PE柱，弃流出液，再用二氯甲烷溶液洗脱SPE柱，收集流出的第一洗脱液。
[0027]在该步骤中，硅胶柱和SPE柱相连通。向硅胶柱中加入第一待净化液，第一待净化 液先在硅胶柱中除去水和部分杂质，起到过滤的作用。接着，经过过滤的第一待净化液进入 SPE柱内，苯并(a)芘吸附在SPE柱上，杂质流出，弃去。然后，向硅胶柱中加入正己烷溶液，正 己烷溶液依次通过硅胶柱和SPE柱，以进一步除去杂质。接着，弃去硅胶柱，将正己烷溶液上 样至SPE柱中，弃流出液，再将二氯甲烷溶液上样至SPE柱中，苯并(a)芘被洗脱掉，随着液体 流出，得到第一洗脱液。由此，根据本发明实施例的测定奶油中苯并(a)芘含量的预处理方 法具有下列优点的至少之一:操作简便、快速、成本较低、准确性强、精密度高及稳定性强。
[0028]现有技术采用中性氧化铝层析柱进行预处理，该方法对油脂的去除效果有限，且 称样量不宜过大，否则不能有效去除油脂，而且溶剂消耗量较多、耗时长、方法较繁琐、稳定 性差、准确度低。发明人经过大量实验筛选得到利用SPE柱对奶油进行预处理。在本文中所 采用的术语"SPE柱"的含义是指固相萃取柱，本领域技术人员能够理解的是，在该柱中可以 填充有能够吸附苯并(a)芘的填料。根据本发明的具体实施例，可以采用的SPE柱购自Agela Technologies，货号为Bap 5006，该SPE柱能够进一步有效地特异性吸附苯并(a)芘，从而除 去杂质，便于后续检测。发明人经过大量实验优化得到，利用正己烷对硅胶柱及SPE柱进行 淋洗，SPE柱的填料能够与苯并(a)芘反应生成相对稳定的化学键，正己烷不能将其打开，所 以正己烷可以洗掉其他杂质，而二氯甲烷特殊的分子结构正好可以将反应生成的化学键打 开，从而将苯并(a)芘洗脱下来。此外，基于0.4g的样品，国标GB/T 22509-2008使用的溶剂 量至少为80毫升，而本发明使用的溶剂仅为30毫升左右，大大降低了溶剂使用量。
[0029] 发明人惊奇地发现，通过利用硅胶柱对奶油进行净化处理，既可以除去部分杂质， 例如：蛋白质，起到过滤的作用。而且，硅胶柱属于极性柱，可以吸附样品中极性较强的物 质，同时可以吸附样品中的水，而苯并(a)芘属于弱极性物质，在硅胶柱中不会有保留的。若 不连接硅胶柱，直接将奶油加入SPE柱，则奶油中的水分会影响SPE柱的净化效果。由此，根 据本发明实施例的测定奶油中苯并(a)芘含量的预处理方法具有下列优点的至少之一:操 作简便、快速、成本较低、准确性强、精密度高及稳定性强。
[0030] 根据本发明的具体实施例，在步骤(2-2-1)中，将第一待净化液上样至硅胶柱中之 前，将二氯甲烷溶液上样至硅胶柱中，待溶液流出后再将正己烷溶液上样至硅胶柱中，弃流 出液，以对硅胶柱和SPE柱进行活化。由此，根据本发明实施例的测定奶油中苯并(a)芘含量 的预处理方法具有下列优点的至少之一:操作简便、快速、成本较低、准确性强、精密度高及 稳定性强。
[0031] (2-3)将第一洗脱液进行浓缩处理，并将浓缩处理的产物进行过滤处理，得到第一 待测液。
[0032]根据本发明的具体实施例，浓缩处理包括:将第一洗脱液进行干燥处理，然后将干 燥处理的产物与正己烷进行混合处理。由此，根据本发明实施例的测定奶油中苯并(a)芘含 量的预处理方法具有下列优点的至少之一:操作简便、快速、成本较低、准确性强、精密度高 及稳定性强。
[0033]测定奶油中苯并(a)芘含量的方法
[0034] 在本发明的第二方面，本发明提出了测定奶油中苯并(a)芘含量的方法。根据本发 明的实施例，该方法包括：（3-1)利用前面所描述的测定奶油中苯并(a)芘含量的预处理方 法对奶油进行预处理，得到第一待测液；以及(3-2)利用色谱法对第一待测液进行检测，并 基于检测结果确定奶油中苯并(a)芘含量。由此，根据本发明实施例的测定奶油中苯并(a) 芘含量的方法具有下列优点的至少之一:操作简便、快速、成本较低、准确性强、精密度高及 稳定性强。
[0035] 根据本发明的具体实施例，色谱法为液相色谱法，液相色谱法的检测条件为:色谱 柱；250mmX4.6mm，5.0ym;流速：1 .OmL/min;流动相：乙腈：水= 88:12;进样量：20yL;柱温： 30°C;发射波长:406nm;激发波长:384nm。发明人经过大量实验优化得到最优检测条件，在 此条件下能够检测出苯并(a)芘的色谱峰，且无其他峰对其造成干扰，检测结果的准确性较 强。由此，根据本发明实施例的测定奶油中苯并(a)芘含量的方法具有下列优点的至少之 一:操作简便、快速、成本较低、准确性强、精密度高及稳定性强。
[0036]本领域技术人员能够理解的是，前面针对测定奶油中苯并(a)芘含量的预处理方 法所描述的特征及优点同样适用于该测定奶油中苯并(a)芘含量的方法，在此不再赘述。 [0037]另外，本发明提出了另一种测定奶油中苯并(a)芘含量的方法。根据本发明的实施 例，该方法包括：（1-1)将奶油与正己烷溶液混合，得到待净化液；（1-2)将SPE柱与硅胶柱相 连通，然后将二氯甲烷溶液上样至硅胶柱中，待溶液流出后再上样正己烷溶液，待溶液流出 后，将待净化液上样到硅胶柱中；（1-3)待溶液流出后，取5mL正己烷溶液上样至硅胶柱，待 溶液流至SPE柱中，将硅胶柱弃去，再取5mL正己烷溶液上样至SPE柱，弃去流出液；（1-4)取 5mL二氯甲烷溶液上样至步骤（1-3)所得到的SPE柱中，收集洗脱液；（1-5)将洗脱液进行干 燥处理，然后将干燥产物与lmL正己烷溶液混合，并进行过滤处理，得到待测液；（1-6)利用 液相色谱法对待测液进行检测，并基于检测结果确定奶油中苯并(a)芘含量，其中，液相色 谱法检测条件如下:色谱柱:250臟\4.61111]1，5.(^1]1 ;流速：1.〇111171]1；[11;流动相：乙腈:水=88: 12;进样量:20yL;柱温:30 °C ;发射波长:406nm;激发波长:384nm。由此，根据本发明实施例 的测定奶油中苯并(a)芘含量的方法具有下列优点的至少之一:操作简便、快速、成本较低、 准确性强、精密度高及稳定性强。
[0038]下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的 实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条 件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪 器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0039] 实施例1
[0040] 试剂及溶液：
[0041] SPE柱：厂家：Agela Technologies;货号：Bap 5006;
[0042] 硅胶柱：厂家:Agela Technologies;货号：SI5006;
[0043] 二氯甲烷:色谱纯；
[0044] 正己烷:色谱纯；
[0045] 苯并(a)芘标准品储备液:将纯度大于99 %的苯并(a)芘用正己烷进行稀释，得到 0 · 0 lmg/mL的储备液；
[0046]苯并(a)芘标准品工作液:将苯并(a)芘标准品储备液用正己烷进行梯度稀释，得 到不同浓度的苯并(a)芘标准品工作液。
[0047]按照下列步骤测定奶油中的苯并(a)芘含量：
[0048] (1)称取混合均匀的奶油0.4g于50mL离心管中，加入3mL正己烷涡旋溶解，作为待 净化液。
[0049] (2)在SPE柱上串联硅胶柱，两个柱子之间相通，先将5mL二氯甲烷上样至硅胶柱 中，待溶液流出后再加入5mL正己烷。待溶液流出后，将待净化液上样到硅胶柱中，然后再用 3mL正己烷润洗离心管，将润洗液上样到硅胶柱中。
[0050] (3)待溶液流出后，取5mL正己烷上样至硅胶柱，待溶液流至SPE柱中，将硅胶柱弃 去，再取5mL正己烷上样至SPE柱，弃去流出液。
[0051] (4)取5mL二氯甲烷上样于步骤(3)所得到的SPE柱中，收集洗脱液。
[0052] (5)将洗脱液在40 °C下氮气吹干，并将吹干产物与lmL正己烷涡旋溶解，过0.22μπι 有机滤膜，得到待测液。
[0053] (6)利用液相色谱法对不同浓度的苯并（a)芘标准品工作液进行检测，绘制峰面 积-苯并(a)芘浓度的标准曲线(如图1所示），其中，液相色谱法检测条件如下：
[0054] 色谱柱：艾杰尔C18色谱柱（