-IH-吗隙-3-基)-喀晚-2-基)氨基）苯基)-n4-^基 马来酷胺盐酸盐(化合物3); Ni-5-( (5-氯-4-(1-甲基-IH-吗隙-3-基)-喀晚-2-基)氨基)-2-(二甲氨基)苯基)-沪-径基马来酷胺盐酸盐(化合物4); n1-2-氣-5-( (5-氯-4-( 1-甲基-IH-吗I噪-3-基)-喀晚-2-基)氨基)苯基)-N4-^基马来 酷胺盐酸盐(化合物5)。4. 如权利要求2所述的含异径目亏酸片段的2-芳胺基喀晚类衍生物，其特征在于，所述的 式n化合物为如下任一化合物： 4-(4-(2-丙締酷基-氨基-4-( (4-(1-甲基-IH-吗I噪-3-基）喀晚基-2-基)氨基)苯基)赃 嗦-1-基)-N-径基下酷胺盐酸盐(化合物6); 4-(4-(2-丙締酷基-氨基-4-( (5-氯-4-(1-甲基-IH-吗I噪-3-基)喀晚基-2-基)氨基)苯 基)赃嗦-1-基)-N-径基下酷胺盐酸盐(化合物7)。5. 根据权利要求1或3所述的式I化合物的制备方法，其特征在于，通过W下步骤实现： W2,4-二氯喀晚A和1-甲基吗I噪为起始原料，在1,2-二氯乙烧、80°C条件下反应生成3-(2-氯喀晚-4-基)-1-甲基-I-H-吗I噪B，中间体B与4-氣-3-硝基苯胺在仲下醇，IN HCl催化条件 下反应得至lj2-(3-硝基苯基)-4-(N-甲基吗I噪)-2-氨基喀晚C，中间体C在还原条件下硝基还 原生成2-(3-氨基苯基)-4-(N-甲基吗I噪)-2-氨基喀晚D，中间体D与顺下締二酸酢在二氯甲 烧条件下生成4-氧代-2-下締酸E，中间体E与0-(四氨-2H-化喃-2-基巧圣基胺缩合生成化合 物F，最后F在酸性条件下脱掉保护基生成目标化合物I;试剂和反应条件:a)无水氯化侣，二 氯乙烧，80°C，2小时;b)仲下醇，回流，4小时;C)棚氨化钢，六水合氯化儀，二氯甲烧：甲醇= 4:1，(TC -室溫，30分钟;d)二氯甲烧，室溫，3-5小时;e) 1-( 3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚 胺盐酸盐，1-径基苯并S氮挫，二氯甲烧:N，N-二甲基甲酯胺=2:1，45°(：，5小时;門謹盐酸 乙酸溶液，30分钟;反应式为：其中取代基化和R2的定义同权利要求1。6. 根据权利要求2或4所述的式n化合物的制备方法，其特征在于，通过W下步骤实现： W2,4-二氯喀晚a和1-甲基吗I噪为起始原料，在1,2-二氯乙烧、80°C条件下反应生成3- (2-氯喀晚-4-基)-1-甲基-I-H-吗隙b，中间体b与4-氣-3-硝基苯胺在仲下醇，IN HCl催化 条件下反应得到2-(4-氣-3-硝基苯基)-4-(N-甲基吗I噪)-2-氨基喀晚C，中间体C与N-Boc赃 嗦在碱性条件下反应得到d，d在酸性条件下脱掉保护基得到中间体e，e与漠下酸乙醋在丙 酬回流条件下反应得到中间体f，f在还原条件下硝基还原生成中间体g，g与丙締酷氯反应 得到中间体h，h在碱性条件下水解生成i，i与0-(四氨-2H-化喃-2-基巧圣基胺缩合生成化合 物j，最后j在酸性条件下脱掉保护基生成目标化合物n ;试剂和反应条件：1)无水氯化侣， 二氯乙烧，80°C，2小时;2)仲下醇，回流，4小时;3)二甲基亚讽，碳酸钟，90°C，3小时;4)立氣 乙酸，二氯甲烧，30分钟；5)丙酬，碳酸钟，回流，5小时；6)棚氨化钢，六水合氯化儀，二氯甲 烧：甲醇= 4:1，0°C至室溫，30分钟;7)二氯甲烧，S乙胺，-5°C，30分钟;8)氨氧化侣，四氨巧 喃：水= 1:1，室溫，3小时；9)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，1-?基苯并S 氮挫，N，N-二甲基甲酯胺:二氯甲烧=1:2，45°C，5小时；10) IM盐酸乙酸溶液，(TC，30分钟至 1小时;反应式为：其中化的定义同权利要求2。7. 根据权利要求1-4任一所述的式I或式n化合物在制备抗肿瘤细胞和祀向EGFR/HDAC 药物中的应用，其特征在于，其中所述肿瘤细胞是指过表达EGFR的人表皮癌细胞株A431、对 Gefitin化耐药的人肺腺癌细胞株化975、与HDAC组蛋白乙酷化酶活性相关的肿瘤细胞。8. 根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述与HDAC组蛋白乙酷化酶活性相关的肿瘤 细胞为人宫颈癌细胞株化La、人口腔表皮样癌细胞株KB、人早幼粒急性白血病细胞株化60、 人肝癌细胞株化pG2或人结肠癌细胞株SW620。
【专利摘要】本发明提供两种如式Ⅰ、Ⅱ所示的含异羟肟酸片段的2-芳胺基嘧啶类衍生物，主要是以含羧基片段的2-芳胺基嘧啶为母核，通过与THP保护的羟胺一步缩合及相关的修饰得到目标化合物。实验证明，该系列化合物在细胞水平对与EGFR酪氨酸激酶活性相关的肿瘤细胞(过表达EGFR的人表皮癌细胞株A431、对Gefitinib耐药的人肺腺癌细胞株H1975)和对与HDAC组蛋白乙酰化酶活性相关的肿瘤细胞(人宫颈癌细胞株Hela、人肝癌细胞株HepG2、人早幼粒急性白血病细胞株HL60、人口腔表皮样癌细胞株KB、人结肠癌细胞株SW620)具有增殖抑制作用，可制备相应抗肿瘤细胞药物。结构通式如下：
【IPC分类】A61P35/02, A61P35/00, C07D403/04
【公开号】CN105646454
【申请号】
【发明人】俞永平, 罗婧, 陈文腾, 刘星雨, 舒可
【申请人】浙江大学
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年1月19日