5的上游引物序列如SEQIDNOl所示； 所述扩增DXS6795的下游引物序列如SEQIDN02所示； 所述扩增DXS6803的上游引物序列如SEQIDN03所示； 所述扩增DXS6803的下游引物序列如SEQIDN04所示； 所述扩增DXS6807的上游引物序列如SEQIDN05所示； 所述扩增DXS6807的下游引物序列如SEQIDN06所示； 所述扩增DXS9907的上游引物序列如SEQIDN07所示； 所述扩增DXS9907的下游引物序列如SEQIDN08所示； 所述扩增DXS7423的上游引物序列如SEQIDN09所示； 所述扩增DXS7423的下游引物序列如SEQIDNOlO所示； 所述扩增GATA172D05的上游引物序列如SEQIDN013所示； 所述扩增GATA172D05的下游引物序列如SEQIDN014所示； 所述扩增DXSlOl的上游引物序列如SEQIDN015所示； 所述扩增DXSlOl的下游引物序列如SEQIDN016所示； 所述扩增DXS9902的上游引物序列如SEQIDN017所示； 所述扩增DXS9902的下游引物序列如SEQIDN018所示； 所述扩增DXS7133的上游引物序列如SEQIDN019所示； 所述扩增DXS7133的下游引物序列如SEQIDN020所示； 所述扩增DXS6810的上游引物序列如SEQIDN021所示； 所述扩增DXS6810的下游引物序列如SEQIDN022所示； 所述扩增GATA31E08的上游引物序列如SEQIDN023所示； 所述扩增GATA31E08的下游引物序列如SEQIDN024所示； 所述扩增DXS6800的上游引物序列如SEQIDN025所示； 所述扩增DXS6800的下游引物序列如SEQIDN026所示； 所述扩增DXS981的上游引物序列如SEQIDN027所示； 所述扩增DXS981的下游引物序列如SEQIDN028所示； 所述扩增DXS10162的上游引物序列如SEQIDN029所示； 所述扩增DXS10162的下游引物序列如SEQIDN030所示； 所述扩增DXS6809的上游引物序列如SEQIDN031所示； 所述扩增DXS6809的下游引物序列如SEQIDN032所示； 所述扩增GATA165B12的上游引物序列如SEQIDN033所示； 所述扩增GATA165B12的下游引物序列如SEQIDN034所示； 所述扩增DXS10079的上游引物序列如SEQIDN035所示； 所述扩增DXS10079的下游引物序列如SEQIDN036所示； 所述扩增DXS10135的上游引物序列如SEQIDN037所示； 所述扩增DXS10135的下游引物序列如SEQIDN038所示； 所述扩增HPRTB的上游引物序列如SEQIDN039所示； 所述扩增HPRTB的下游引物序列如SEQIDN040所示。2. 根据权利要求1所述的人类X染色体短串联重复序列复合扩增体系，其特征在于，还 包括一对能扩增Amelogenin位点的引物，分别为： 扩增Amelogenin的上游引物序列如SEQIDNOll所示； 扩增Amelogenin的下游引物序列如SEQIDN012所示。3. 根据权利要求2所述的人类X染色体短串联重复序列复合扩增体系，其引物浓度 比例是：DXS6795SEQIDN01-2,0.179ymol/L、DXS6803SEQIDN03-4,0.126ymol/L、 DXS6807SEQIDN05-6,0.245ymol/L、DXS9907SEQIDN07-8,0.150ymol/L、DXS7423 SEQIDN09-10,0.162ymol/L、AmelogeninSEQIDN011-12，0.060ymol/L、GATA172D05 SEQIDN013-14,0.192ymol/L、DXSlOlSEQIDN015-16,0.190ymol/L、DXS9902SEQ IDN017-18,0.169ymol/L、DXS7133SEQIDN019-20,0.404ymol/L、DXS6810SEQ IDN021-22,0.412ymol/L、GATA31E08SEQIDN023-24,0. 188ymol/L、DXS6800SEQ IDN025-26,0. 278ymol/L^DXS981SEQIDN027-28,0. 130ymol/L^DXS10162SEQID N029-30,0. 250ymol/L^DXS6809SEQIDN031-32, 0. 420ymol/L^GATA165B12SEQID N033-34,0. 255ymol/L^DXS10079SEQIDN035-36,0. 276ymol/L^DXS10135SEQID N037-38,0.315ymol/L、HPRTBSEQIDN039-40,0.404ymol/L〇4. 根据权利要求I所述的人类X染色体短串联重复序列复合扩增体系，其特征在 于，人类X染色体STR的分组为：DXS6795、DXS6803、DXS6807、DXS9907、DXS7423 为第一 组；Amelogenin、GATA172D05、DXS101、DXS9902、DXS7133、DXS6810 为第二组；GATA31E08、 DXS6800、DXS981、DXS10162、DXS6809 为第三组；GATA165B12、DXS10079、DXS10135、HPRTB* 第四组。5. 根据权利要求1或4所述的人类X染色体短串联重复序列复合扩增体系，其特征在 于每一对特异性引物对中的一条引物的5'端带有荧光素标记，所述的荧光素标记方式为： DXS6795、DXS6803、DXS6807、DXS9907、DXS7423 采用FAM标记；Amelogenin、GATA172D05、 DXS101、DXS9902、DXS7133、DXS6810 采用HEX标记；GATA31E08、DXS6800、DXS981、DXS10162、 DXS6809 采用TAMRA标记；GATA165B12、DXS10079、DXS10135、HPRTB采用ROX标记。6. 根据权利要求1所述的人类X染色体短串联重复序列复合扩增体系，其特征在于： 扩增体系包括引物混合物、酶反应缓冲液、基因组DNA，所述的酶反应缓冲液包括热启动 DNA聚合酶、Brij58、dNTP、DMS0、Betaine、Tris-HCl、BSA、DIT，酶反应缓冲液在-20°C的保 存环境中不结冰。7. 根据权利要求6所述的人类X染色体短串联重复序列复合扩增体系，其特征在于所 述的酶反应缓冲液的配方为：KC1 0?IM;MgC12 0? 0015mMJris-HCl0? 05M;BSA0? 16mg/ ml;dNTP0.2mM;Brij58 0.001M;DTT0.02M;Betaine0.1mol/L;DMS0 0.40%，百分比为 DMSO原液占酶反应缓冲液的体积百分数；热启动DNA聚合酶0. 25U。8. 根据权利要求1所述的人类X染色体短串联重复序列复合扩增体系，其特征在于： 所述的复合扩增体系的扩增程序是：第一步变性：96°C，2分钟；热循环：94°C30秒；60°C， 70秒，共进行27-30个循环；终延伸60 °C，30分钟；保温：15 °C。
【专利摘要】本发明涉及生物技术领域，涉及人类X染色体20个短串联重复序列复合扩增体系及应用，该复合扩增体系包括20对引物，可同时扩增19个STR位点：DXS6795、DXS6803、DXS6807、DXS9907、DXS7423、GATA172D05、DXS101、DXS9902、DXS7133、DXS6810、GATA31E08、DXS6800、DXS981、DXS10162、DXS6809、GATA165B12、DXS10079、DXS10135、HPRTB以及一个性别识别位点Amelogenin。本发明采用五色荧光标记，扩增产物大小在85-450bp之间，操作简单，个体识别力高。本发明所提供的复合扩增体系提供的位点与目前通用的X-STR试剂盒具有很高的兼容性并且新增加了一些多态信息比较高的位点，可以有效的应用于X染色体相关的亲权鉴定、个体识别以及X染色体伴性遗传疾病的辅助检测。
【IPC分类】C12Q1/68
【公开号】CN105177125
【申请号】
【发明人】陈初光, 于在亮, 徐梅波
【申请人】苏州阅微基因技术有限公司
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年8月21日