一种野漆愈伤组织防褐化的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物组培育苗技术领域，具体涉及一种野漆愈伤组织防褐化的方法。
【背景技术】
[0002] 野漆是优良的木本油料树种，其根、叶及果入药，有清热解毒、散瘀生肌、止血、杀 虫之效，治跌打骨折、湿疹疮毒、毒蛇咬伤，又可治尿血、血崩、白带、外伤出血、子宫下垂等 症;种子油可制皂或掺合干性油作油漆;中果皮之漆蜡可制蜡烛、膏药、发蜡等;树皮可提栲 胶;树干乳液可代生漆用;其木材坚硬致密，可作细工用材，具有较高的药用、工业以及园林 价值。
[0003] 目前主要通过播种、嫁接、组培技术繁殖，其中在采用组培技术进行繁殖时，采用 野漆叶柄和茎段进行愈伤组织诱导培养，因野漆中的单宁含量较高，外植体容易褐化死亡， 造成培养失败，增加了繁殖成本，因此，野漆组培中的防褐化成为亟待解决的问题。
【发明内容】
[0004] 有鉴于此，本申请提供一种野漆愈伤组织防褐化的方法，所述方法能够保证诱导 或增殖过程中，愈伤组织不褐化死亡，始终为绿色，为不定芽的诱导以及次生代谢物质的产 生提供基础，其配方简单，培养基成本低，培养流程简便，具有很好的应用前景。
[0005] 为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是一种野漆愈伤组织防褐化的方 法，所述方法包括以下步骤：
[0006] (1)外植体选取及灭菌:切取野漆茎段或叶柄，清洗干净，灭菌处理后，得外植体； [0007] (2)愈伤组织诱导培养:将步骤（1)所得外植体接种到诱导培养基中培养2-5周， 愈伤组织生成，所述诱导培养基的组成包括:WPM基本培养基，补充KT、NAA、IBA、2,4-D中的 至少2种；
[0008] (3)愈伤组织增殖培养:将步骤(2)所得愈伤组织，接种到增殖培养基中培养4一5 周，所述增殖培养基的组成包括:WPM基本培养基，补充TDZ、6-BA、IAA中的至少1种。
[0009] 优选的，所述诱导培养基的组成包括:WPM基本培养基，补充0.1 - 0.8mg/L KT、 0.1-0.8mg/L ΝΑΑ、0·02-0.15mg/L ΙΒΑ、0·1-0.8mg/L 2,4-D。
[0010]更为优选的，所述诱导培养基的组成包括:WPM基本培养基，补充0.3-0.6mg/L ΚΤ、0·3-0.6mg/L ΝΑΑ、0·05-0.12mg/L ΙΒΑ、0·4-0.6mg/L 2,4-D。
[0011]更为优选的，所述诱导培养基的组成包括：WPM基本培养基，补充0.5mg/L KT、 0.5mg/L NAA、0.1mg/L IBA、0.5mg/L 2,4_D。
[0012]优选的，所述增殖培养基的组成包括:WPM基本培养基，补充0.1-0.8mg/L TDZ、 0.1-0·8mg/L 6_BA、0·I-0.6mg/L IAA〇
[0013]更为优选的，所述增殖培养基的组成包括:WPM基本培养基，补充0.3-0.6mg/L TDZ、0.4-0.7mg/L 6-ΒΑ、0·2-0.4mg/L IAA。
[0014]更为优选的，所述增殖培养基的组成包括:WPM基本培养基，补充0.5mg/L TDZ、 0.5mg/L 6_BA、0.3mg/L ΙΑΑ。
[0015] 优选的，所述诱导培养基与所述增殖培养基中还补充I一lOg/l蔗糖、8-20g//L葡 萄糖。
[0016] 更为优选的，所述诱导培养基与所述增殖培养基中还补充3-6g/L蔗糖、12-18g/ L葡萄糖。
[0017] 更为优选的，所述诱导培养基与所述增殖培养基中还补充5g/L蔗糖、15g/L葡萄 糖，还补充5.5g/L琼脂。
[0018] 本申请所述WPM基本培养基为木本植物培养基，适用于多种木本植物的组培快繁。
[0019] 所述KT为氯吡脲，是一种具有细胞分裂素活性的苯脲类植物生长调节剂，其生物 活性较6-苄氨基嘌呤高10-100倍。它能够影响植物芽的发育、加速细胞有丝分裂、促进细 胞增大和分化，防止果实和花的脱落，也能作为植物组织培养的细胞分裂素。
[0020] 所述NAA为萘乙酸，是一种植物生长激素，在植物使用扦插法繁殖时使用，也可用 于植物组织培养，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根增加座果，防止落果，改变雌、雄 花比率等，可经叶片、树枝的嫩表皮，种子进入到植株内，随营养流输导到全株。
[0021 ]所述IBA为吲哚丁酸，是一种植物生长激素，主要用于插条生根，可诱导根原体的 形成，促进细胞分化和分裂，有利于新根生成和维管束系统的分化，促进插条不定根的形 成。
[0022] 所述2,4_D是用于诱导愈伤组织形成的生长素类似物的一种，可作为植物生长调 节激素，用于组织培养。
[0023] 所述TDZ是一种植物生长调节剂，具有很强的细胞分裂素活性，可以促进植物芽的 再生和繁殖，打破芽的休眼，促进种子萌发，促进愈伤组织生长，延缓植物衰老等，可以对其 它的植物激素和生理活性物质的作用来调节植物的生长发育过程，可用作植物组织培养。 [0024]所述6-BA为6-苄氨基腺嘌呤，是一种植物生长激素，其主要作用是促进芽的形成， 也可以诱导愈伤组织发生，促进细胞分裂，促进非分化组织分化，促进生物体内物质的积 累，促进侧芽发生，防止老化，是植物组织和细胞培养中的细胞分裂素。
[0025]所述IAA为吲哚乙酸，是一种植物生长激素，能够调节植物的生长，不仅能促进生 长，而且具有抑制生长和器官建成的作用。在细胞水平上，可刺激形成层细胞分裂、刺激枝 的细胞伸长、抑制根细胞生长、促进木质部、韧皮部细胞分化、促进插条发根、调节愈伤组织 的形态建成，因此可用作植物组织培养。
[0026] 本申请与现有技术相比，其详细说明如下:本申请技术方案提供了一种野漆愈伤 组织防褐化的方法，包括外植体的选取及灭菌、愈伤组织诱导培养、愈伤组织增殖培养的步 骤，通过对诱导培养基、增殖培养基的筛选，通过控制诱导培养基和增殖培养基中不同的植 物生长激素的种类及其糖的种类，通过上述组分的配比筛选，得到最佳的培养基组分和配 比，采用前述植物生长激素和糖类配比形成的培养基，能够保证诱导或增殖过程中，愈伤组 织不褐化死亡，始终为绿色，为不定芽的诱导以及次生代谢物质的产生提供基础。其培养基 配方简单，培养基成本低，培养流程简便，具有很好的应用前景。
【具体实施方式】
[0027] 为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对 本发明作进一步的详细说明。
[0028] 实施例1
[0029] 本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，包括以下步骤：
[0030] (1)外植体选取及灭菌:切取野漆茎段或叶柄，清洗干净，灭菌处理后，得外植体；
[0031] (2)愈伤组织诱导培养:将步骤（1)所得外植体接种到诱导培养基中培养2-5周， 愈伤组织生成，所述诱导培养基的组成为:WPM基本培养基，补充0.5mg/L KT、0.5mg/L NAA、 0.1mg/L IBA、0.5mg/L 2,4-D、5g/L鹿糖、15g/L葡萄糖、5.5g/L琼脂；
[0032] (3)愈伤组织增殖培养:将步骤(2)所得愈伤组织，接种到增殖培养基中培养4一5 周，所述增殖培养基的组成为：所述增殖培养基的组成为:WPM基本培养基，补充0.5mg/L TDZ、0.5mg/L 6_BA、0.3mg/L IAA、5g/L鹿糖、15g/L葡萄糖、5.5g/L琼脂。
[0033] 实施例2
[0034] 本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，与实施例1的区别在于：
[0035] 步骤(2)中，所述诱导培养基的组成为:WPM基本培养基，补充0.1mg/L KT、0.1mg/L NAA、0.02mg/L IBA、0.1mg/L 2,4_D、lg/L鹿糖、8g/L葡萄糖、5.5g/L琼脂。
[0036] 实施例3
[0037] 本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，与实施例1的区别在于：
[0038] 步骤(2)中，所述诱导培养基的组成为:WPM基本培养基，补充0.8mg/L KT、0.8mg/L NAA、0.15mg/L IBA、0.8mg/L 2,4_D、10g/L鹿糖、20g/L葡萄糖、5.5g/L琼脂。
[0039] 实施例4
[0040] 本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，与实施例1的区别在于：
[0041 ]步骤(2)中，所述诱导培养基的组成为:WPM基本培养基，补充0.3mg/L KT、0.3mg/L NAA、0.05mg/L IBA、0.4mg/L 2,4_D、3g/L鹿糖、12g/L葡萄糖、5.5g/L琼脂。
[0042] 实施例5
[0043] 本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，与实施例1的区别在于：
[0044] 步骤(2)中，所述诱导培养基的组成为:WPM基本培养基，补充0.6mg/L KT、0.6mg/L NAA、0.12mg/L IBA、0.6mg/L 2,4_D、6g/L鹿糖、18g/L葡萄糖、5.5g/L琼脂。
[0045] 实施例6
[0046] 本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，与实施例1的区别在于：
[0047] 步骤（3)中，所述增殖培养基的组成为：所述增殖培养基的组成为:WPM基本培养 基，补充〇.lmg/L TDZ、0.1mg/L 6-BA、0.1mg/L IAA、lg/L鹿糖、8g/L葡萄糖、5.5g/L琼脂。
[0048] 实施例7
[0049] 本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，与实施例1的区别在于：
[0050] 步骤（3)中，所述增殖培养基的组成为：所述增殖培养基的组成为:WPM基本培养 基，补充〇.8mg/L TDZ、0.8mg/L 6_BA、0.6mg/L IAA、10g/L鹿糖、20g/L葡萄糖、5.5g/L琼脂。 [0051 ] 实施例8
[0052]本实施例所述的一种野漆愈伤组织防褐化的方法，与实施例1的区别在于：
[0053]步骤（3)中，所述增殖培养基的组成为：所述增殖培养基的组成为:WPM基本培养 基，补充〇.3mg/L TDZ、0.4mg/L 6-BA、0.2mg/L IAA、3g/L鹿糖、12g/L葡萄糖、5.5g/L琼脂。