04] 3.弃除培养液，加入0. 05%MTT应用液，每孔100yL，培养4h。
[0105] 4.弃除培养液，每孔加入100yLDMS0,振荡5min使甲瓒颗粒完全溶解，测定 490nm处的吸光度（0D值）。
[0106] 按照如下方法处理实验数据：
[0107] 公式：抑制率（％ )=(空白对照组0D平均值一样品组0D平均值度）/空白对照 组0D平均值X100%计算。再经软件计算，得出受试药物对各种肿瘤细胞生长的半数抑制 浓度（IC5。)。
[0108] (结果列于表1中）
[0109] 表1.本发明的部分化合物的体外细胞毒活性结果
[0110]
[0112] 本发明的化合物的动物体内活性实验
[0113] 乳腺癌细胞株BT549体外常规传代培养，无菌磷酸盐缓冲液（PBS)洗涤3次，PBS 重悬成浓度为10s/mL的单细胞悬液。75%酒精棉球消毒小鼠皮肤，将2X107(0.2ml)的单 细胞悬液接种于裸小鼠右肩背部皮下，建立皮下移植瘤模型，观察皮下肿瘤生长情况。裸小 鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100~300_ 3后将动物随机分组。使 用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每周2次，每次 测量时同时称鼠重。化合物组每周腹腔注射给药2次，对照组同时给等量生理盐水。给药 4周后，小鼠处死，手术剥取瘤块称重。
[0114] 公式：抑瘤率（％ )=(对照组平均瘤重一治疗组平均瘤重）/对照组平均瘤 重X100%计算。
[0115](结果列于表2中）
[0116] 表2为各化合物对BT549乳腺癌裸鼠移植肿瘤生长的抑制作用（X土SD，n= 8)
[0117]
[0119] 结论：实验结果显示，本发明的1，3, 5-三嗪类衍生物对PANC-1胰腺癌裸小鼠移植 瘤具有一定的生长抑制作用。其中，化合物M-01给药3. 3mg/kg剂量时，对胰腺癌PANC-1的 抑瘤率达33. 1 %，化合物M-05给药3. 2mg/kg剂量时，对胰腺癌PANC-1的抑瘤率达34. 8 %。 此外，化合物对小鼠体重增长均有一定抑制作用。
[0120] 本发明产物的水溶性研究
[0121] 称取研成细粉的供试品或量取液体供试品，于25°C±2°C-定容量的溶剂中，每 隔5分钟强力振摇30秒钟；观察30分钟内的溶解情况，如无目视可见的溶质颗粒或液滴 时，即视为完全溶解。化合物M01~12的水溶性数据见表3。
[0122] 表3化合物M01~12的水溶性
[0123]
[0125](三）典型的制剂：
[0126] 其中的1，3, 5-三嗪类衍生物可以以任意一个化合物作为活性成分。
[0127] 实施例1
[0128] 每片含10mg活性成分的片剂制备如下：
[0129]
[0130] 将活性成分，淀粉和纤维素过筛，并充分混合，将聚乙烯吡咯烷酮溶液与上述的粉 混合，过筛，制得湿颗粒于50-60°C干燥，将羧甲基淀粉钠盐，硬脂酸镁和滑石粉预先过筛， 然后加入到上述的颗粒中压片。
[0131] 实施例2
[0132] 每囊含lOOmg活性成分的胶囊的制备如下：
[0133]
【主权项】
1. 通式I的化合物及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药，其中： RjPR2相同或不同，分别独立地选自氢、（C1-Ciq)烷基、（C3-C7)环烷基、（C2-Ciq)烯基 和（C2-C1J炔基、取代(取代基为氢、卤素、C1-C4烷基)或未取代的（C5-C8)芳基，它们可以被 1-3个相同或不同的R3任选取代； 或札和R2与和它们所连接的氮原子一起形成5-10元杂环基或5-10元杂芳基，所述杂 环基和杂芳基除了与札和R2连接的氮原子外，任选含有1-4个选自N、O和S的杂原子，除 了札和R2所连接的氮原子外，所述杂环基任选包括1或2个碳碳双键或叁键，所述杂环基 和杂芳基可以任选被1-3个相同或不同的R4取代； R3、化为（C「C4)烷基、（C1-C4)烷氧基、卤代、羟基、氰基、羧基、（C1-Ciq)酯基。2. 权利要求1所述的通式I所示的1，3, 5-三嗪类化合物及其药学上可接受的盐、水合 物、溶剂化物或前药， RjPR2相同或不同，分别独立地选自氢、（C「C4)烷基、（C3-C7)环烷基、（C2-C4)烯基和 (C2-C4)炔基、取代(取代基为氢、卤素、C1-C4烷基)或未取代的（C5-C8)芳基，它们可以被1-3 个相同或不同的R3任选取代； 或札和R2与和它们所连接的氮原子一起形成5-10元杂环基或5-10元杂芳基，所述杂 环基和杂芳基可以任选被1-3个相同或不同的R4取代；除了RJPR2所连接的氮原子外，所 述杂环基和杂芳基可以任选含有1-4个选自N、O和S的杂原子。3. 权利要求1或2所述的通式I所示的1，3, 5-三嗪类化合物及其药学上可接受的盐、 水合物、溶剂化物或前药， 其中， M5PR2相同或不同，分别独立地选自氢、（C「C4)烷基、取代(取代基为氢、卤素、(^-(：4烷 基）或未取代的（C5-C8)芳基，它们可以被1-3个相同或不同的R3任选取代； 或札和R2与和它们所连接的氮原子一起形成5-10元杂环基或5-10元杂芳基，所述杂 环基和杂芳基可以任选被1-3个相同或不同的R4取代；除了RJPR2所连接的氮原子外，所 述杂环基和杂芳基可以任选含有1-4个选自N、O和S的杂原子。4. 权利要求1-3任何一项所述的通式I所示的1，3, 5-三嗪类化合物及其药学上可接 受的盐、水合物、溶剂化物或前药， 其中， RJPR2相同或不同，分别独立地选自氢、（C1-C4)烷基、羟基取代的（C1-C4)烷基、卤素 取代的苯基； 或札和R2与和它们所连接的氮原子一起形成吗啉基、4-哌啶酮基、4-羟基哌啶基、咪 唑基、哌啶基、4-甲基哌啶基、3-甲基哌啶基、2-甲基哌啶基、4-甲基-1-哌嗪基。5. 权利要求1-4任何一项所述的通式I所示的1，3, 5-三嗪类化合物及其药学上可接 受的盐、水合物、溶剂化物或前药， 其中， RJPR2分别独立地为甲基、乙基、氢、异丙基、羟乙基、3-羟丙基、2, 3-二羟基丙基、 2-乙胺基、4-氯苯基、4-溴苯基；或&和R2与和它们所连接的氮原子一起形成4-羟基哌 啶基、咪唑基、4-哌啶酮基。6. 下列通式I的化合物及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药： M-Ol:1-{4-[2-(二氟甲基）-1丨苯并[J]咪唑-1-基]-6-吗啉基-1，3, 5-三 嗪-2-基}哌啶-4-酮； M-02 :1-{4-[2-(二氟甲基）-1丨苯并[J]咪唑-1-基]-6-吗啉基-1，3, 5-三 嗪-2-基}哌啶-4-醇； M-03:4-{4-[2-(二氟甲基）-1沪苯并[J]咪唑-1-基]-6-(1沪咪 唑-1-基）-1，3, 5-三嗪-2-基}吗啉； M-04W妒二甲基-4-[2-(二氟甲基）-If苯并[J]咪唑-1-基]-6-吗啉 基-1，3, 5-三嗪基-2-胺； M-05W妒二乙基-4-[2-(二氟甲基）-If苯并[J]咪唑-1-基]-6-吗啉 基-1，3, 5-三嗪基-2-胺； M-06 异丙基-4-[2-(二氟甲基）-If苯并[J]咪唑-1-基]-6-吗啉基-1，3, 5-三 嗪基_2_胺； M-07 :2-({4-[2-(二氟甲基）-1丨苯并[J]咪唑-1-基]-6-吗啉基-1，3, 5-三 嗪-2-基}胺基）乙醇； M-08 :2-({4-[2-(二氟甲基）-1丨苯并[J]咪唑-1-基]-6-吗啉基-1，3, 5-三 嗪-2-基}胺基）-1-丙醇； M-09 :2-({4-[2-(二氟甲基）-1丨苯并[J]咪唑-1-基]-6-吗啉基-1，3, 5-三 嗪-2-基}胺基）-1，2-丙二醇； M-IO:，-{4-[2-(二氟甲基）-If苯并[J]咪唑-1-基]-6-吗啉基-1，3, 5-三 嗪_2_基}乙基-1，2-二胺； M-Il，(4_溴苯基）-4-[2-(二氟甲基）-If苯并[J]咪唑-1-基]-6-吗啉 基-1，3, 5-三嗪基-2-胺； M-12，(4_氯苯基）-4-[2-(二氟甲基）-If苯并[J]咪唑-1-基]-6-吗啉 基-1，3, 5-二嗪基_2_胺。7. -种药用组合物，包含权利要求1-6中任何一项的化合物及其药学上可接受的盐、 水合物、溶剂化物或前药作为活性成分以及药学上可接受的赋型剂。8. 权利要求1-6中任何一项的化合物及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前 药或权利要求7所述的药用组合物在制备治疗和/或预防增生性疾病药物中的应用。9. 权利要求1-6中任何一项的化合物及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前 药或权利要求7所述的组合物在制备治疗和/或预防癌症的药物中的应用。10. 权利要求1-6中任何一项的化合物及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前 药或权利要求7所述的组合物在制备治疗和/或预防肺癌、结肠癌、鼻咽癌、乳腺癌的药物 中的应用。
【专利摘要】本发明涉及通式Ⅰ所示新的1,3,5-三嗪类衍生物及其药学上可用盐、水合物、溶剂化物、前药，其中取代基R1和R2具有在说明书中给出的含义。本发明还涉及通式Ⅰ化合物的制备方法和抗肿瘤药物中的应用。
【IPC分类】A61P35/00, C07D403/04, A61K31/5377
【公开号】CN105130960
【申请号】CN201510468003
【发明人】孙铁民, 周志旭, 杜磊, 闫宁, 王玉德, 李林蔚
【申请人】沈阳药科大学
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年7月31日