杨梅果肉提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于功能食品或医药领域，涉及一种杨梅果肉提取物制备α-葡萄糖苷酶抑 制剂的应用。
【背景技术】
[0002] 糖尿病是一种人体血液中胰岛素含量绝对或相对不足，从而出现血糖高于正常 值、糖尿的现象，并引发脂肪和蛋白质等一系列代谢紊乱的疾病。通过抑制体内一些促进碳 水化合物消化的酶如α-葡萄糖苷酶的活性来降低餐后血糖是一种有效的治疗方法。
[0003] 饮食中的碳水化合物在α-葡萄糖苷酶的作用下释放葡萄糖，小肠吸收葡萄糖进入 血液，这是餐后血糖升高的主要原因。α-葡萄糖苷酶抑制剂一方面可以通过可逆地占据α-葡萄糖苷酶与糖的络合位点抑制α-葡萄糖苷酶的活性，延迟碳水化合物的吸收，另一反面 可以使碳水化合物、脂肪、蛋白质进入富含胰高血糖素样肽1的回肠末端，刺激其分泌的增 加，促进胰岛素的释放，降低餐后血糖。与其他口服降糖药及胰岛素治疗相比，α-葡萄糖苷 酶抑制剂类药物最显著的特征是能有效阻止糖尿病患者的餐后血糖升高，使患者血糖平稳 且缓慢地维持在一定水平，但脂肪和蛋白质的吸收不受其影响，因此不会造成营养物质的 吸收障碍。
[0004] 目前，阿卡波糖和伏格列波糖是临床上常用的α-葡萄糖苷酶抑制剂，然而，长期服 用这些药物后会产生一些毒副作用，例如肠胃气胀、腹痛、腹泻等。因此，开发天然高效、毒 副作用小的α-葡萄糖苷酶抑制剂尤为重要。
[0005] 研究表明，杨梅果实提取物可有效预防和控制糖尿病，但是还没有相关文献报道 其提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种杨梅果肉提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。 本发明所述的杨梅果肉提取物由甲醇提取浓缩，经固相萃取柱富集、洗脱后得到。经初步活 性筛选试验证明：不同品种的杨梅果肉提取物都表现出α-葡萄糖苷酶抑制活性。该提取物 经固相萃取柱富集后的不同洗脱组分抑制α-葡萄糖苷酶的活性显著提高，且50%洗脱组分 的活性远高于阳性对照阿卡波糖。所述α-葡萄糖苷酶抑制剂的应用是指可在制备功能食品 或保健药品中应用，所述的α-葡萄糖苷酶抑制剂由杨梅果肉提取物与一种或多种食品或保 健药品可接受的辅助剂制成。
[0007] 本发明所述的杨梅果肉提取物通过以下方法制备获得： a、杨梅果实采收后，将果核丢弃，果肉部分液氮充分冻干，在冷冻干燥仪中-80 °C下干 燥72h至恒重，用磨样机打磨成粉末状。
[0008] b、用浓度为80 %的甲醇溶液浸泡2h后，超声提取30min，料液比为Ig: 20mL，使用高 速离心机l〇〇〇〇r/min条件下离心5min，取上清液。超声提取重复2次，合并上清液，上清液在 旋转蒸发仪上37°C蒸干浓缩后溶于一定量的水中。
[0009] c、浓缩液过预处理好的C18 Sep-Paki)固相萃取柱，用浓度为10 %的甲醇溶液洗脱 后再用浓度为50%的甲醇溶液洗脱，将10%和50%甲醇洗脱后的流出液分别收集后浓缩干 燥即可得到不同的洗脱组分，即10 %洗脱组分和50 %洗脱组分。
[0010]所述材料为杨梅的不同品种，即'荸荠'、'东魁'、'木叶'、'水晶'、'乌紫'、'小叶细 蒂'和'早大梅'。
[0011] 所述杨梅果肉提取物为过固相萃取柱后的洗脱组分，即10%洗脱组分或50%洗脱 组分，或二种组分混合。
[0012] 本发明公开了杨梅果肉提取物抑制α-葡萄糖苷酶的应用。杨梅果肉提取物由甲醇 提取浓缩，经固相萃取柱萃取分离后得到。经初步的活性筛选试验证明：不同品种杨梅果肉 粗提物均表现出α-葡萄糖苷酶抑制活性。该粗提物经固相萃取柱富集后不同的洗脱组分抑 制α-葡萄糖苷酶的活性显著提高，尤其50%洗脱组分活性远高于阳性对照阿卡波糖。本发 明对于杨梅资源的合理利用，以及提高杨梅产品附加值具有重大意义。
【附图说明】
[0013] 图1为杨梅品种'荸养'果肉不同提取物与阳性对照阿卡波糖的α-葡萄糖苷酶抑制 活性。
[0014] 图2为杨梅品种'东魁'果肉不同提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
[0015] 图3为杨梅品种'木叶'果肉不同提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
[0016] 图4为杨梅品种'水晶'果肉不同提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
[0017] 图5为杨梅品种'乌紫'果肉不同提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
[0018] 图6为杨梅品种'小叶细蒂'果肉不同提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
[0019] 图7为杨梅品种'早大梅'果肉不同提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合附图和通过实施例对本发明进行具体的描述，有必要在此指出的是本实 施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技 术熟练人员可以根据本发明的内容作出一些非本质的改进和调整。
[0021] 实施例一： (1)α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定方法:从SIGMA公司订购的α-葡萄糖苷酶用磷酸钾缓 冲液(0.01111〇1/1^!1 = 6.8)配制成0.21]/11^，加入0.2%的834。其中酶活力单位定义为：37 °C，pH为6.8条件下，对硝基苯基-€(-0-吡喃葡萄糖苷(？即6)在酶的作用下1分钟释放1以111 〇1 葡萄糖，规定为一个酶活力单位(U)。
[0022] 测定时，在96孔酶标板中将112yL 0. lmol/L的磷酸钾液和20yLa-葡萄糖苷酶混合 均匀，然后加入8yL抑制剂，37°C恒温静置15min，加入20yL PNPG(2.5mmo 1/L)，37°C恒温静 置15min，加入80yL Na2C03(2.5mmol/L)，用酶标仪测定405nm的吸光值(样品组，A1),不加 a-葡萄糖苷酶的作为空白对照(样品空白，A2)，不加样品的为对照(酶活组，A3)，不加样品和a-葡萄糖苷酶的为背景对照(酶活空白，A 4)。阿卡波糖作为阳性对照。计算公式如下： 酶活抑制率（％ ) = [ 1-(Αι-Α2)/(Α3-Α4) ] X 100。
[0023] (2)新鲜的杨梅果实采收后，将果核丢弃，果肉部分液氮充分冻干，在冷冻干燥仪 中-80°C下干燥72h至恒重，用磨样机打磨成粉末状。称量'荸荠'果肉10g，加入含有0.5%甲 酸的80%甲醇溶液200mL，料液比为Ig: 20mL，浸泡2h后，超声提取30min，使用高速离心机 10000r/min条件下离心5min，合并上清液，重复2次，37°C旋转浓缩至只剩水相，定容到75mL 水中即为粗提液，粗提液过ClSScp-PakK固相萃取柱，每个小柱用20mL的水洗去糖，然后用 水-甲醇梯度洗脱，浓度为10%和50%，收集流出液，浓缩干燥后得到10%洗脱组分89.2mg， 50%洗脱组分60.2mg，将10%、50%洗脱组分和粗提液分别配制一系列梯度后进行α-葡萄 糖苷酶抑制活性试验分析。结果表明，'荸荠'果肉粗提液表现出α-葡萄糖苷酶抑制活性，其 IC 5?为2433.4yg/mL(图1)。该粗提物经固相萃取柱后的不同洗脱组分也具有显著的α-葡萄 糖苷酶抑制活性，10 %洗脱组分的IC5q为207.2yg/mL，50 %洗脱组分的IC5q为15.41yg/mL， 其50%洗脱组分的活性远高于阳性对照阿卡波糖（IC 5Q = 383.2yg/mL)(图1)。
[0024] 实验结果表明，'荸荠'果肉不同提取物均表现出α-葡萄糖苷酶抑制活性。其中 50%洗脱组分的α-葡萄糖苷酶抑制活性远高于阳性对照阿卡波糖。
[0025] 实施例二 称取杨梅品种'东魁'果肉冷冻干燥粉末IOg