, 3mmol)与两口烧瓶中， 脱气5次，注入甲苯（22. 5mL)和Na0H(50wt%，22. 5mL)于85°C搅拌lOmin。加入1-溴己 烷（3. 86g，21mmol)搅拌过夜，停止反应，冷却至室温，加入CH2Cl2(30mL)萃取，饱和食盐水 洗涤，合并有机相，旋蒸，残余物加入丙酮中重结晶，得到淡黄色晶体（3. 03g，40% )
[0038] 1HnmrGOOMHZ, CDCl3) : δ (ppm) 7. 53 (d，2H) 7. 48-7. 46 (m，4H) 1. 95-1. 91 (m，4H) I. 1 6-1. 07 (m，12H) 0· 82 (t，6H) 0· 81-0. 79 (m，4H)。
[0039] (2)硼酸酯的合成
[0040] 取 2,7-二溴-9,9-二己基芴（3. 18g，5. 82mmol)、4-甲酯基苯硼酸 (2. 73g，15. 09mmol)、Pd(PPh3)4OX 2g)于两口 烧瓶中，脱气 5 次，注入 THF(36mL)、 K2C03(2M，18mL)在80°C条件下，回流18h。停止反应，冷却至室温，加 CH2Cl2(30mL)萃取，饱 和食盐水（IOOmLX3)洗涤，合并有机相，旋蒸，残余物加入IOOmL乙醇中重结晶，得黄色粉 末晶体（2.7g，70% )
[0041] 1HNMR (400MHZ，CDCl3) : δ (ppm) 8. 15 (d，4H) 7. 82 (m，6H) 7. 64 (m，4H) 3. 98 (s，6H) 2. 1 O (t, 4H) I. 12-1. 08 (m, 12H) 0. 75-0. 79 (m, 10H)
[0042] (3)硼酸酯的水解
[0043] 取硼酸酯（1.4g，2.33mmol)，K0H(1.6g，28mmol)于两口烧瓶中，脱气7次，注入 THF(20mL)、H20(10mL)，于80°C条件下回流16h。停止反应，冷却至室温，加入HCl酸化至溶 液的PH为2左右，固体先溶解后有沉淀析出，过滤，滤饼用IOOmL水洗和200mL乙醇洗，40°C 真空干燥，得白色粉末固体（5. 35g，80% )。
[0044] 1HNMR (400MHZ，CDCl3) : δ (ppm) 12. 99 (brs，2H) 8. 06 (d，4H) 7. 98 (m，8H) 7. 74 (d，2H) 2. ll(m, 4H) 1.20-0. 56 (m, 22H)
[0045] (4)活性酯的制备
[0046] 取活化后的羧酸（800mg, I. 39mmol)和NHS(760mg, 6. 25mmol)于三口烧瓶中，脱气 7次，注入DMF (16mL)，DCC (180mg，0. 87mmol)溶于7mL DMF中，逐滴加入反应液中，室温搅 拌48h，停止反应，加乙醚（IOmL)萃取，水洗（30mLX 3)，室温旋蒸除乙醚，所得固体溶于乙 酸乙酯中，硅胶板提纯，展开剂为石油醚/乙酸乙酯（1:1)，得白色粉末固体（221mg，17%)。
[0047] 1HNMR (400MHZ, CDCl3) : δ (ppm) 8. 24 (d, 4H) 7. 84 (d, 6H) 7. 64 (d, 4H) 2. 95 (s, 8H) 2. I 1-2. 07 (t, 4H) I. 13-1. 08 (m, 12H) 0. 78-0. 75 (m, 10H)
[0048] (5)复合探针的制备
[0049] 取2, 7-双（4-苯甲酸）-9,9-二己基芴活性酯（0.6 μ mol)溶于二甲基甲酰胺DMF 中，振荡lOmin，待活性酯充分溶解后加入DNA水溶液样品（2. 4 μ mol)，振荡反应24h。停 止反应，反应液经高效液相色谱纯化和冷冻干燥后得功能复合探针纯样品。图1中给出了 R为C6的烷基链的复合探针的质谱图。
[0050] 其它烷基链的复合探针均使用上述方法制备。
[0051] 本发明的另一个方面提供一种使用上述复合探针检测端粒酶活性的方法，所述方 法包括：将所述的复合探针与待测样品接触，并在下述条件下孵育，所述条件足以使在待测 样品中端粒酶的催化下，复合探针上的DNA片段扩增，扩增产物中的疏水材料CF在均相水 溶液中以分散状态存在，释放荧光；对得到的混合物应用检测手段，以读出荧光强度；其中 与不含有待检测细胞的对照或已知数据集相比的荧光强度提供了待测样品中端粒酶的活 性水平。
[0052] 其中，在待测样品中端粒酶的催化下，复合探针上的DNA片段以（TTAGGG)重复片 段扩增。本发明的复合探针为CF-c-Ts，其核酸序列组成如下：
[0053] CF-c-Ts:CF-AATCCGTCGAGCAGAGTT
[0054] 扩增后：CF-AATCCGTCGAGCAGAGTT (TTAGGG) η
[0055] 其中，本发明的寡核苷酸序列购于大连宝生物公司。
[0056] 其中，还包括dNTPs和端粒酶扩增缓冲溶液。
[0057] 其中，本发明的扩增法优选为一步扩增法：将复合探针CF-c-Ts，dNTPs，RRI (-种 端粒酶抑制剂），待测样品等加入到EP离心管中孵育，即可在普通的荧光仪上进行检测，通 过所得荧光强度和检测标准曲线的对应即可得知检测样品中的端粒酶的含量。其中，复合 探针CF-c-Ts与dNTPs的比、例为InM: 1-3 μ M，复合探针的含量优选为50-100nM，更优选为 87nM ;dNTPs的含量更优选200 μ M。本发明的缓冲溶液RRI优选为：10mM Tris-HClUOmM MgCl2, PH = 7. 9。
[0058] 本发明荧光仪的设置参数优选如下：激发和发射狭峰宽度均为5nm，电压PMT 600v，激发波长为340nm，发射波长扫描范围350-560nm。根据荧光强度和样品浓度做标准 曲线，通过对比检测标准曲线和检测样品的荧光强度可得到样品的浓度。
[0059] 图2给出了本发明检测端粒酶技术的详细原理。从图2可知，在没有端粒酶存在 时，复合探针CF-c-Ts的荧光强度很弱，而当体系中有端粒酶存在时，复合探针CF-c-Ts以 重复片段扩增，亲水材料DNA在扩增产物中所占的比例增加，扩增产物中的疏水材料CF以 分散状态存在，其荧光释放。
[0060] 本发明的检测方法的检测下限为28cell/ μ L。
[0061 ] 本发明的检测方法尤其适用于膀胱癌患者的尿液检测。
[0062] 本发明的另一个方面提供了一种上述的方法检测端粒酶活性的试剂盒。所述试 剂盒优选包括本发明提供的复合探针、足量或过量的dNTPs、RRI以及端粒酶扩增缓冲溶 液；所述试剂盒还可包括EP管。所述端粒酶扩增缓冲溶液，优选为：10mM Tris-HClUOmM MgCl2, PH = 7. 9。
[0063] 本发明将端粒酶与共辄芴分子结合，利用在端粒酶存在的情况下复合探针会以 重复片段扩增、且亲水物质在扩增产物中所占的比例增加会使得疏水材料CF以分散状 态存在释放荧光的原理，设计了一种用于检测端粒酶活性的亲疏水性可调控的复合探针 CF-c-Ts，使用该探针检测端粒酶活性扩大了方法的使用范围，操作简单，灵敏度高，需要的 样品量很少。
[0064] 以下为具体实施例
[0065] 实施例1 :以膀胱癌细胞（EJ)提取的端粒酶为待测物，来进一步说明本发明。
[0066] 实施例所用到的膀胱癌EJ细胞为实验室细胞房培养细胞，膀胱癌症患者的尿液 由华中科技大学同济医学院附属协和医院提供。
[0067] 采用血细胞计数板，对EJ细胞进行计数。
[0068] 本实例所用的酶和缓冲液有：1XCHAPS购于罗氏公司；18个碱基的引物，DEPC水， dNTPs，RNase抑制剂等均购于大连宝生物。
[0069] 荧光检测所用仪器为荧光分光光度计（Cary F-4500,日本）。荧光光谱测量条 件：激发和发射狭峰宽度均为5nm，电压PMT 600v，激发波长为340nm，发射波长扫描范围 350-560nm ;用50 μ L石英比色皿进行测量。
[0070] 具体检测方法是：
[0071] 步骤一，复合探针的制备：参考【具体实施方式】中R为C6的制备方法，本实施例中复 合探针中R为C6。
[0072] 步骤二，EJ细胞端粒酶的提取。取生长状态非常好的细胞，首先去掉细胞培养瓶 中的培养基，并用PBS洗涤两次，然后用胰蛋白酶消化细胞3min，使贴壁的细胞从培养瓶 的脱落下来，再加入ImL的细胞培养基，用移液管吹打培养瓶底部5min，使贴壁的细胞全 部脱落下来。然后通过细胞计数，取一定量的细胞至I. 5mL的DEPC处理过的离心管中， 1000 rpm离心3min，并用PBS洗涤两次，小心弃掉上层清液，然后加入200 μ L细胞裂解液 (0· 5 % CHAPS, IOmM Tris-HCl, pH = 7. 5mM, ImM MgCl2, ImMEGTA, 5πιΜβ