用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗 脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I) (420mg)。
[0036] 结构确证:HR-ESIMS显示[Μ+Na]+为m/z 377.1408,结合核磁特征可得分子式为 C21H22O5，不饱和度为 11。核磁共振氢谱数据δΗ(ΡΡπι，DMS〇-d6，400MHz): H-2 (5 · 42，dd，J = 12.7,3.0)，H-3(2.81，m)，H-3(2.95，dt，J = 24.8，12.4)，H-6(6.60，s)，H-2'，6'（7.33，m)， H-3'-5'（7.28，m)，H-7"（5.92，d，J=12.5)，H-8"（5.81，d，J = 12.5)，9"-Me(l.ll，s)，9"-Me (I · 12，s)，9"-OMe(3·81，s);核磁共振碳谱数据δ。(ppm，DMS〇-d6，IOOMHz):79·9(CH，2-C)， 44.2(CH2,3-C)，191.3(C，4-C)，115.3(C，4a-C)，162.9(C，5-C)，105.1(CH，6-C)，162.1(C， 7-C)，115.2(C，8-C)，158.7(C，8a-C)，138.5(C，l'-C)，126.5(CH，2'，6'-C)，128.8(CH，3'， 5'-C)，126.9(CH，4'-C)，116.6(CH，7"-C)，142.0(CH，8"-C)，71.2(C，9"-C)，29.2(CH 3,9"-Me)，30.0 (CH3，9" -Me)，56.0 (CH3，9" -OMe);碳原子标记参见图I。1H NMR谱显示了典型的黄 酮类化合物信号，5!15.42((1(1，了=12.7,3.0泡，!1-2)，2.81(111，!1-3)和2.95((1^ = 24.8， 12·4Ηζ，Η-3)</Η 谱也显示了两个双峰信号5.92(d，J=12.5Hz，H-7"#PSH5.81(d，J = 12.5抱，!1-8"），它们为烯烃质子。13〇匪1?光谱显示21个碳信号，包含三个甲基0〇29.2,9"-Me，30.0,9"-Me和56.0,9"-0Me)，一个亚甲基（SC44.2,3-C)，九个次甲基（SC79.9,2-C; 105.1，6-C;126.5,2'，6'-C;128.8,3'，5'-C;126.9,4'-C;116.6,7"-C;142.0,8"-C)，八个 季碳（SC191.3,4-C;115.3,4a-C ;162.9,5-C;162.1，7-C;115.2,8-C;158.7,8a-C;138.5， 1'-(：;71.2,9"-〇。(：-50(：162.9)和(：-70(：162.1)低场的化学位移表明两者各连有一个羟 基。NOESY谱中H-8"与甲氧基质子(δΗ3.81，s)的相关性，以及H-8"和H-7"的相关性，表明Ον (SC71.2) 位连有一个甲氧基。综合氢谱、碳谱、 HMBC 谱和 NOESY 谱，以及文献关于相关类型 核磁数据，可基本确定该化合物如图1所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实 验值基本一致(图2)。
[0037]实施例2:化合物(I)分离制备及结构确证
[0038] (a)将干燥的生药补骨脂(8kg)粉碎，用85%乙醇热回流提取(25LX 3次），合并提 取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3L X 3次）、乙酸乙酯(3L X 3次)和水饱和的正丁醇 (3LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物(378g);(b)步骤 (a)中正丁醇萃取物用AB-8大孔树脂除杂，先用5%乙醇洗脱10个柱体积，再用70%乙醇洗 脱12柱体积，收集70 %洗脱液，减压浓缩得70 %乙醇洗脱浓缩物（132g);(c)步骤(b)中70 % 乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为65:1 (10个柱体积）、30:1 (10个柱体积）、 15:1(8个柱体积)和8:1(10个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c) 中组分4(27g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为12:1(8个柱体积）、8:1(10个柱体 积)和5:1(8个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2(15g) 用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收 集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)(415mg)。
[0039] 结构确证:同实施例1。
[0040] 实施例3:化合物(I)分离制备及结构确证
[0041 ] (a)将干燥的生药补骨脂(8kg)粉碎，用85%乙醇热回流提取(25LX 3次），合并提 取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3L X 3次）、乙酸乙酯(3L X 3次)和水饱和的正丁醇 (3LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物(372g);(b)步骤 (a)中正丁醇萃取物用AB-8大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱6个柱体积，再用80%乙醇洗 脱8个柱体积，收集80%洗脱液，减压浓缩得80%乙醇洗脱浓缩物（123g); (c)步骤（b)中 80%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为65:1 (10个柱体积）、30:1 (10个柱体 积）、15:1(8个柱体积)和8:1(10个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步 骤(c)中组分4(27g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为12:1(8个柱体积）、8:1(10个 柱体积)和5:1(8个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2 (15g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为80 %的甲醇水溶液等度洗 脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I) (413mg)。
[0042] 结构确证:同实施例1。
[0043]实施例4:益骨口服液的制备
[0044] 按处方比例取生药淫羊藿36g、骨碎补36g、生地36g、茯苓75g、仙灵脾36g和红花 75g共6味，计294g。将生药粉碎，用水提取3次，每次用水体积为3L，每次提取2小时。合并3次 水提液，加热浓缩至1470ml。再加入化合物（I) 147mg搅拌溶解。
[0045]实施例5:益骨口服液的制备
[0046] 按处方比例取生药淫羊藿30g、骨碎补30g、生地30g、茯苓60g、仙灵脾30g和红花 60g共6味，计240g。将生药粉碎，用水提取3次，每次用水体积为2.5L，每次提取2小时。合并3 次水提液，加热浓缩至960ml。再加入化合物（I) 76.8mg搅拌溶解。
[0047]实施例6:益骨口服液的制备
[0048] 按处方比例取生药淫羊藿42g、骨碎补42g、生地42g、茯苓90g、仙灵脾42g和红花 90g共6味，计348g。将生药粉碎，用水提取3次，每次用水体积为3.5L，每次提取2小时。合并3 次水提液，加热浓缩至2088ml。再加入化合物（I) 250.6mg搅拌溶解。
[0049] 实施例7:实施例4的对比实施例，不含有化合物(I)
[0050] 按处方比例取生药淫羊藿36g、骨碎补36g、生地36g、茯苓75g、仙灵脾36g和红花 75g共6味，计294g。将生药粉碎，用水提取3次，每次用水体积为3L，每次提取2小时。合并3次 水提液，加热浓缩至1470ml。
[0051 ]实施例8:实施例4的对比实施例，仅含有化合物(I)
[0052]精密称取化合物(I)，用蒸馏水溶解，制成浓度为100yg/mL的水溶液。
[0053]实施例9:益骨口服液对去势大鼠骨密度与骨生物力学的影响 [0054] 一、材料与方法
[0055] 1、实验药物益骨口服液水提液:①按实施例4和7制备。②氯氨酮:上海第一生化药 业有限公司生产。③化合物(I)的水溶液按实施例8制备。
[0056] 2、实验动物取12周龄的雌性wistar大鼠40只，体重约200g左右（由浙江中医药大 学实验动物中心提供），分成A、B、C、D 4组，每组10只。饲养室保持良好通风，室温控制在(21