9,121.08,119.93,116.70,115.97,115.46， 112.93,63.91，63.58,49.17,47.62，16.47，16.24。
[0110] 实施例21
[0111 ] [2-( 1H)_喹啉酮-3_基]-2，3-二氯苯氨甲基勝酸二乙酯的制备
[0112]
[0113] 2mmol 3-甲酰基-2-(1Η)_喹啉酮、2mmol 2,3_二氯苯胺加入15ml甲苯中，室温下 搅拌lOmin后加入2mmol亚磷酸二乙酯，反应2.5h，脱溶后用V(石油醚）：V(乙酸乙酯）= 1:1 柱层析，得浅黄色固体，收率70.3%，熔点172~175°(：;1!1匪1?(40010^，0)(：1 3)6:11.77(8， lH)，8.02(d，J = 3.6Hz，lH)，7.59(d，J = 7.8Hz，lH)，7.52(t，J = 7.7Hz，lH)，7.40(d，J = 8.1Hz，lH)，7.23(t，J = 7.4Hz，lH)，6.93(t，J = 8.1Hz，lH)，6.80(d，J = 7.0Hz，lH)，6.59(d， J = 7.7Hz，lH)，5.74(t，J = 8.5Hz，lH，NH)，5.57,5.51(d，J = 7.8Hz，J=12.7Hz，lH，NCHP)， 4.32~4.25(m，2H，0CH2)，4.16~4.03(m，2H，0CH2)，1.35(t，J = 7.0Hz，3H，CH3)，1.19(t，J = 7.0Hz，3H，CH3);13CMlR(100MHz，CDCl3)S :163.39，143.66，138.61，138.00，133.06， 130·86，128·26，127·85，122·99，119·84，119·81，119·38，118·11，115·88，110·29,63·99， 63·67，49·32(47.79)，16.53,16.34。
[0m] 实施例22
[0115] [2-(1Η)_喹啉酮-3-基]-3,5_二氯苯氨甲基膦酸二乙酯的制备
[0116]
[0117] 2mmol 3-甲酰基-2-(1Η)_喹啉酮、2mmol 3,5-二氯苯胺加入15ml甲苯中，室温下 搅拌lOmin后加入2mmol亚磷酸二乙酯，反应2h，脱溶后用V(石油醚）：V(乙酸乙酯）= 1:1柱 层析，得白色固体，收率84.4%，熔点240~NMR(400MHz，DMS0-d6)S :12.13(s，lH， NH)，8.07(d，J = 3.2Hz，lH)，7.64(d，J = 7.8Hz，lH)，7.53(t，J = 7.7Hz，lH)，7.34(d，J = 8.2Hz，lH)，7.22(t，J = 7.4Hz，lH)，6.73(d，J=1.6Hz，2H)，6.69(s，lH)，5.28,5.20(d，J = 9.5Hz，lH，NCHP)，4.18~4.09(m，2H，0CH2)，4.05~3.86(m，2H，0CH2)，1.23(t，J = 7.0Hz，3H， CH3)，1.10(t，J = 7.0Hz，3H，CH3).13C 匪R(100MHz，DMS0-d6)S:161.31，149.81，138.35， 137.97，134.64,131·00，128.81，128.16,122.57,119.03,116.24,115.45,111.53，63·24， 63.07，47.47(45.92)，16.58，16.39。
[0118] 实施例23
[0119] [2-(lH)_喹啉酮-3-基]苯氨甲基膦酸酯的抗癌活性 [0120] 1.抗肿瘤活性原理
[0121] MTT法又称MTT比色法，是一种用于确定活细胞中线粒体脱氢酶活性的经典方法。 MTT分析法以活细胞代谢还原剂噻唑蓝[3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5二苯基溴化四氮唑； 3-(4，5-dimethylthiazol_2-yl )_2，5-diphenyltetrazolium bromide ,ΜΤΤ]为基础。MTT是 一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的ΜΤΤ 转化为不溶性的蓝紫色甲瓒(formazn)，而死细胞则无此功能。用DMS0溶解甲瓒后，在一定 波长下用酶标仪测定光密度值，即可定量测出细胞的存活率。根据光密度值的变化观察样 品对肿瘤细胞株的抑制作用。
[0122] 2.抗肿瘤活性实验
[0123] 试样:实施例化合物
[0124] 细胞系：人肺腺癌细胞株A549;人宫颈癌细胞株HeLa细胞株;人乳腺癌细胞株MCF-7;人骨肉瘤细胞株U20S(中南大学湘雅医学院细胞库提供）。
[0125] 试剂:噻唑蓝(MTT)、RPMI 1640培养基、新生胎牛血清、新生牛血清、双抗(Gibco); 胰酶(Gibco) ;96孔板;二甲亚砜（国药集团）。
[0126] 仪器:HFsafe-1500型超净台、HF151UV型⑶2培养箱（上海力申科学仪器有限公 司）；XSP-15C型倒置显微镜(上海长方光学仪器有限公司）；Multiskan MK3型酶标仪(美国 Thermo公司）；超纯水制备仪(美国Milli-Q公司）。
[0127] 实验操作:试样对A549细胞、HeLa细胞、MCF-7细胞和U20S细胞的测试。试样作用于 四种细胞的实验过程相同。每组实验设置空白对照组，试样分为5个浓度梯度（1.0mm 〇l/L、 0 · 3mmol/L、0 · lmmol/L、0 · 03mmol/L和0 .Olmmol/L)，每个浓度设4个复孔，每组实验平行测 定三次。设置波长为570nm检测各孔的0D值，并通过0D的变化计算试样对各细胞株的细胞毒 活性。
[0128] 3.抗肿瘤活性评价
[0129] 1)细胞增殖抑制率计算：
[0130]
[0131] 2)IC5Q 值计算
[0132] 运用SPSS软件进行分析，样品浓度对数值与细胞抑制率线性回归，计算化合物对 各细胞株的半数抑制浓度IC5Q值(均值土标准差）。化合物对A549细胞、HeLa细胞、MCF-7细胞 和U20S细胞株的IC 5Q值如表1~4所示。
[0133] 表1 [2-(1Η)_喹啉酮-3-基]苯氨甲基膦酸酯对A549细胞的抑制活性
[0134]
[0135] 表2 [2-(1Η)_喹啉酮-3-基]苯氨甲基膦酸酯对HeLa细胞的抑制活性
[0136]
[0137] ~表3 [2-(1Η)_喹啉酮-3-基]苯氨甲基膦酸酯对MCF-7细胞的抑制活性
[0138]
[0139] ~表4 [2-(1Η)_喹啉酮-3-基]苯氨甲基膦酸酯对U20S细胞的抑制活性 '
[0140]
[0141]活性测试结果表明，[2-(1Η)_喹啉酮-3-基]苯氨甲基膦酸酯及其在药学上可接受 的盐对人肺腺癌细胞A549、人宫颈癌细胞HeLa细胞、人乳腺癌细胞MCF-7和人骨肉瘤细胞具 有良好的抑制活性，可用于制备抗癌药物。
【主权项】
1. 一类化学结构式I所示的[2-(lH)-哇嘟酬-3-基]苯氨甲基麟酸醋及其在药学上可接 受的盐：其中，R选自：Cl~C2烷基、C3~C4直链烷基或支链烷基； X\X2选自：氨、気、打~C2烷基； X3、X7选自：氨、気、打~C2烷基、氣、氯、漠、舰或硝基； X4、X6选自：氨、気、立氣甲基、打~C2烷基、氣、氯、漠、舰； X5选自：氨、気、=氣甲基、Cl~C2烷基、Cl~C2烷氧基、氣、氯、漠、舰或硝基。2. 权利要求1所述的[2-(lH)-哇嘟酬-3-基]苯氨甲基麟酸醋及其药学上可接受的盐， 其特征在于，所述的化合物选自： 2- (4-氧代嚷挫嘟-2-亚氨基)嚷挫-4-乙酸乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-2-甲基苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-3-甲基苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-4-甲基苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-4-S氣甲基苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-2-硝基苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-4-硝基苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-4-甲氧基苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-2-氯苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-3-氯苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-4-氯苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-2-漠苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-3-漠苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-2,6-二甲基苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-3,4-二甲基苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-3,5-二=氣甲基苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2- (1H)-哇嘟酬-3-基]-2，4-二硝基苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-2-氯-4-硝基苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-3-氯-4-氣苯氨甲基麟酸二乙醋、 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-2,3-二氯苯氨甲基麟酸二乙醋或 [2-(lH)-哇嘟酬-3-基]-3,5-二氯苯氨甲基麟酸二乙醋。3. 权利要求1所述的[2-(lH)-哇嘟酬-3-基]苯氨甲基麟酸醋的制备方法，其特征在于 它的制备反应如下：式中，R、Xi~X7如权利要求1所述。4.权利要求1~2任一项所述的[2-(lH)-哇嘟酬-3-基]苯氨甲基麟酸醋及其药学上可 接受的盐W及药物组合物在制备抗癌药中的应用。
【专利摘要】本发明公开了结构式Ⅰ所示的[2-(1H)-喹啉酮-3-基]苯氨甲基膦酸酯及其在药学上可接受的盐：其中，R选自：C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或支链烷基；X1、X2选自：氢、氘、C1～C2烷基；X3、X7选自：氢、氘、C1～C2烷基、氟、氯、溴、碘或硝基；X4、X6选自：氢、氘、三氟甲基、C1～C2烷基、氟、氯、溴、碘；X5选自：氢、氘、三氟甲基、C1～C2烷基、C1～C2烷氧基、氟、氯、溴、碘或硝基。[2-(1H)-喹啉酮-3-基]苯氨甲基膦酸酯及其药学上可接受的盐以及药物组合物在制备抗癌药中的应用。
【IPC分类】C07F9/60, A61P35/00
【公开号】CN105646579
【申请号】
【发明人】胡艾希, 方毅林, 叶姣, 向建南
【申请人】湖南大学
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年1月29日