血清、肾脏、肝脏组织中S0D和GSH-PX 的活性显著降低（P〈〇. 01)，MDA含量显著增加（p〈0. 01)，表明环磷酰胺致小鼠免疫可抑制 小鼠体内抗氧化酶活降低，增加MDA含量。
[0078] 如表5所述，与模型组小鼠细胞，各剂量给药组小鼠各组织中S0D和GSH-PX酶活 均显著增强，MDA含量显著降低（p〈0. 01)，揭示SUM404可能通过提高免疫低下模型小鼠 机体的抗氧化酶活性，清除自由基含量，恢复机体内氧化-抗氧化内稳态，从而有利于提高 机体的免疫力。综上所述，SUM404可能通过提高小鼠体内抗氧化酶系统的活性，清除免疫 低下机体内过量的自由基和脂质过氧化物，从而降低过氧化物对免疫器官等免疫系统的损 害，增强小鼠自身抵抗力，这可能是粒毛盘菌黑色素正向调节小鼠免疫力的途径之一。
[0079] 表5. SUM404对小鼠SOD、GSH-PX酶活和MDA含量的影响
[0080]
[0082] 注：#P〈0.05,与正常组相比；##P〈0.01，与正常组相比；*P〈0.05,与模型对照组相 比TP〈0.01，与模型对照组相比.
[0083] 以上结果表明SUM404具有正向免疫调节作用，其可能是因为该真菌黑色素 结构中含有抗原决定簇（antigenic determinants)，产生免疫原性，诱导抗体反应（Ab response);或通过激活旁路补体途径拮抗环磷酰胺的毒力从而保护机体；或通过恢复小 鼠机体的抗氧化酶活性，清除自由基含量，增强机体拮抗环磷酰胺所致免疫低下反应，增强 小鼠自身免疫功能。
[0084] 实施例2
[0085] 粒毛盘菌水溶性黑色素制剂的加工
[0086] 1、片剂加工
[0087] 将200-400g的粒毛盘菌黑色素与药用辅料稀释剂200-250g、助流剂20-60g混匀 后，与250-500mL乙醇混合均匀制得软材，软材过筛得到湿颗粒，干燥后整粒，最后加入润 滑剂5-10g混匀后压片，制成1000片片剂。所述药用辅料稀释剂选用糊精或干淀粉；所述 助流剂采用滑石粉或微粉硅胶或微晶纤维素；所述润滑剂采用硬脂酸镁或硬脂酸锌。
[0088] 本实施例推荐的片剂加工的优选例为：取过80-100目筛的上述粒毛盘菌黑色素 500g、稀释剂糊精250g、助流剂滑石粉60g，混合均匀后加500mL乙醇混合均匀制得软材，软 材过筛得到湿颗粒，干燥后整粒，最后加入润滑剂硬脂酸镁15g混匀后压片，制成1000片， 片重0. 8g，黑色素含量0. 3g/片。
[0089] 2、胶囊剂加工
[0090] 将药用辅料稀释剂200-300g、助流剂50-70g、润湿剂2-6g混匀后与300-600g的 上述粒毛盘菌黑色素混合均匀，装1#空心胶囊，制得胶囊剂1000粒。所述药用辅料稀释 剂选用糊精或干淀粉；所述助流剂采用滑石粉或微粉硅胶或微晶纤维素；所述润湿剂采用 十二烷基硫酸钠或者磺基丁二酸二辛酯。
[0091] 本实施例推荐的胶囊剂加工优选例为：取稀释剂干淀粉250g，助流剂滑石粉50g， 润湿剂十二烷基硫酸钠5g混合均匀与500g上述粒毛盘菌黑色素混合均匀后装1#空心胶 囊1000粒，粒重为0. 805g，黑色素含量0. 5g/粒。
[0092] 本发明使用粒毛盘菌YM404水溶性黑色素及其作为免疫调节药物的应用，所制备 的药物无毒副作用，且制备方法简单经济。
[0093] 实施例3:
[0094] 先按如下条件和方式制备获得粒毛盘菌胞内黑色素：将粒毛盘菌YM404接种于 100L发酵罐，培养基配方为：酪氨酸浓度为1. 2mmol/L，铜离子浓度为1. 2mmol/L，蔗糖质量 为30g/L，酵母膏5. Og/L，蛋白胨5. 0g/L，pH 8. 0,装料系数体积比为0. 7,接种量为7% (体 积比），培养温度为25°C，通气量为1. 2L/min，搅拌转速为180r/min，发酵时间为15d ;将发 酵液抽滤，收集菌丝体，60°C烘干，按菌丝体的质量（g)与浓度为1. 5mol/L的氢氧化钠（mL) 比为1:150混匀，30°C水浴浸提12h，抽滤得浸提液；用lmol/L HC1调节上述浸提液pH值 为2,静置20h，得到黑色素悬浮液；然后将上述黑色素悬浮液离心，弃上清，所得到的沉淀 经去离子水洗涤至pH值为7后真空冷冻干燥即得黑色素粗品；黑色素粗品经7mol/L HC1 于100°C酸解3h，以除去与黑色素结合的蛋白质及碳水化合物。酸解后，沉淀经双蒸水洗涤 至上清液pH值为7时重新溶于lmol/L NH3 ? H20溶液，旋转蒸发仪蒸去NH3至溶液pH为中 性后，依次经乙酸乙酯、氯仿、无水乙醇萃取，以除去脂类物质，萃取后除去有机相，水相调 pH值为2,5000r/min离心15min，沉淀经去离子水反复洗涤至上清液C]/定性检测为阴性 后，真空冷冻干燥即得粒毛盘菌YM404胞内黑色素。
[0095] 将90mL吡啶加入附有冷凝管、温度计的250mL三颈瓶中，用电磁加热搅拌器搅拌， 同时缓慢加入三氧化硫-吡啶2-3. 0g。加热至90°C，再加入通过上述方法得到的UM404粉 末0. 5g，恒温搅拌lh，冷却至室温。反应液用3mol ? L-1的NaOH溶液调至中性，静置24h。 自来水和蒸馏水分别透析2d，过滤，冷冻干燥，得硫酸酯化黑色素SUM404。
[0096] 然后将上述水溶性粒毛盘菌黑色素用质量百分浓度为0. 9%的生理盐水分别配制 成50mg/mL、200mg/mL的水溶液，给药体积为0? 2mL/只。
[0097] 将上述各剂量的水溶性粒毛盘菌黑色素进行小鼠免疫调节作用药理实验，所采用 的方式步骤和其他条件均与实施例1中相同，也都得到了与实施例1中类似的结果。
[0098] 上述实施例的实验说明，粒毛盘菌YM404胞内黑色素经三氧化硫-吡啶修饰后得 到的水溶性粒毛盘菌黑色素SUM404具有显著的免疫调节功能，且无毒副作用，其制备方 法简单经济，故可将该水溶性粒毛盘菌黑色素，按药剂学的常规制备方法，将有效量的水溶 性粒毛盘菌黑色素与适量的药用辅料混合加工制备成口服片剂或胶囊剂型的免疫调节药 物。
[0099] 可以知道，上述实施例仅为了说明发明原理而采用的示例性实施方式，然而本发 明不仅限于此，本领域技术人员在不脱离本发明实质情况下，可以做出各种改进和变更，这 些改进和变更也属于本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种水溶性粒毛盘菌黑色素SUM404,其特征在于：该黑色素是粒毛盘菌YM404胞内 黑色素，经三氧化硫-吡啶修饰后得到的水溶性粒毛盘菌黑色素，具有提高免疫功能的作 用。2. -种如权利要求1所述的水溶性粒毛盘菌黑色素SUM404在提高免疫功能方面的应 用。3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于：水溶性粒毛盘菌黑色素SUM404提高免 疫通过促进胸腺器官发育实现。4. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于：水溶性粒毛盘菌黑色素SUM404提高免 疫通过提高巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数实现。5. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于：水溶性粒毛盘菌黑色素SUM404提高免 疫通过增强B细胞介导的体液免疫实现。6. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于：水溶性粒毛盘菌黑色素SUM404提高免 疫通过促进T细胞介导的免疫应答反应实现。7. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于：水溶性粒毛盘菌黑色素SUM404提高免 疫通过提高体内抗氧化酶系统的活性，清除免疫低下机体内过量的自由基和脂质过氧化物 实现。8. -种药物，其特征在于：包括水溶性粒毛盘菌黑色素SUM404。9. 权利要求8所述的药物在提高免疫功能方面的应用。10. 权利要求9所述的应用，其特征在于：该药物中水溶性粒毛盘菌黑色素SUM404质 量占药物总质量的35%以上。
【专利摘要】粒毛盘菌水溶性黑色素SLIM404在提高免疫方面的应用，本发明属于医药免疫领域，提供一种水溶性粒毛盘菌黑色素SLIM404，具体涉及该黑色素在提高免疫和制备提高免疫药物方面的应用。该黑色素是粒毛盘菌YM404胞内黑色素，经三氧化硫-吡啶修饰后得到的水溶性粒毛盘菌黑色素；该黑色素具有提高免疫功能的作用，通过促进胸腺器官发育、提高巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数、增强B细胞介导的体液免疫、促进T细胞介导的免疫应答反应、提高体内抗氧化酶系统的活性，清除免疫低下机体内过量的自由基和脂质过氧化物等方面提高免疫的。以该黑色素制成的药物，有多种用药途径，安全无毒，易于制得，适合大规模推广应用。
【IPC分类】A61K36/06, A61P37/04
【公开号】CN105168264
【申请号】
【发明人】叶明 , 宋升 , 李兰, 徐灿, 李盛兰, 杨柳
【申请人】合肥工业大学
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年7月15日