一种抗含氯消毒剂细菌计数培养基的利记博彩app
【技术领域】：
[0001] 本发明属于微生物检测领域，涉及一种抗含氯消毒剂细菌计数培养基。
【背景技术】：
[0002] 在食品和水的生产过程中，为了使产品达到卫生标准，必须对生产线上的设备及 管道、原辅料和包装材料等进行消毒处理。消毒剂对微生物有明显的杀灭和抑制作用，能控 制污染食品和水中微生物的繁殖，防止食品和水的变质。但在进行检验时，产品中残留的消 毒剂会对微生物检测造成严重干扰，即使样品中含有致病微生物，使用常规培养基却不能 检出，从而作为合格产品进入市场，而经过一定期限或遇到适宜的环境后，被抑制的菌就会 复苏、生长、繁殖，导致食品和水变质，直接影响广大消费者的身体健康。目前相关企业所使 用的消毒剂中以含氯类消毒剂最为广泛，因此研制抗含氯消毒剂培养基，最大限度地消除 含氯消毒剂对微生物检测的影响，提高微生物检测的灵敏度和准确性，使潜在的不合格产 品不致流入市场，为生广厂家提尚广品质量提供强有力的检测工具，进一步提尚食品卫生 控制水平和产品质量，保障人们身体健康，是当前食品和水质检测所急需解决的重要问题。
[0003] 近年来，在抗干扰培养基研究方面，国外企业尚无成熟产品，仅有一种对苯甲酸盐 防腐剂有抗性的接合酵母菌检测培养基的报道，但该培养基尚不能推广至其他酵母的检 测，应用范围极小；国内方面，仅有广东环凯公司在进行抗防腐剂、抗消毒剂培养基的研制， 现已初步形成产品。因此抗含氯消毒剂培养基的研制，对于弥补常规培养基在含消毒剂样 品检测中的检出率过低，防止潜在不合格产品流入市场，以及为后续其他类型抗干扰培养 基的研制提供理论与实践，具有深远意义。
【发明内容】
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[0004] 发明主要目的在于克服目前常规培养基对含氯消毒剂样品中细菌检出率较低问 题，最大限度地降低样品检测时含氯消毒剂对微生物的影响，提高含氯消毒剂样品中细菌 的检出率及准确率。
[0005] 为了解决上述技术问题，本发明提供一种抗含氯消毒剂细菌计数培养基，所述培 养基是在常规细菌培养基中加入硫代硫酸钠，硫乙醇酸钠，甘氨酸，吐温-80。
[0006] 具体组成如下：胰蛋白胨5-10g/L，葡萄糖l_4g/L，牛肉粉2_5g/L，氯化钠 l_5g/L， 酵母粉2-5g/L，琼脂14-20g/L，硫代硫酸钠 l-5g/L，硫乙醇酸钠 l-5g/L，甘氨酸l-5g/L，吐 温-801-10g/L，其余为蒸馏水，pH = 7. 0±0. 2
[0007] 采用上述培养基对有含氯消毒剂残留样品进行计数的具体操作方法（参照GB 4789.2-2010)：
[0008] 1、按组分要求配制培养基，12?Γ、15π?η进行高压蒸汽灭菌；
[0009] 2、取25g或25mL有含氯消毒剂残留样品于225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水中，用 适宜方法充分混匀，制成1 :10的样品匀液；
[0010] 3、制备10倍系列稀释样品匀液；
[0011] 4、根据样品的污染情况，选择2-3个适宜稀释度的残样品匀液（液体样品可包括 原液），吸取ImL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿；同时，分别吸取ImL空白 稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照；
[0012] 5、及时将15mL~20mL冷却至46°C的抗含氯消毒剂细菌计数培养基倾注平皿，并 转动平皿使其混合均匀；
[0013] 6、待琼脂凝固后，将平板翻转，36 °C ± 1°C培养48h ± 2h。水产品30 °C ± I °C培养 72h±3h ;
[0014] 7、菌落计数方法：
[0015] 按GB 4789. 2-2010中7. 1所述的菌落总数计算方法中进行计数。
[0016] 本发明所述培养基可消除的含氯消毒剂的种类及浓度：
[0017] 二氧化氯 45 mg/L； 次氯酸钠 840 mg/L; 二氯异氰尿酸钠 600 mg/L; 三氯异氰脲酸 500 mg/L; 二氯海因 60Q.mg/L; T 1600 mg/L,
[0018] 有益效果：
[0019] 1、本发明设计所提供的抗含氯消毒剂细菌计数培养基中的硫代硫酸钠和硫乙醇 酸钠对无机和有机含氯消毒剂均有解抑作用，而其中的甘氨酸和吐温-80则针对某些复 方含氯消毒剂中的酚类和表面活性剂类有解抑作用，同时丰富的营养可保证细菌的良好生 长。
[0020] 2、本发明中的解抑剂本身或与消毒剂反应的产物对样品中的微生物无杀灭或抑 制其生长的作用，对营养成分无破坏作用、亦不影响其物理性状，所以当检测含氯消毒剂的 样品时，抗含氯消毒剂培养基的计数结果明显优于常规培养基，细菌检出率提高200%以 上。当检测不含氯消毒剂的样品时，抗含氯消毒剂培养基与常规培养基的计数结果无明显 差异。
[0021] 3、本发明可消除含氯消毒剂的浓度高，二氧化氯达到45mg/L;次氯酸钠达到 840mg/L ;二氯异氰尿酸钠达到600mg/L ;三氯异氰脲酸达到500mg/L ;二氯海因达到 600mg/L ;氯胺 T 达到 1600mg/L。
【具体实施方式】：
[0022] 实施例1: 一种抗含氯消毒剂细菌计数培养基及其使用方法
[0023] 1、按以下配方配置抗含氯消毒剂细菌计数培养基：
[0024] 胰蛋白胨10g/L，葡萄糖2g/L，牛肉粉5g/L，氯化钠5g/L，酵母粉3g/L，琼脂14g/ L，硫代硫酸钠2g/L，硫乙醇酸钠3g/L，甘氨酸3g/L，吐温-805g/L，其余为蒸馏水，pH = 7· 0±0· 2·
[0025] 2、分装三角瓶，121°C高压灭菌15min，备用；
[0026] 3、检验方法（1):对于包装物，可用适量灭菌生理盐水荡洗；
[0027] 检验方法（2):(食品或饮料）以无菌操作称取检样25克（或25mL)，放入含有 225mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的均质杯或均质袋中（或锥形瓶），充分振摇，即为1 : 10的均匀稀释液。依次做1 :1〇〇，1 :1000……稀释液，根据对样品污染情况的估计，选择2~ 3个合适稀释度的样品匀液；
[0028] 3、吸取各稀释液ImL于无菌平皿中，每个稀释度做2个平皿，同时，分别吸取ImL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照，稀释液移入平皿后应及时将15~20mL凉至 46°C左右的抗含氯消毒剂细菌计数培养基倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。待琼脂凝 固后，将平板翻转，36 °C ± I °C培养48h ± 2h。水产品30 °C ± I °C培养72h ± 3h。
[0029] 4、观察结果。
[0030] 5、菌落计数方法：
[0031] 按GB 4789. 2-2010中7. 1所述的菌落总数计算方法中进行计数。
[0032] 实施例2消毒剂抑菌浓度的确定
[0033] 将每种待测消毒剂直接加入到灭菌后的常规营养培养基中（使用青岛海博生物 技术有限公司的平板计数琼脂作常规培养基），制备成一系列含有浓度由低到高的消毒剂 的培养基，然后将测试菌株制备成菌悬液（浓度为100_300CFU/mL)，采用GB4789. 2-2010中 倾注倒平板方法进行测定，同时设不加消毒剂的常规培养基作为空白对照。
[0034] 待测消毒剂为食品行业广泛使用的次氯酸钠、二氧化氯、二氯异氰尿酸钠、三氯异 氰尿酸、二氯海因、氯胺T。测试菌株包括大肠埃希氏菌ATCC 25922、金黄色葡萄球菌ATCC 6538、枯草芽孢杆菌ATCC 11774和铜绿假单胞菌ATCC 10104。
[0035] 测定结果显示，所有测试菌株抑菌率均达到100%所需各消毒剂的浓度为：次氯 酸钠约840mg/L、二氧化氯45mg/L、二氯异氰尿酸钠600mg/L、三氯异氰脲酸500mg/L、二氯 海因 600mg/L 及氯胺 T 1600mg/L。
[0036] 用其它菌株来验证以上各消毒剂的浓度是否能100%抑制其生长，结果表明，以上 六种浓度的消毒剂