[0054] 实施例9
[0055] 本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，与实施例1的区别在于：
[0056] 步骤（3)中，所述增殖培养基的组成为：所述增殖培养基的组成为:WPM基本培养 基，补充〇.6mg/L TDZ、0.7mg/L 6_BA、0.4mg/L IAA、6g/L鹿糖、18g/L葡萄糖、5.5g/L琼脂。
[0057] 实施例10
[0058] 本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，与实施例1的区别在于：
[0059] 步骤(2)中，所述诱导培养基的组成为:WPM基本培养基，补充0.5mg/L KT、0.5mg/L NAA、0.1mg/L IBA、0.5mg/L 2,4-D、5g/L蔗糖、5.5g/L琼脂；
[0060]步骤（3)中，所述增殖培养基的组成为：所述增殖培养基的组成为:WPM基本培养 基，补充0.5mg/L TDZ、0.5mg/L 6-BA、0.3mg/L IAA、5g/L蔗糖、5.5g/L琼脂。
[0061 ] 实施例11
[0062]本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，与实施例1的区别在于：
[0063] 步骤(2)中，所述诱导培养基的组成为:WPM基本培养基，补充0.5mg/L KT、0.5mg/L NAA、0.1mg/L IBA、0.5mg/L 2,4_D、15g/L葡萄糖、5.5g/L琼脂；
[0064] 步骤（3)中，所述增殖培养基的组成为：所述增殖培养基的组成为:WPM基本培养 基，补充〇.5mg/L TDZ、0.5mg/L 6_BA、0.3mg/L IAA、15g/L葡萄糖、5.5g/L琼脂。
[0065] 实施例12
[0066] 本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，与实施例1的区别在于：
[0067] 步骤(2)中，所述诱导培养基的组成为:WPM基本培养基，补充0.5mg/L KT、0.5mg/L NAA、0.1mg/L IBA、0.5mg/L 2,4-D、5.5g/U|^g;
[0068] 步骤（3)中，所述增殖培养基的组成为：所述增殖培养基的组成为:WPM基本培养 基，补充〇.5mg/L TDZ、0.5mg/L 6-BA、0.3mg/L IAA、5.5g/L琼脂。
[0069] 实施例13
[0070] 本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，与实施例1的区别在于：
[0071]步骤（3)中，所述增殖培养基的组成为：所述增殖培养基的组成为:WPM基本培养 基，补充〇.5mg/L TDZ、0.5mg/L 6-BA、5g/L鹿糖、15g/L葡萄糖、5.5g/L琼脂。
[0072] 实施例14
[0073] 本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，与实施例1的区别在于：
[0074] 步骤（3)中，所述增殖培养基的组成为：所述增殖培养基的组成为:WPM基本培养 基，补充〇.5mg/L TDZ、0.3mg/L IAA、5g/L鹿糖、15g/L葡萄糖、5.5g/L琼脂。
[0075] 实施例15
[0076] 本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，与实施例1的区别在于：
[0077]步骤（3)中，所述增殖培养基的组成为：所述增殖培养基的组成为:WPM基本培养 基，补充〇.5mg/L 6-BA、0.3mg/L IAA、5g/L鹿糖、15g/L葡萄糖、5.5g/L琼脂。
[0078] 实施例16
[0079] 本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，与实施例1的区别在于：
[0080] 步骤(2)中，所述诱导培养基的组成为:WPM基本培养基，补充0.5mg/L NAA、0.1 mg/ L IBA、0.5mg/L 2,4-D、5g/L鹿糖、15g/L葡萄糖、5.5g/L琼脂。
[0081 ] 实施例17
[0082]本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，与实施例1的区别在于：
[0083] 步骤(2)中，所述诱导培养基的组成为:WPM基本培养基，补充0.5mg/L ΚΤ、0. lmg/L IBA、0 · 5mg/L 2，4-D、5g/L鹿糖、15g/L葡萄糖、5 · 5g/L琼脂。
[0084] 实施例18
[0085] 本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，与实施例1的区别在于：
[0086] 步骤(2)中，所述诱导培养基的组成为:WPM基本培养基，补充0.5mg/L KT、0.5mg/L NAA、0 · 5mg/L 2，4-D、5g/L鹿糖、15g/L葡萄糖、5 · 5g/L琼脂。
[0087] 实施例19
[0088] 本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，与实施例1的区别在于：
[0089] 步骤(2)中，所述诱导培养基的组成为:WPM基本培养基，补充0.5mg/L KT、0.5mg/L ΝΑΑ、0· lmg/L IBA、5g/L鹿糖、15g/L葡萄糖、5.5g/L琼脂。
[0090] 实施例20
[0091] 观察实施例1 一 19中的愈伤组织样本外观褐化程度，同时测定统计每个实施例中 愈伤组织诱导时间、增殖率，结果见表1。
[0092] 表1实施例1 一 19中的愈伤组织样本褐化程度及诱导增殖结果
LUUM」 壮：木梅化：；梅化杜：+;梅化一服：十十；梅化广里：十十十〇
[0095]从上表中可以看出实施例1 一 19的愈伤组织在培养过程中的褐化程度结果，实施 例1 一9中，实施例1的技术方案得到的愈伤组织未发生褐化，同时其诱导时间最短，增殖率 最高，为本申请的最优选技术方案。同时，从实施例10-12可以看出，在培养基中不加入葡 萄糖或蔗糖时，褐化程度严重，当单独加入葡萄糖和蔗糖时，褐化程度较高，而加入了葡萄 糖和蔗糖两种之后，褐化程度降低。而从实施例13-15以及实施例16-19可以看出，诱导培 养基中补充〇、熟4、184、2,4-0四种植物生长激素，以及增殖培养基中补充了02、6-84、1六八三 种植物生长激素，其褐化程度更低，为本申请的优选方案。
[0096]以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对 本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的 普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改 进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种野漆愈伤组织防褐化的方法，其特征在于:所述方法包括以下步骤： (1) 外植体选取及灭菌:切取野漆茎段或叶柄，清洗干净，灭菌处理后，得外植体； (2) 愈伤组织诱导培养:将步骤（1)所得外植体接种到诱导培养基中培养2-5周，愈伤 组织生成，所述诱导培养基的组成包括:WPM基本培养基，补充KT、NAA、IBA、2，4-D中的至少2 种； (3) 愈伤组织增殖培养:将步骤(2)所得愈伤组织，接种到增殖培养基中培养4一5周，所 述增殖培养基的组成包括:WPM基本培养基，补充TDZ、6-BA、IAA中的至少1种。2. 根据权利要求1所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，其特征在于:所述诱导培养 基的组成包括:WPM基本培养基，补充0 · 1 -0 · 8mg/L KT、0 · 1 -0 · 8mg/L NAA、0 · 02-0 · 15mg/ L ΙΒΑ、0·1-0.8mg/L 2,4-D。3. 根据权利要求2所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，其特征在于:所述诱导培养 基的组成包括:WPM基本培养基，补充0 · 3-0 · 6mg/L KT、0 · 3-0 · 6mg/L NAA、0 · 05-0 · 12mg/ L ΙΒΑ、0·4-0.6mg/L 2,4-D。4. 根据权利要求3所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，其特征在于:所述诱导培养 基的组成包括:WPM基本培养基，补充0.5mg/L KT、0.5mg/L NAA、0.1mg/L IBA、0.5mg/L 2， 4-D〇5. 根据权利要求1所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，其特征在于:所述增殖培养 基的组成包括:WPM基本培养基，补充0· 1-0·8mg/L TDZ、0· 1-0·8mg/L 6-ΒΑ、0· 1-0·6mg/ L IAA〇6. 根据权利要求5所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，其特征在于:所述增殖培养 基的组成包括:WPM基本培养基，补充0·3-0·6mg/L TDZ、0·4-0·7mg/L 6-BA、0·2-0·4mg/ L IAA〇7. 根据权利要求6所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，其特征在于:所述增殖培养 基的组成包括:WPM基本培养基，补充0.5mg/L TDZ、0.5mg/L 6-BA、0.3mg/L IAA。8. 根据权利要求1所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，其特征在于:所述诱导培养 基与所述增殖培养基中还补充1 一 l〇g/L鹿糖、8-20g/L葡萄糖。9. 根据权利要求8所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，其特征在于:所述诱导培养 基与所述增殖培养基中还补充3-6g/L鹿糖、12-18g/L葡萄糖。10. 根据权利要求9所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，其特征在于:所述诱导培 养基与所述增殖培养基中还补充5g/L鹿糖、15g/L葡萄糖，还补充5.5g/L琼脂。
【专利摘要】本发明公开一种野漆愈伤组织防褐化的方法，所述方法包括以下步骤：(1)外植体选取及灭菌：切取野漆茎段或叶柄，清洗干净，灭菌处理后，得外植体；(2)愈伤组织诱导培养：将步骤(1)所得外植体接种到诱导培养基中培养2—5周，愈伤组织生成，所述诱导培养基的组成包括：WPM基本培养基，补充KT、NAA、IBA、2,4-D中的至少2种；(3)愈伤组织增殖培养：将步骤(2)所得愈伤组织，接种到增殖培养基中培养4—5周，所述增殖培养基的组成包括：WPM基本培养基，补充TDZ、6-BA、IAA中的至少1种，所述方法能够保证诱导或增殖过程中，愈伤组织不褐化死亡，始终为绿色，为不定芽的诱导以及次生代谢物质的产生提供基础。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105638461
【申请号】
【发明人】罗琳, 王洁, 丁龙梅
【申请人】四川禾木本业农林科技有限公司
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2015年12月30日