br>[0024] a)自溶设备是立式酶解反应罐,向酶解罐夹层内通入蒸汽的方式进行快速升温, 升温后改为注入低压蒸汽进行保温自溶反应;
[0025] b)所述自溶设备使用框式、桨叶式或推进式的桨叶进行搅拌并保持罐内温度一 致;
[0026] c)自溶的温度要求为:加热后的物料温度保持在65%~95°C ;
[0027] d)自溶的时间要求为:加热段将物料升温至目标温度的时间应小于30分钟,保温 段的自溶时间应在30分钟~360分钟;
[0028] (4).干燥:自溶后的物料通过输送栗输送至干燥设备进行干燥,所述干燥设备可 为喷雾干燥设备,所述干燥后的物料的含水率为10~20% ;
[0029] (5).灭菌:经干燥后的物料通过气流提升设备输送至隧道式微波干燥灭菌设备 进行灭菌,所述微波灭菌后物料含水率为5%~10% ;
[0030] (6).粉碎包装:灭菌后的物料经粉碎后包装成成品。
[0031] 通过上述方法采用蛋白含量为33% -60%的菌体蛋白制得的好氧型单细胞蛋白; 蛋白含量33. 0%-60. 0% ;单位蛋白的游离核苷酸含量不低于1. 40% ;单位蛋白的游离碱 基含量不高于0.90% ;,游离碱基与游离核苷酸比值范围应在0-0. 60。
[0032] 本发明同现有技术相比,工艺及其制成的产品具有以下优点:
[0033] 1)体现了单细胞蛋白具有内源酶这一情况,充分利用了现有技术中的菌体蛋白中 具有的核酸酶、蛋白酶、溶菌酶;
[0034] 2)使用了自溶工艺,自溶过程中自溶酶充分分解大分子营养物及细胞壁,通过自 溶可以产生较高含量的游离氨基酸、游离核苷酸,同时使得细胞壁多糖被分解,使细胞产生 通透性从而确保活性物质可以流出细胞外,从而可以被动物直接吸收利用;
[0035] 3)使用的自溶设备的升温快、温度易于控制、物料在设备内的停留时间可控,可以 确保菌体蛋白在最适的参数条件下进行自溶;
[0036] 4)使用自溶工艺的产品的消化率进一步提高,干物质表观消化率可从57. 7%提 高到76. 9%,蛋白表观消化率可从66. 4%提高至89. 1% ;
[0037] 5)制成的产品不仅蛋白质量高、且具有多种活性成分、具有多种生理功能的功能 性蛋白饲料原料,生理功能包括:诱食和提高采食量、口感、气味的改善,免疫功能,保肝护 肝,抗应激,防止腹泻,高质量、高效化率的蛋白;在动物生长试验中比未自溶的菌体蛋白具 有更好的表现性能。
[0038] 6)使用新的生产工艺进一步降低了生产的能耗,原因是:a)自溶对干燥前的物料 进行了预加热,提高了干燥前的温度;b)自溶后的菌体蛋白的细胞壁通透性增强,水分及 胞内物质更易流出胞外,干燥难度进一步降低。
[【附图说明】]
[0039] 图1是本发明的步骤示意图;
[0040] 图2是本发明中实施例1中游离核苷酸标准品的色谱图;
[0041] 图3是本发明中实施例1中游离碱基标准品的色谱图;
[0042] 图4是本发明中实施例2中的60 °C自溶碱基及核苷酸的计量测定图;
[0043] 指定图1作为本发明的摘要附图。
[【具体实施方式】]
[0044] 下面结合附图对本发明作进一步说明,这种方法的原理和采用的设备对本专业的 人来说是非常清楚的。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于 限定本发明。
[0045] 实施例1 :游离核苷酸及游离碱基检测方法的建立
[0046] 使用游离核苷酸和游离碱基作为自溶工艺参数调整和产品自溶前后对比的主要 指标。
[0047] 游离核苷酸是指5种核苷酸及5种核苷的总和,包括胞苷酸、尿苷酸、鸟苷酸、肌苷 酸、腺苷酸、胞苷、尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷。游离碱基是指5种核酸碱基的总和,具体包括胞 嘧啶、尿嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、腺嘌呤。
[0048] 单细胞蛋白产品含有丰富的核苷酸,市场上酵母类的产品是饲料工业主要的核苷 酸提供者。由于工艺特点的原因,自溶酵母、酶解酵母、水解酵母等产品含有较多游离态的 核酸水解物,研究发现现有很多酵母产品既含有游离核苷酸,也含有较高含量的碱基。游离 核苷酸能被动物快速吸收,发挥重要生理功能,碱基则会对动物肝脏肾脏造成不良影响。碱 基含量过多意味着生产过程当中有重要营养价值的核苷酸被酶解、水解或微生物代谢。这 会造成酵母产品的质量下降,提供的核苷酸含量降低,进而能为动物提供免疫功能的作用 减少,同时增加的碱基如腺嘌呤则会对动物造成毒性。
[0049] 判断单细胞蛋白的生产工艺对核苷酸的破坏程度,使用既能反应工艺条件的优劣 又能为产品质量控制提供科学的、反映营养价值的评估方法就变得极为重要。
[0050] 游离核苷酸代表了自溶的程度,数值越高说明代表内源酶分解核酸为核苷酸的程 度越高。游离碱基是细菌代谢的产物,含量越高说明腐败微生物生长越多,作为查看自溶后 产品腐败程度的指标。
[0051] 原理:酵母、菌体蛋白等原料经过自溶或者酶解会含有游离的核苷酸与碱基,经水 溶液提取后的试样进入高效液相色谱分析,经C18柱,紫外检测器、缓冲盐作流动相,可使 用外标法对5种核苷酸、5种核苷和5种碱基作定量测定。
[0052] 试剂和溶液:
[0053] 除非另有说明,本法所用试剂均为分析纯,水为去离子水,符合GB/T 6682二级水 的规定。
[0054] 磷酸二氢钾:分析纯。
[0055] 氢氧化钾:分析纯。
[0056] 甲醇:色谱纯。
[0057] 乙腈:色谱纯。
[0058] 20% w/v氢氧化钾溶液:称取氢氧化钾100克,溶解于500ml水中,保存于容量瓶 内。
[0059] 流动相A :0.1 M磷酸二氢钾溶液,称取磷酸二氢钾27. 2克,溶解于1000 ml水中,添 加20%氢氧化钾溶液I. 0ml,加水定容至2升。0. 45um水系滤膜过滤后备用。
[0060] 流动相B :25%甲醇溶液,量取甲醇250ml溶解于750ml水中,搅拌混匀后0. 45um 有机系滤膜过滤后备用。
[0061] 腺苷酸 AMP :sigma#A2252。
[0062] 胞苷酸 CMP :sigma#C1131。
[0063] 肌苷酸頂P :sigma#I2897。
[0064] 鸟苷酸二钠 GMP :sigma#G8377。
[0065] 尿苷酸 UMP :sigma#U1752。
[0066] 腺昔 Adenosine :sigma#A9251 〇
[0067] 胞苷 Cytidine :sigma#C122106〇
[0068] 鸟苷 Guanosine :sigma#V900311 〇
[0069] 肌昔 Inosine :sigma#I4125〇
[0070] 尿苷 Uridine :sigma#V900421。
[0071] 制备核苷酸混合标准液:依次使用尿苷酸、腺苷酸、鸟苷酸二钠、胞苷酸、肌苷 酸、鸟苷、腺苷、尿苷、肌苷、胞苷配制混合标准液,各核苷酸浓度依次为20. 000ug/ml、 20. 000ug/mK20. 000ug/mK20. 000ug/mK20.0 Oug/mKIO. OOOug/mKIO. OOOug/mK 10. 000ug/ml、10. 000ug/ml、10.0 OOug/ml 分装至 0· 5ml 冻存管内,-20°C保存,有效期一年。
[0072] 胞啼啶 Cytosine :sigma#V9〇0462〇
[0073] 尿啼啶 Uracil :sigma#V900439〇
[0074] 鸟噪呤 Guanine :sigma#V900473〇
[0075] 胸腺啼啶 Thymine :sigma#V900437。
[0076] 腺噪呤 Aden