和组培效果。
【具体实施方式】
[0019] 现结合如下实例对本发明作进一步的解释说明。
[0020] 实施例1:一种花榈木组培消毒灭菌配方，包括70%酒精、0. 1%升汞、70%酒精和向 增值培养基中添加〇. 5ml/L植物组织培养抗菌剂。
[0021] 实施例2:-种花榈木组培消毒灭菌配方，包括70%酒精，50mg/L利福平和50mg/L氯霉素混合液以及0. 1%的升汞。
[0022] 实施例3 : -种花榈木组培消毒灭菌配方，包括70%酒精，50mg/L利福平和50mg/L 氯霉素混合液以及0. 1%升汞。
[0023] 实施例4:一种花榈木组培方法，该方法包括以下步骤： (1) 外植体的采集：采用苗龄10天的花榈木籽苗茎段外植体； (2) 清洗：采用洗涤剂浸泡15分钟，用流水冲洗30分钟； (3) 消毒：将步骤（2)中洗净的外植体拿入无菌工作台内，采用实施例1 一种花榈木组 培消毒灭菌配方进行消毒，依次采用70%酒精、0. 1%升汞和70%酒精浸泡，其浸泡时间分别 为0. 5分钟、8分钟和0. 5分钟，每次消毒处理后均用无菌水冲洗4-5次； (4) 接种：将步骤（3)中清洗后的外植体接种在诱导培养基上，所述诱导培养基包括MS 培养基及附加成分，并向诱导培养基中添加〇. 5ml/L植物组织培养抗菌剂（PPM); (5) 培养：将步骤（4)中放置在诱导培养基中的外植体放入到培养箱中进行培养，采用 培养条件为：温度23-27°C，光强2500-30001x，白天光照12小时。
[0024] 实施例5:-种花榈木组培方法，该方法包括以下步骤： (1) 外植体的采集：采用当年生花榈木播种幼苗的带顶芽茎段、带侧芽茎段或叶片外植 体，采集时间为4月份； (2) 清洗：采用洗涤剂浸泡30分钟，用流水冲洗1小时； (3) 消毒：将步骤（2)中洗净的外植体拿入无菌工作台内，采用实施例2 -种花榈木组 培消毒灭菌配方，依次采用70%酒精、50mg/L利福平和50mg/L氯霉素混合液以及0. 1%的升 汞浸泡，针对叶片其浸泡时间分别为0. 5分钟、30分钟和6分钟，针对茎段其浸泡时间分别 为0. 5分钟、30分钟和8分钟，每次消毒处理后均用无菌水冲洗外植体4-5次； (4) 接种：将步骤（3)中清洗后的外植体接种在诱导培养基上，所述诱导培养基包括MS 培养基及附加成分； (5) 培养：将步骤（4)中放置在诱导培养基中的外植体放入到培养箱中进行培养，采用 培养条件为：温度23-27°C，光强2500-30001x，白天光照12小时。
[0025] 实施例6 :-种花榈木组培方法，该方法包括以下步骤： (1) 外植体的采集：采用多年生花榈木成年植株当年生叶片，采集时间为4月份； (2) 清洗：采用洗涤剂浸泡1小时，用流水冲洗2小时； (3) 消毒：将步骤（2)中洗净的外植体拿入无菌工作台内，采用采用实施例3 -种花榈 木组培消毒灭菌配方进行消毒，依次采用70%酒精、50mg/L利福平和50mg/L氯霉素混合液 以及0. 1%升萊的浸泡，其浸泡时间分别为0. 5分钟、30分钟和12分钟，每次消毒处理后均 用无菌水冲洗外植体4-5次； (4) 接种：将步骤（3)中清洗后的外植体接种在诱导培养基上，所述诱导培养基包括MS 培养基及附加成分； (5) 培养：将步骤（4)中放置在诱导培养基中的外植体放入到培养箱中进行培养，采用 培养条件为：温度23-27°C，光强2500-30001x，白天光照12小时。
[0026]作为优选的，上述实施例4-6中MS培养基成分如下： 硝酸钾KN03 1 900mg/L 硝酸铵NH4N03 1 6 50mg/L 七水硫酸镁MgS04. 7H20 370mg/L 磷酸二氢钾KH2P04 1 70mg/L 二水氯化钙CaC12. 2H20 440mg/L 四水硫酸锰MnS04. 4H20 22. 3mg/L 七水硫酸锌ZnS04. 7H20 8. 60mg/L 硼酸H3B03 6 . 20mg/L 碘化钾KI 0. 83mg/L 二水钼酸钠NaMo04. 2H20 0. 25mg/L 五水硫酸铜CuS04. 5H20 0. 025mg/L 六水氯化钴CoC12. 6H20 0. 025mg/L 乙二胺四乙酸二钠Na2-EDTA 37. 30mg/L 四水硫酸亚铁FeS04. 4H20 27. 80mg/L 甘氨酸 2.OOmg/L 盐酸硫胺素 0?lOmg/L 盐酸吡哆醇 0? 50mg/L 烟酸 0? 50mg/L 肌醇 lOOmg/L; 附加成分为 6-BA(6-节胺基噪呤，6-Benzylaminopurine)2.0mg/L，NAA(萘乙酸，I-Naphthylacetic) 1. 0mg/L，琼脂 8g/L，鹿糖 30g/L。
[0027]下列对比试验进一步说明本发明实施及其有益效果。
[0028] 1材料与方法 1. 1实验材料 分别进行了籽苗茎段、幼苗茎段、成年植株茎段和嫩叶的消毒实验。籽苗外植体取自温 室内萌发l〇d的籽苗，剪取3cm长茎段做外植体；幼苗外植体取自苗圃当年生播种苗，分别 于4、8、12月份剪取带顶芽长约6cm的茎段做外植体；成年植株外植体取自苗圃7年生及农 场20年生花榈木带顶芽枝条，分别于4、8、12月剪取当年生长约20cm半木质化枝条进行试 验。将各种茎段剪成1.5cm长带顶芽或带侧芽茎段，将幼苗和成年植株茎段上的当年生叶 片切成lcmXlcm大小用作外植体。
[0029] 1. 2消毒方法 将采集的籽苗外植体、幼苗外植体、成年植株外植体分别用洗涤剂浸泡15min、30min、 将采集的籽苗外植体、幼苗外植体、成年植株外植体分别用洗涤剂浸泡15min、30min、lh，并 用牙刷轻轻刷洗，成年植株外植体需去除表面绒毛，材料在流水下分别冲洗30min、lh、2h。 之后在超净工作台内进行药剂表面消毒。所有材料先用70%酒精浸泡30s，用无菌水冲洗 2-3次后分别采用表1的措施进行进一步消毒处理。每次处理后均用无菌水冲洗4-5次。
[0030] 1. 3接种方法 将外植体处理后于超净工作台上采用增值培养基接种，增值培养基配方为MS+6-BA2.Omg/L+NAAl. 0mg/L+ 琼脂 8g/L+ 鹿糖 30g/L，pH5. 8-6. 0,每种材料每个处理接种 15瓶，每瓶一个外植体。接种后置于培养温度（25±2) °C、光照强度30001x下培养，光照 时间12h/天。
[0031] 1.4结果统计方法 接种后每天观察材料污染情况，并记录，结果计算公式如下 污染率=(污染数/接种数）X100% 存活率=(存活数/接种数）X100% 诱导率=(成功诱导数/存活数）X100% 灭菌有效值=(1-未污染率）X成活率X诱导率（小数相乘）*100%。
[0032] 2?结果与分析 2. 1籽苗茎段消毒效果分析 由表2可知，用0. 1%升汞浸泡后，再用70%酒精浸泡30s的二次消毒处理（3号、4号） 可以降低籽苗茎段的污染率，同样处理下用〇. 1%升汞处理8min优于6min。而相同处理条 件下，在培养基中添加PPM的4号处理外植体污染率显著降低，成活率显著提高，比3号处 理提高了 26. 66%。因此，对籽苗茎段而言，用70%酒精浸泡30s+0. 1%升汞浸泡8min+70% 酒精浸泡30S+PPM消毒效果最好。不论哪一种消毒处理，保存下来的外植体诱导率均达到 100%〇
[0033] 2. 2幼苗外植体消毒效果分析 2. 2. 1叶片 对幼苗叶片外植体而言，相同消毒处理条件下，4月份采集的幼苗叶片污染率和存活率 相对较低(表3)，但诱导率较高，在50%-100%之间。8月份和12月份采集的叶片尽管存活 率高，但诱导率均为0。用（l〇〇mg/L苯菌灵+100mg/L链霉素）混合液浸泡30min(11-13 号处理）和（50mg/L利福平+50mg/L氯霉素）混合液浸泡30min(14-16号处理）均能有效 降低4月份叶片的污染，其未污染率均为100%，高于9号、10号处理，但其存活率会降低。 11-16号处理中，抗菌素用量产生的效果差异不明显，外植体存活率、诱导率均随升汞处理 时间增加而降低，以14号处理效果最好，存活率、诱导率分别为33. 33%、60%，灭菌有效值达 到19. 99%。因此，在4月份采集幼苗叶片做外植体，用70%酒精浸泡30s+ (50mg/L利福平 +50mg/L氯霉素）混合液浸泡30min+0. 1%升萊浸泡6min消毒效果最好。
[0034] 2. 2. 2 茎段 试验表明（表4)，总体上茎段的污染率为：4月份> 8月份> 12月份，但大多数消毒处 理的污染率差异不明显，9-16号处理的污染率平均值比较接近。与叶片消毒相比，9-16号 处理的消毒方法均可对茎段产生较好效果，可见幼苗茎段外植体对取材月份要求没有叶片 严格。外植体存活率则表现为：12月份>8月份>4月份。这可能与4月份幼苗茎段较幼 嫩有关；诱导率则以4月份最高，平均诱导率70. 86%，12月份次之，平均诱导率58. 67%，最 低的是8月份的茎段，平均诱导率55. 71%。外植体存活率、诱导率均随升汞处理时间增加 而降低。从材料有效值看，9号、10号、15号处理对不同月份的材料都比较好。需要注意的 是，虽然8月份及12月份的外植体材料有效值高于4月份，但外植体诱导产生的愈伤组织 较少且容易褐化。建议4月份采集的茎段用10号消毒处理，即70%酒精浸泡30s+0. 1%升 汞浸泡6min+培养基中添加PPM;8月份、12月份采集的茎段用15