正常对照及模型组灌胃给予0.5% CMCNA(0. 2mL/10g)，其他各组给与相应的药物，每天灌胃给药一次，连续30d后，于第30天 上午给药后lh开始训练。除正常对照组外，在训练前20min采用2mg/kg氢溴酸东莨菪碱 分别复制小鼠记忆获得障碍模型，各组平行给药，跳台法测定小鼠学习成绩。
[0130] 小鼠跳台试验训练方法及观察指标如下：
[0131] 小鼠跳台实验装置为一方形盒子底部为（lOcmXlOcm)电栅栏（电压36V)，高 30cm，内有高3. 2cm，直径4. 2cm的平台，实验主要分为以下几个阶段：
[0132] (1)适应期：把动物放在平台上，此时电栅栏不通电，记录跳下平台的潜伏期，动 物跳下平台后在测试箱内自由探索l〇s后放回笼中。
[0133] ⑵训练：训练时先将跳台仪与可调变压器相连，电压控制在36V。于训练时将 第一批的5-6只小鼠分别放入跳台仪的相应的格子内的平台上，当动物跳下平台后即给予 36V的电刺激，持续2-3s，然后将其放回笼中。
[0134] (3)测试：学习实验24h后，将动物放回平台上，同时开动秒表，记录小鼠第一次跳 下时间（即潜伏期）及小鼠5min内跳下次数（即错误次数），以潜伏期及错误次数作为该 实验的考察指标，潜伏期延长或（和）错误次数减少表明动物学习记忆能力增强。试验中 如果5分钟小鼠仍未跳下橡胶圆台，则潜伏期计为300s。
[0135] 24h后测验小鼠学习成绩。以跳台仪测试记录小鼠第一次跳下时间（即潜伏期） 及小鼠5min内跳下次数（即错误次数），以潜伏期及错误次数作为该实验的考察指标。
[0136] 5、统计学分析所有实验数据均以表示，采用方差分析，先进行方差齐性检验， 计算F值，F值<Fa(]5，结论：各组均数间差异无显著性；F值彡匕。5,P彡0. 05,用多个实验 组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的 变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到 正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。
[0137] 6、结果判定
[0138] 根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版），根据以下标准判定受试样品 改善记忆的功效。<br>[0139] 对记忆获得的保护作用研究实验结果具有统计学意义；
[0140] 对记忆获得的保护作用研究实验，结果显示与正常对照组相比，给予5mg/kg氢溴 酸东莨菪碱后模型组小鼠跳台的潜伏期明显缩短（p〈〇.01)，错误次数明显增加（p〈〇.01)。 各产品组的学习成绩均优于模型组，其中高剂量组的潜伏期明显延长（P〈〇. 05)。阳性对照 药哈伯因则错误次数明显减少（P〈〇. 05)，潜伏期明显延长（p〈0. 05)。提示，本产品对氢溴 酸东莨菪碱所致小鼠记忆获得障碍有明显的改善作用，见表8。
[0141] 表8对氢溴酸东莨菪碱所致的小鼠记忆获得障碍的影响（^士s )
[0142]
[0143] 注：与正常对照相比，Ap〈0. 01，AAp〈0. 01 ;与模型组相比，*p〈0. 05，#p〈0. 01。
[0144] 在本实施例中，采用记忆缺失的动物模型，不但有助于评定药物的作用，且可初步 分析药物的作用机制。东莨菪碱是M胆碱受体拮抗剂，可阻断大脑皮质、隔区及海马结构 中的M胆碱受体引起胆碱能系统功能障碍，从而产生学习记忆能力减退。本实验也证明了 东莨菪碱可明显降低大鼠的学习记忆能力。给予5mg/kg氢溴酸东莨菪碱后模型组小鼠跳 台的潜伏期明显缩短（P〈〇. 01)，错误次数明显增加（P〈〇. 01);而给予一定剂量本产品样品 对氢溴酸东莨菪碱所致小鼠记忆获得障碍有明显的改善作用。
[0145] 根据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版），本动物实验研究结论为受试 样品具有改善记忆的功效。
[0146] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种具有改善记忆力功能的组合物，其特征在于，由龙眼肉、茯苳、莲子、核桃酶解 提取物、磷酯酰丝氨酸和牛磺酸制成，所述核桃酶解提取物为核桃柏经碱性内切蛋白酶 Alcalase2. 4L和复合蛋白酶Protamex水解后的水解产物。2. 根据权利要求1所述组合物，其特征在于，由龙眼肉、茯苓和莲子经水煎提取，与核 桃酶解提取物、磷酯酰丝氨酸和牛磺酸混合而成。3. 根据权利要求1所述组合物，其特征在于，各原料重量份数为： 龙眼肉200~800份、莲子200~800份、茯苓200~800份、核桃酶解提取物10~ 150份、磷脂酰丝氨酸10~150份、牛磺酸3~50份。4. 根据权利要求1所述组合物，其特征在于，所述核桃酶解提取物由以下方法制备获 得： 步骤1、核桃柏加水研磨获得核桃柏浆液，加碱调整pH值为8. 0-9. 0,离心，上清液酶法 除杂，加酸沉淀，沉淀清洗后获得核桃蛋白； 步骤2、核桃蛋白用碱性内切蛋白酶Alcalase2. 4L和复合蛋白酶Protamex水解至水 解度为8-12%，灭酶，离心后收集上清液为核桃蛋白酶解液； 步骤3、核桃蛋白酶解液通过滤布和超滤膜分离富集核桃酶解提取物。5. 根据权利要求4所述组合物，其特征在于，步骤1所述上清液酶法除杂为上清液加入 占核桃柏总重1 %的a-淀粉酶和占核桃柏总重0. 5 %纤维素酶进行酶法除杂。6. 根据权利要求4所述组合物，其特征在于，步骤2为： 核桃蛋白加水搅拌，以2000-3000U/g蛋白计量加入碱性内切蛋白酶Alcalase2. 4L、 以1200-2500U/g蛋白计量加入复合蛋白酶Protamex，于50-55°C下水解至水解度8-12 %， 灭酶，离心后收集上清液为核桃蛋白酶解液。7. 根据权利要求4所述组合物，其特征在于，步骤3为： 将核桃蛋白酶解液过100目滤布，然后通过膜通量1000 ODa的超滤膜，收集透过 液，再通过膜通量1000 Da的超滤膜，收集截留液，得到核桃多肽溶液，真空浓缩至固形物 30-40 %，进行喷雾干燥，获得核桃酶解提取物。8. 权利要求1-7任意一项所述组合物在制备改善记忆力保健食品中的应用。9. 根据权利要求8所述应用，其特征在于，所述保健食品为片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒 剂、泡腾剂、饮料、合剂或□服液。10. 权利要求1所述组合物的制备方法，其特征在于，取龙眼肉、茯苓和莲子经水煎提 取，提取液浓缩喷雾干燥后，加入牛磺酸、磷脂酰丝氨酸和核桃酶解提取物混合均匀，获得 所述组合物。
【专利摘要】本发明涉及保健食品技术领域，公开了一种具有改善记忆力功能的组合物及其制备方法和应用。本发明所述组合物由龙眼肉、茯苓、莲子、核桃酶解提取物、磷酯酰丝氨酸和牛磺酸制成。本发明以龙眼肉为君药，辅以臣药茯苓、莲子，三药配伍协同发挥养心安神，补肾健脾之功效，再佐以具有改善脑代谢提高记忆力的核桃酶解提取物、提高细胞膜流动性增强可塑性的功能因子磷脂酰丝氨酸和改善记忆力的牛磺酸，共同达到改善记忆力的目的，各种原料均为药食同源和新资源食品，安全无毒副作用可长期作为保健食品食用。
【IPC分类】A61P25/28, A61K31/685, A61K31/185, A23L1/30, A61K36/77
【公开号】CN105168507
【申请号】
【发明人】赵宏伟, 郭晓蕾, 马忠华
【申请人】无限极（中国）有限公司
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年9月10日...