±1)°C，湿度63%，噪音〈55分贝，自由摄食、饮水，光照与黑暗时间为每12h交替。
[0057] 3、造模方法腹腔注射氯氨酮（5yg/100g)麻醉条件下，打开B、C、D组大鼠腹腔去除 双侧卵巢，逐层缝合;A组大鼠仅予以单纯剖腹后立即关闭。造模期间的首3天，肌注青霉素4 万U/只，预防感染。
[0058] 4、饲养与给药造模后大鼠分笼予以常规饲料喂养，第4天起开始给药。A组为正常 对照组，每天以蒸馏水lOml/kg灌胃；B、C、D组为模型组，B组每天以实施例4制备的益骨口服 液I Oml /kg灌胃，C组每天以实施例7制备的益骨口服液I Oml /kg灌胃，D组每天以实施例8制 备的化合物(I)水溶液lOml/kg灌胃。整个灌胃过程持续12周。
[0059] 5、观察指标采用美国LUNAR公司DPX-L型双能X线骨密度仪测定大鼠脊柱与左股骨 上干骺端骨密度以万能电子材料试验机作整骨三点弯曲试验。最大载荷20kg，两端跨距 20mm，加载速度5mm/min，检测过程由计算机自动描记股骨的载荷一变形曲线。
[0060] 6、数据处理采用SPSS15.0统计软件包进行统计。各组数据采用x±s表示，各组数 据间比较用t检验，计数资料采用X 2检验。以P〈0.05为显著性差异，P〈0.01为非常显著性差 异。
[0061] 二、结果
[0062] 1、对去势大鼠脊柱与股骨上端骨密度变化的影响
[0063] 正常对照组A组的骨密度明显高于模型组C、D组，有非常显著性差异(P〈0.01)。模 型组B组比正常对照组A组的骨密度略低，但是差异不明显，无统计学意义。结果见表1。该实 验结果表明，本发明提供的益骨口服液比现有技术中的益骨口服液更能增加去势大鼠脊柱 与股骨上端骨密度。
[0064]表1对去势大鼠脊柱与股骨上端骨密度变化的影响(X 土 s，n = 10)
[0066] 备注:**表示与正常对照组A组相比具有非常显著性差异(Ρ〈0.01); Λ表示与B组 相比具有非常显著性差异(ρ〈0.01)。
[0067] 2、对去势大鼠左股骨生物力学变化的影响
[0068] 正常对照组A组的弹性载荷和最大载荷均明显高于模型组C、D组，有非常显著性差 异(P〈0.01)。模型组B组比正常对照组A组的弹性载荷、最大载荷略低，但是差异不明显，无 统计学意义。结果见表2。该实验结果表明，本发明提供的益骨口服液比现有技术中的益骨 口服液更能增加去势大鼠左股骨的弹性载荷和最大载荷，提高生物力学性能。
[0069]表2对去势大鼠左股骨生物力学变化的影响(X土s，n = 10)
[0071 ] 备注:**表示与正常对照组A组相比具有非常显著性差异(P〈0.01); Λ表示与B组 相比具有非常显著性差异(Ρ〈〇. 01)。
[0072]综合上述实验结果，本发明提供的益骨口服液比现有技术中的益骨口服液具有更 加优异的治疗效果，更能增加去势大鼠的骨密度和骨生物力学性能。从实验结果可看出，本 发明提供的益骨口服液的治疗作用是现有技术中的益骨口服液和黄酮化合物（I)协同作用 的结果。
[0073]上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种益骨口服液，其特征在于:药用成分包括处方比例的生药和益骨化合物单体，口 服液总重量为所述生药重量的4~6倍，化合物单体的浓度为80~12化g/mL所述处方比例 的生药包括淫羊蕾、骨碎补、生地、巧等、仙灵脾和红花，它们的重量比为10~14:10~14:10 ~14:20~30:10~14:20~30;所述益骨化合物单体为一种黄酬化合物（I )，化学结构式如 下，2. 根据权利要求1所述的益骨口服液，其特征在于：口服液总重量为生药重量的5倍，化 合物单体的浓度为10化g/mL所述处方比例的生药包括淫羊蕾、骨碎补、生地、巧等、仙灵脾 和红花，它们的重量比为12:12:12:25:12:25。3. 根据权利要求1所述的益骨口服液，其特征在于:所述黄酬化合物（I)的制备方法包 括如下步骤： a、 将干燥的生药补骨脂粉碎，用80~90%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇 味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃 取物和正下醇萃取物； b、 步骤a中正下醇提取物用大孔树脂除杂，先用5~15%乙醇洗脱6~10个柱体积，再用 70~80 %乙醇洗脱8~12个柱体积，收集70~80 %洗脱液，减压浓缩得70~80 %乙醇洗脱浓 缩物； C、步骤b中乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为65:1、30:1、15:1和8:1的 二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到4个组分； d、 步骤C中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为15:1、8:1和5:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分； e、 步骤d中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70~80%的 甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的黄酬化合物 (Do4. 根据权利要求3所述的益骨日服液，其特征在于：步骤a中，用85%乙醇热回流提取， 合并提取液。5. 根据权利要求3所述的益骨口服液，其特征在于:步骤b中，正下醇提取物用AB-8型大 孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用75%乙醇洗脱10个柱体积，收集75%洗脱 液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱浓缩物。6. 根据权利要求3所述的益骨口服液，其特征在于：步骤e中，组分2用十八烷基硅烷键 合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗 脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的黄酬化合物(I)。7. -种益骨的化合物单体，其特征在于:所述益骨的化合物单体为黄酬化合物，化学结 构式如（I)所示：8. -种权利要求7所述益骨的化合物单体的制备方法，其特征在于:包括如下步骤： a将干燥的生药补骨脂粉碎，用80~90%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味， 依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物 和正下醇萃取物； b步骤a中正下醇提取物用大孔树脂除杂，先用5~15%乙醇洗脱6~10个柱体积，再用 70~80 %乙醇洗脱8~12个柱体积，收集70~80 %洗脱液，减压浓缩得70~80 %乙醇洗脱浓 缩物;C步骤b中乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为65:1、30:1、15:1和8:1的 二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到4个组分； d步骤C中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为15:1、8:1和5:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分； e步骤d中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70~80 %的 甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的黄酬化合物 (Do9. 权利要求1或2所述的益骨口服液在制备防治骨质疏松症的药物中的应用。10. 权利要求7所述益骨的化合物单体在制备防治骨质疏松症的药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了益骨口服液、益骨的化合物单体以及口服液的医药应用，属于药物技术领域。改进后的益骨口服液中的药用成分包括处方比例的生药和化合物单体，口服液总体积为所述生药重量的4～6倍，化合物单体的浓度为80～120μg/mL；所述处方比例的生药包括淫羊藿、骨碎补、生地、茯苓、仙灵脾和红花，重量比为10～14：10～14：10～14：20～30：10～14：20～30；所述化合物单体为一种结构新颖的黄酮化合物。改进后的益骨口服液显著提高了现有的益骨口服液的疗效，是对现有益骨口服液配方的一次重大升级。
【IPC分类】A61K36/804, C07D311/74, A61K9/08, A61K31/352, A61P19/10
【公开号】CN105641188
【申请号】
【发明人】姚新苗, 楼炜, 何帮剑, 李桂锦, 谢跃鹏
【申请人】浙江中医药大学附属第三医院
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年1月8日