可完全抑制大肠埃希氏菌（ATCC 10536、CMCC 44103)、金黄色葡萄球菌 (ATCC 12600、CMCC 26003)、阪崎肠杆菌（ATCC 29544)、沙门氏菌（ATCC 14028)、粪肠球菌 (ATCC 29212)、枯草芽孢杆菌ATCC 63501和苏云金杆菌ATCC 10792等生长。
[0037] 实施例3抗含氯消毒剂细菌计数培养基的性能测试
[0038] 1、用无菌生理盐水分别将过夜培养的菌液（大肠杆菌ATCC25922、弗氏志贺 氏菌ATCC12022、鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028、金黄色葡萄球菌ATCC6538、枯草芽孢杆 菌ATCC117 74)稀释成一定浓度的菌悬液，将以上五种菌悬液混合制备成菌落总数约 100-300CUF/mL的混合菌悬液。
[0039] 2、使用青岛海博生物技术有限公司的平板计数琼脂作常规培养基，配制培养基并 灭菌：
[0040] 3、按配方配置以下四种抗含氯消毒剂细菌计数培养基并灭菌：
[0041] 组合1 :胰蛋白胨10g/L，葡萄糖2g/L，牛肉粉5g/L，氯化钠5g/L，酵母粉3g/ L，琼脂14g/L，硫代硫酸钠2g/L、硫乙醇酸钠2g/L、甘氨酸I. 5g/L、Tween80 lg/L，pH = 7· 0±0· 2·;
[0042] 组合2 :胰蛋白胨10g/L，葡萄糖2g/L，牛肉粉5g/L，氯化钠5g/L，酵母粉3g/L， 琼脂14g/L，硫代硫酸钠2g/L、硫乙醇酸钠2. 5g/L、甘氨酸I. 5g/L、Tween80 lg/L，蒸馏水 1000mL，pH = 7· 0±0· 2 ;
[0043] 组合3 :胰蛋白胨10g/L，葡萄糖2g/L，牛肉粉5g/L，氯化钠5g/L，酵母粉3g/L， 琼脂14g/L，硫代硫酸钠4g/L、硫乙醇酸钠2g/L、甘氨酸I. 5g/L、Tween80 lg/L，蒸馏水 1000mL，pH = 7· 0±0· 2 ;
[0044] 组合4 :胰蛋白胨10g/L，葡萄糖2g/L，牛肉粉5g/L，氯化钠5g/L，酵母粉3g/L， 琼脂14g/L，硫代硫酸钠4g/L、硫乙醇酸钠2. 5g/L、甘氨酸I. 5g/L、Tween80 lg/L，蒸馏水 1000mL，pH = 7· 0±0· 2〇
[0045] 4、将步骤2中的常规培养基分别添加各类含氯消毒剂至其终浓度分别为：次氯酸 钠840mg/L、二氧化氯45mg/L、二氯异氰尿酸钠600mg/L、三氯异氰脲酸500mg/L、二氯海因 600mg/L、氯胺 T1600mg/L。
[0046] 5、将步骤3中的四种抗含氯消毒剂细菌计数培养基分别添加各类含氯消毒剂至 其终浓度分别为：次氯酸钠840mg/L、二氧化氯45mg/L、二氯异氰尿酸钠600mg/L、三氯异氰 脲酸 500mg/L、二氯海因 600mg/L、氯胺 T1600mg/L。
[0047] 6、将步骤1的混合菌悬液分别按A、B、C、D四种方式进行培养，并计数：
[0048] A、吸取ImL混合菌悬液于无菌平皿中，将凉至46°C左右的步骤2所述培养基15mL 倾注平皿，每个两个平行，并转动平皿使混合均匀，待琼脂凝固后，倒置于36°C温箱中培养 48h ；
[0049] B、重复步骤A，仅将培养基更换为步骤4中的培养基；
[0050] C、重复步骤A，仅将培养基更换为步骤5中的培养基；
[0051] D、重复步骤A，仅将培养基更换为步骤3中的培养基；
[0052] 实验结果如下：
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[0055] (C、D组数据分别表示该组培养菌落数与常规培养基菌落数的比值）
[0056] 上述实验结果说明：
[0057] 1、A、D组数据对比说明：用标准菌株进行培养基验证时，本发明所述抗含氯消毒 剂细菌计数培养基与常规培养基相比，计数结果无明显差异。说明解抑剂本身对培养基中 营养成分无破坏作用、对细菌无杀灭和抑制作用。
[0058] 2、A、B、C组数据对比说明：用标准菌株进行培养基验证时，本发明所述抗含氯消 毒剂细菌计数培养基与常规培养基相比，对各类含氯消毒剂有切实可靠的解抑作用；解抑 剂与含氯消毒剂反应的产物对细菌无杀灭和抑制其生长的作用；
[0059] 实施例4抗含氯消毒剂细菌计数培养基实际样品测试
[0060] 实验方法：
[0061] 无含氯消毒剂残留样品：从超市购买的普通食品；有含氯消毒剂残留样品：矿泉 水和饮料等生产企业提供的有含氯消毒剂残留样品，矿泉水和饮料样品未经稀释，直接用 于计数。以上样品分别按照GB4789. 2-2010方法进行菌落总数计数，每组样品做3个平行。
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[0064] 注：前五个样品为无含消毒剂样品；后五个样品为：含氯消毒剂样品。
[0065] 上述实验结果说明：
[0066] 前五个样品检测结果表明：当检测无含氯消毒剂残留的样品时，抗含氯消毒剂细 菌计数培养基与常规培养基的计数结果无明显差异。
[0067] 后五个样品检测结果表明：检测有含氯消毒剂残留的样品时，抗含氯消毒剂细菌 计数培养基的计数结果明显优于常规培养基，细菌检出率提高200%以上。
【主权项】
1. 一种抗含氯消毒剂细菌计数培养基，其特征在于，在常规细菌培养基中加入硫代硫 酸钠，硫乙醇酸钠，甘氨酸，吐温-80。2. 如权利要求1所述的一种抗含氯消毒剂细菌计数培养基，其特征在于，所述培养基 组成如下：胰蛋白胨5-10g/L，葡萄糖l-4g/L，牛肉粉2-5g/L，氯化钠l-5g/L，酵母粉2-5g/ L，琼脂14-20g/L，硫代硫酸钠l-5g/L，硫乙醇酸钠l-5g/L，甘氨酸l-5g/L，吐温-801-10g/ L，蒸馏水1000 mL,pH= 7. 0 ± 0? 2。3. 如权利要求2所述的一种抗含氯消毒剂细菌计数培养基，其特征在于，所述培养基 组成如下：胰蛋白胨l〇g/L，葡萄糖2g/L，牛肉粉5g/L，氯化钠5g/L，酵母粉3g/L，琼脂14g/ L，硫代硫酸钠2g/L，硫乙醇酸钠3g/L，甘氨酸3g/L，吐温-805g/L，蒸馏水1000 mL,pH= 7. 0±0. 2〇4. 如权利要求2所述的一种抗含氯消毒剂细菌计数培养基，其特征在于，所述培养基 的使用方法如下： (1) 按组分要求配置培养基灭菌； (2) 取含氯消毒剂残留的样品添加到磷酸盐缓冲液或生理盐水中，制成样品匀液；制 备10彳首系列稀释样品勾液； (3) 根据样品的污染情况，选择2-3个适宜稀释度的样品匀液，吸取稀释样品匀液于无 菌平皿内；同时，分别吸取同样数量空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照； (4) 及时将15mL~20mL冷却至46°C的抗含氯消毒剂细菌计数培养基倾注步骤（3)所 述平皿，并转动平皿使其混合均匀； (5) 待琼脂凝固后，倒置于36±1°C温箱中培养48±2h; (6) 菌落计数。
【专利摘要】本发明公开了一种抗含氯消毒剂细菌计数培养基，所述培养基由胰蛋白胨，葡萄糖，牛肉粉，氯化钠，酵母粉，琼脂，硫代硫酸钠，硫乙醇酸钠，甘氨酸和吐温-80组成。本发明提供的培养基中硫代硫酸钠和硫乙醇酸钠对无机和有机含氯消毒剂均有解抑作用，而其中的甘氨酸和吐温-80则针对某些复方含氯消毒剂中的酚类和表面活性剂类有解抑作用，同时丰富的营养可保证细菌的良好生长。当检测有含氯消毒剂残留的样品时，抗含氯消毒剂培养基的计数结果明显优于常规培养基，细菌检出率提高200％以上。当检测无含氯消毒剂残留的样品时，抗含氯消毒剂培养基与常规培养基的计数结果无明显差异。
【IPC分类】C12Q1/06
【公开号】CN105177106
【申请号】
【发明人】何艳玲, 孙万东, 王杰伟, 吴艳辉
【申请人】北京陆桥技术有限责任公司
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年9月6日