嘧啶类衍生物 在制备抗肿瘤药物中的应用，所述肿瘤细胞是指过表达EGFR的人表皮癌细胞株A431、对 Gefitinib耐药的人肺腺癌细胞株H1975、对与组蛋白乙酰化酶(HDAC)活性相关的肿瘤细胞 (人宫颈癌细胞株He la、人口腔表皮样癌细胞株KB、人早幼粒急性白血病细胞株HL60、人肝 癌细胞株HepG2、人结肠癌细胞株SW620)。其药效学实施例实验数据显示，其在细胞水平对 与EGFR、HDAC活性相关的肿瘤细胞具有显著的增殖抑制作用，可制备相应的抗肿瘤药物。
[0033] 本发明提供了一类全新的2-芳胺嘧啶类衍生物，其中的异羟肟酸片段可作为HDAC 的锌离子螯合基团。其药效学实施例实验数据显示，在细胞水平对与EGFR相关的肿瘤细胞 (过表达EGFR的人表皮癌细胞株A431、对Gefitinib耐药的人肺腺癌细胞株H1975)和对与组 蛋白乙酰化酶(HDAC)活性相关的肿瘤细胞(人宫颈癌细胞株Hela、人口腔表皮样癌细胞株 KB、人早幼粒急性白血病细胞株HL60、人肝癌细胞株HepG2、人结肠癌细胞株SW620)具有显 著的增殖抑制作用。特别是对耐药细胞株H1975有较好的抑制效果，可以为设计新型克服 Gef i t in ib耐药的EGFR/HDAC双靶点抑制剂提供可能。
【具体实施方式】
[0034] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实 施例范围之中，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商 品说明书选择。
[0035] 实施例1 #-2-氟-5-( (4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-嘧啶-2-基)氨基)苯基)-N4-羟 基马来酰胺盐酸盐(化合物1)
[0037] 试剂和反应条件：1)二氯甲烷，室温，3-5小时；2)1-(3-二甲氨基丙基)-3_乙基碳 二亚胺盐酸盐，1-羟基苯并三氮唑，二氯甲烷:N，N-二甲基甲酰胺=2:1，45°C，5小时；3) 1M 盐酸乙醚溶液，30分钟。
[0038] 步骤1:(Z)-4-((2-氟-5-((4-(N-甲基-3-B引噪基)-2_嘧啶)氨基)苯基)氨基)-4_ 氧代-2-丁烯酸的制备原料1:2-(4-氟-3-氨基苯基)-4-(N-甲基吲哚）-2-氨基嘧啶按照 J .Med. Chem. 2014,57,8249-8267 的方法制备。
[0039] 将2-(4-氟-3-氨基苯基)-4-(N-甲基吲哚)-2-氨基嘧啶（lmmol)与顺丁烯二酸酐 (1.2_〇1)溶解于15mL二氯乙烷中，反应3-5小时。反应结束后，减压旋干。以丙酮重结晶可 得棕色固体。
[0040] Yellow solid；m.p.:236.1-236.7°C ；^NMRCSOOMHz,DMS〇-d6)δ1〇.28(s,1H), 9.60(s,lH),8.56-8.40(m,3H),8.33(s,lH),7.263-7.52(m,4H)7.29-7.20(m,4H),6.59(d, J=12.2Hz,lH),6.38(d ,J=12.2Hz,lH),6.26(s,3H),3.88(s,3H),2.09(s,2H).HRMS(ESI) calcd.for C23Hi9FN5〇3[M+H] + = 432.1466,found 432.1468。
[0041 ] 步骤2:N1-2-氟-5-((4-(N-甲基-3-B引噪基)-2-嘧啶基）氨基）苯基)-N 4-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧代)马来酸二胺的制备
[0042] 将Z)-4_((2-氟-5-((4_(N-甲基-3-B引噪基)-2-嘧啶）氨基）苯基)氨基)-4-氧代-2_丁稀酸（lmmol)、〇-(四氛-2H-吡喃_2_基)轻胺（1 · 2mmol)溶解到溶解于12mL二氣乙烧和 4mL N，N-二甲基甲酰胺混合溶液中，向反应液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚 胺盐酸盐（1.32mmol)，1-羟基苯并三氮唑（1.32mmol)，置于40°C搅拌反应4小时。反应结束 后，向反应液中加 30mL水，用20mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，有机相旋干，经柱层析纯 化(流动相为乙酸乙酯:石油醚= 10:1)得黄色的固体。
[0043] Yellow solid；m.p.:181.3-181.6°C ；ΧΗ NMR(500MHz,DMS〇-d6)5l1.65(s , 1Η), 10.99(s,lH) ,9.51(d ,J=10.8Hz,lH),8.68-8.48(m,2H),8.43(s,lH) ,8.33(d ,J = 5.3Hz , 1H) ,7.65-7.51(m，3H) ,7.29-7.18(m，4H)，6.48(d，J= 12.6Hz，1H) ,6.27((1, J= 12.6Hz, lH),5.77(s,2H),4.91(s,lH),3.88(s,5H),1.65(s,3H),1.50(s,3H).HRMS(ESI)calcd.for C28H28FN 6〇4[M+H] + = 513 · 2245，found 513 · 2245。
[0044] 步骤3: Ni-2-氟-5- ((4- (1 -甲基-1H-吲哚-3-基)-嘧啶-2-基)氨基)苯基)-N4-羟基 马来酰胺盐酸盐的制备
[0045] 将^-2-氟-5-((4- (N-甲基-3-吲哚基)-2-嘧啶基)氨基)苯基)-N4-((四氢-2H-吡 喃-2-基)氧代）马来酸二胺（lmmol)加入到25mL三口烧瓶中，并加入8mL的二氯乙烷。冰浴条 件下滴入1M盐酸的乙醚(3.4mL)溶液，低温反应1小时。反应完成后有固体析出，减压抽滤， 得到黄色固体。
[0046] Yellow solid；m.p.:181.3-181.6°C ；ΧΗ NMR(500MHz,DMS〇-d6)5l1.65(s , 1Η), 10.99(s,lH) ,9.51(d ,J=10.8Hz,lH),8.68-8.48(m,2H),8.43(s,lH) ,8.33(d ,J = 5.3Hz , 1H) ,7.65-7.51(m，2H) ,7.29-7.18(m，4H)，6.48(d，J= 12.6Hz，1H) ,6.27((1, J= 12.6Hz, lH),5.77(s,2H),4.91(s,lH),3.88(s,5H),1.65(s,3H),1.50(s,3H).HRMS(ESI)calcd.for C28H2 8FN6〇4[M+H]+ = 531 · 2151，found 531 · 2158。
[0047] 按照实施例1相同方法，采用不同原料，制备以下化合物。
[0048] 实施例2 #-5-((4-( 1-甲基-1H-吲哚-3-基)-嘧啶-2-基)氨基)苯基)-N4-羟基马 来酰胺盐酸盐 [0049]其结构式为：
[0051] Yellow solid；m.p.:181.0-181.4°C ； ^NMRCSOOMHz,DMS〇-d6)δ?1.73(s , 1H), 10.98(s,lH) ,10.36(s,lH) ,8.85(s, 1H), 8.30(d ,J = 6.6Hz , 2H) ,8.07(s , 1H), 7.61 (d ,J = 8.3Hz,lH),7.51(d,J=8.0Hz,1H),7.48-7.45(m,2H),7.39-7.23(m,3H),7.17(t,J= 7.4Hz,lH),6.38(d ,J = 12.1Hz, 1H), 6.24(d,J = 12.1Hz, 1H), 3.93(s,3H)〇
[0052] 13⑶MR(125MHz，DMS0-d6)Sl69·1，167·0，158·1，157·6，157·3，156·4，137·1， 136.6,135.3,135.2,131.9,130.0,126.5,123.3,122.7,121.2,116.0,115.8,115.4， 110 · 2，109 · 6，33 · 2 ·HRMS(ESI)calcd· for C23H2iN6〇3[M+H] + = 429 · 1670，found 429 · 1670〇
[0053] 实施例3 二甲氨基)-5-( (4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-嘧啶-2-基)氨基） 苯基)-N4-羟基马来酰胺盐酸盐 [0054]其结构式为：
[0056] Yellow solid；m.p.:217.9-218.3°C ；ΧΗ NMR(500MHz,DMS〇-d6)5l〇.31(s ,3Η), 7.65(d,J = 7.8Hz,lH) ,7.47-7.39(m,6H) ,7.24-7.18(m,3H) ,6.99(s,lH) ,6.78(d,J = 12.1Hz,lH),6.28(d,J=12.1Hz,1H),3.81(s,3H),3.80(s,lH),2.08-2.01(m,6H),1.91(s, 1H) ·HRMS(ESI)calcd· for C25H26N7〇3[M+H] + = 472 · 2092，found 472 · 2095。
[0057] 实施例4 #-5-( (5-氯-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-嘧啶-2-基)氨基)-2-(二甲氨 基)苯基)-N4-羟基马来酰胺盐酸盐
[0058] 其结构式为：
[0060] Yellow solid；m.p.:180.4-180.7°C ；ΧΗ NMR(500MHz,DMS〇-d6)5l〇.30(s,3Η), 7.47-7.40(m,6H),7.24-7.19(m,3H),6.99(s,lH),6.78(d,J=12.0Hz,1H),6.28(d,J= 12.0Hz,lH),3.81(s,3H),3.80(s,lH),2.08-2.01(m,6H),1.91(s,lH).HRMS(ESI) calcd.for C25H25ClN7〇3[M+H] + = 506.1702,found 506.1709。
[0061] 实施例5 n1-〗-氟-5-( (5-氯-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基）-嘧啶-2-基）氨基）苯 基)-N4-羟基马来酰胺盐酸盐
[0062] 其结构式为：
[0064] Yellow solid；m.p.:128.2-128.5°C ；ΧΗ NMR(500MHz,DMS〇-d6)5l2.55(s,1Η), 10.98(s,lH),10.37(s,lH),8.85(s,lH),8.27(t,J=17.1Hz,2H),7.61-7.59(m,lH),7.47-7.42(m,2H) ,7.39-7.27(m,