，加入含有〇 . 5 %甲酸的80 %甲醇溶液 200mL，其中料液比为Ig: 20mL，浸泡2h后，超声提取30min，重复2次，合并上清液，37 °C旋转 真空浓缩到只剩水相，使用高速离心机l〇〇〇〇r/min条件下离心5min，定容到75mL水中，浓缩 液过固相萃取柱，10 %甲醇冲洗IOOmL后，50%甲醇冲洗50mL，收集流出液，分别在旋转蒸发 仪上37°C蒸干得到10%洗脱组分57.6mg，50%甲醇洗脱组分33.Smgw-葡萄糖苷酶抑制活 性实验结果表明，其粗提液的a-葡萄糖苷酶抑制活性IC 5q为2545.5yg/mL，10%洗脱组分的 IC50为270.0yg/mL，50 %洗脱组分的IC5q为23.18yg/mL，其50 %洗脱组分的a-葡萄糖苷酶抑 制活性要远高于阳性对照阿卡波糖（图2)。
[0026] 实施例三 称取杨梅品种'木叶'果肉冷冻干燥粉末8g，加入含有0.5%甲酸的80%甲醇溶液 160mL，其中料液比为I g: 20mL，浸泡2h后，超声提取30min，重复2次，合并上清液，37 °C旋转 真空浓缩到只剩水相，使用高速离心机l〇〇〇〇r/min条件下离心5min，定容到70mL水中，浓缩 液过固相萃取柱，10 %甲醇冲洗IOOmL后，50%甲醇冲洗50mL，收集流出液，分别在旋转蒸发 仪上37°C蒸干得到10%洗脱组分72.9mg，50%甲醇洗脱组分44.5π^α-葡萄糖苷酶抑制活 性实验结果表明，其粗提液的a-葡萄糖苷酶抑制活性IC 5q为2083.7yg/mL，10%洗脱组分的 IC50为307.5yg/mL，50 %洗脱组分的IC5q为30.08yg/mL，其50 %洗脱组分的a-葡萄糖苷酶抑 制活性要远高于阳性对照阿卡波糖（图3)。
[0027]实施例四 称取杨梅品种'水晶'果肉冷冻干燥粉末l〇g，加入含有0.5%甲酸的80%甲醇溶液 200mL，其中料液比为Ig: 20mL，浸泡2h后，超声提取30min，重复2次，合并上清液，37 °C旋转 真空浓缩到只剩水相，使用高速离心机l〇〇〇〇r/min条件下离心5min，定容到75mL水中，浓缩 液过固相萃取柱，10 %甲醇冲洗IOOmL后，50%甲醇冲洗50mL，收集流出液，分别在旋转蒸发 仪上37°C蒸干得到10%洗脱组分37.6mg，50%甲醇洗脱组分39.Omg t3a-葡萄糖苷酶抑制活 性实验结果表明，其粗提液的a-葡萄糖苷酶抑制活性IC5q为2241.5yg/mL，10%洗脱组分的 IC 50为94.0yg/mL，50 %洗脱组分的IC5q为25.1 lyg/mL，其50 %洗脱组分的a-葡萄糖苷酶抑 制活性要远高于阳性对照阿卡波糖（图4)。
[0028] 实施例五 称取杨梅品种'乌紫'果肉冷冻干燥粉末8g，加入含有0.5%甲酸的80%甲醇溶液 160mL，其中料液比为I g: 20mL，浸泡2h后，超声提取30min，重复2次，合并上清液，37 °C旋转 真空浓缩到只剩水相，使用高速离心机l〇〇〇〇r/min条件下离心5min，定容到70mL水中，浓缩 液过固相萃取柱，10 %甲醇冲洗IOOmL后，50%甲醇冲洗50mL，收集流出液，分别在旋转蒸发 仪上37°C蒸干得到10%洗脱组分55.1 1^，50%甲醇洗脱组分34.21^。€[-葡萄糖苷酶抑制活 性实验结果表明，其粗提液的α-葡萄糖苷酶抑制活性IC 5q为2556.5yg/mL，10%洗脱组分的 IC50为307.8yg/mL，50%洗脱组分的IC 5q为28.37yg/mL，其50%洗脱组分的€(-葡萄糖苷酶抑 制活性要远高于阳性对照阿卡波糖（图5)。
[0029]实施例六 称取杨梅品种'小叶细蒂'果肉冷冻干燥粉末Sg，加入含有0.5%甲酸的80%甲醇溶液 160mL，其中料液比为I g: 20mL，浸泡2h后，超声提取30min，重复2次，合并上清液，37 °C旋转 真空浓缩到只剩水相，使用高速离心机l〇〇〇〇r/min条件下离心5min，定容到70mL水中，浓缩 液过固相萃取柱，10 %甲醇冲洗IOOmL后，50%甲醇冲洗50mL，收集流出液，分别在旋转蒸发 仪上37°C蒸干得到10%洗脱组分58.1 1^，50%甲醇洗脱组分25.41^。€[-葡萄糖苷酶抑制活 性实验结果表明，其粗提液的α-葡萄糖苷酶抑制活性IC 5q为3167.0yg/mL，10%洗脱组分的 IC50为343.8yg/mL，50%洗脱组分的IC 5q为69.49yg/mL，其50%洗脱组分的€(-葡萄糖苷酶抑 制活性要远高于阳性对照阿卡波糖（图6)。
[0030] 实施例七 称取杨梅品种'早大梅'果肉冷冻干燥粉末l〇g，加入含有0.5%甲酸的80%甲醇溶液 200mL，其中料液比为Ig: 20mL，浸泡2h后，超声提取30min，重复2次，合并上清液，37 °C旋转 真空浓缩到只剩水相，使用高速离心机l〇〇〇〇r/min条件下离心5min，定容到75mL水中，浓缩 液过固相萃取柱，10 %甲醇冲洗IOOmL后，50%甲醇冲洗50mL，收集流出液，分别在旋转蒸发 仪上37°C蒸干得到10%洗脱组分82.4mg，50%甲醇洗脱组分58.2π^α-葡萄糖苷酶抑制活 性实验结果表明，其粗提液的α-葡萄糖苷酶抑制活性IC 5q为2891. lyg/mL，10%洗脱组分的 IC50为245.5yg/mL，50%洗脱组分的IC5q为51.89yg/mL，其50%洗脱组分的α-葡萄糖苷酶抑 制活性要远高于阳性对照阿卡波糖（图7)。
【主权项】
1. 一种杨梅果肉提取物在制备a-葡萄糖巧酶抑制剂中的应用，其特征在于，所述的杨 梅果肉提取物通过W下制备步骤获得： a、 杨梅果实采收后，将果核丢弃，果肉部分液氮充分冻干，在冷冻干燥仪中-80°C下干 燥7化至恒重，用磨样机打磨成粉末状。 b、 用浓度为80 %的甲醇溶液浸泡化后，超声提取30min，料液比为Ig: 20血，使用高速离 屯、机100(K)r/min条件下离屯、5min，取上清液。超声提取重复2次，合并上清液，上清液在旋转 蒸发仪上37°C蒸干浓缩后溶于一定量的水中。 C、浓缩液过预处理好的Cl 8 Scp-PakS固相萃取柱，用浓度为10 %的甲醇溶液洗脱后再 用浓度为50%的甲醇溶液洗脱，将10%和50%甲醇洗脱后的流出液分别收集后浓缩干燥即 可得到10 %洗脱组分和50 %洗脱组分的杨梅果肉提取物。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于:所述杨梅选用品种为'華莽'、'东魅'、'木 叶'、'水晶'、'乌紫'、'小叶细蒂'或'早大梅'。3. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于:所述a-葡萄糖巧酶抑制剂的应用是指可在 制备功能食品或保健药品中应用，所述杨梅果肉提取物为10%洗脱组分或50%洗脱组分或 二种组分混合。4. 根据权利要求1或3所述的应用，其特征在于:所述的a-葡萄糖巧酶抑制剂由杨梅果 肉提取物与食品或保健药品可接受的辅助剂制成。
【专利摘要】本发明提供一种杨梅果肉提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的应用。杨梅果肉提取物由甲醇提取浓缩，经固相萃取柱萃取分离后得到。经初步的活性筛选试验证明：不同品种杨梅果肉粗提物均表现出α-葡萄糖苷酶抑制活性。该粗提物经固相萃取柱富集后不同的洗脱组分抑制α-葡萄糖苷酶的活性显著提高，尤其50％洗脱组分活性远高于阳性对照阿卡波糖。本发明对于杨梅资源的合理利用，以及提高杨梅产品附加值具有重大意义。
【IPC分类】A61K36/185, A61K131/00, A61P3/10
【公开号】CN105641006
【申请号】
【发明人】李鲜, 闫淑霞, 孙崇德, 陈昆松
【申请人】浙江大学
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年2月19日