一种制备磷脂酰丝氨酸的方法_2

文档序号:8959553阅读:来源:国知局
80~100U/mg。
[0041] 所述的磷脂原料与中长链脂肪酸乙酯的重量比为1:0. 5~10,所述磷脂酶D的 加入量为磷脂原料重量的1 %~10%,所述L-丝氨酸的加入量为磷脂原料重量的10%~ 300%,所述缓冲液的加入量为磷脂原料重量的200 %~2000%。
[0042] 所述步骤(4)中加热、搅拌反应的反应温度为20~60°C,反应时间为4~24h ;所 述步骤(6)中分子蒸馏的蒸馏温度为60~120°C,蒸馏压力为0· 1~20Pa。
[0043] -种由上述任一所述方法制备而成的磷脂酰丝氨酸。
[0044] -种制备磷脂酰丝氨酸的方法,包括下列步骤:
[0045] (1)从海洋动物中提取得磷脂原料;
[0046] (2)将步骤⑴中得到的磷脂原料溶解于中长链脂肪酸乙酯,得到溶液A ;
[0047] (3)将磷脂酶D、L-丝氨酸和氯化钙溶解于PH值为4. 5~6. 0的醋酸缓冲液中, 得到溶液V ;
[0048] (4)将步骤⑵中得到的溶液A加入步骤⑶中得到的溶液B'中,得到混合溶液 C',把得到的混合溶液C'加热、搅拌反应,得到反应后的溶液D';
[0049] (5)将步骤(4)中得到的反应后的溶液D'采用离心方法去掉水相得到油相;
[0050] (6)将步骤(5)中得到的油相采用分子蒸馏方法脱除中长链脂肪酸乙酯,收集分 子蒸馏重相,即制得磷脂酰丝氨酸。
[0051] 步骤(1)所述的磷脂原料中总磷脂含量为40%~80%;步骤(2)所述的中长链脂 肪酸乙酯为辛酸乙酯、鱼油乙酯、油酸乙酯或DHA乙酯中的一种或两种以上的混合物;步骤 ⑶所述磷脂酶D的活力为80~100U/mg。
[0052] 所述的磷脂原料与中长链脂肪酸乙酯的重量比为1:0. 5~10,所述磷脂酶D的 加入量为磷脂原料重量的1 %~10%,所述L-丝氨酸的加入量为磷脂原料重量的10%~ 300%,所述缓冲液的加入量为磷脂原料重量的200 %~2000%。
[0053] 所述步骤(4)中加热、搅拌反应的反应温度为20~60°C,反应时间为4~24h ;所 述步骤(6)中分子蒸馏的蒸馏温度为60~120°C,蒸馏压力为0· 1~20Pa。
[0054] -种由上述任一所述方法制备而成的磷脂酰丝氨酸。
[0055] 实施例1 :
[0056] 从海洋动物多春鱼卵中提取总磷脂含量为40 %的20g磷脂原料溶于40g辛酸乙酯 中,得到溶液A ;将0. 2g活力为80U/mg粉末磷脂酶D、30gL-丝氨酸溶解于40g、PH值为5. 6 的醋酸缓冲液中,得到溶液B ;将得到的溶液A加入得到的溶液B中,得到混合溶液C,把得 到的混合溶液C加热至20°C搅拌反应24h,得到反应后的溶液D ;反应结束后将溶液D采用 离心方法分离出油相和水相,将得到的油相部分采用分子蒸馏方法全部或部分脱除中长链 脂肪酸乙酯,分子蒸馏中的蒸馏温度为60°C,蒸馏压力0. 1~1.0 Pa,进料量为2. 5g/min,刮 膜转速为150rpm,收集分子蒸馏重相组分即制得磷脂酰丝氨酸,检测制得的磷脂酰丝氨酸 中总磷脂含量为40. 2%,磷脂酰丝氨酸在磷脂中的含量为85. 3%。
[0057] 实施例2 :
[0058] 从海洋动物鲱鱼卵中提取总磷脂含量为70 %的20g磷脂原料溶于20g鱼油乙酯 (DHA含量为17. 96 % )中,得到溶液A ;将0· 3g活力为85U/mg粉末磷脂酶D、35gL-丝氨酸 溶解于120g、PH值为6. 0的醋酸缓冲液中,得到溶液B ;将得到的溶液A加入得到的溶液B 中,得到混合溶液C,把得到的混合溶液C加热至30°C搅拌反应20h,得到反应后的溶液D ; 反应结束后将溶液D采用离心方法分离出油相和水相,将得到的油相部分采用分子蒸馏方 法全部或部分脱除中长链脂肪酸乙酯,分子蒸馏中的蒸馏温度为70°C,蒸馏压力1~5Pa, 进料量为2. 5g/min,刮膜转速为150rpm,收集分子蒸馏重相组分即制得磷脂酰丝氨酸,检 测制得的磷脂酰丝氨酸中总磷脂含量为51 %,磷脂酰丝氨酸在磷脂中的含量为84. 9%,未 蒸出的鱼油乙酯中DHA含量为34. 64 %。
[0059] 实施例3 :
[0060] 从海洋动物鱿鱼卵中提取总磷脂含量为50 %的2g磷脂原料溶于20g油酸乙酯中, 得到溶液A ;将Ig活力为95U/mg粉末磷脂酶D、2gL-丝氨酸溶解于300g、PH值为4. 5的醋 酸缓冲液中,得到溶液B ;将得到的溶液A加入得到的溶液B中,得到混合溶液C,把得到的 混合溶液C加热至50°C搅拌反应8h,得到反应后的溶液D ;反应结束后将溶液D采用离心 方法分离出油相和水相,将得到的油相部分采用分子蒸馏方法全部或部分脱除中长链脂肪 酸乙酯,分子蒸馏中的蒸馏温度为90°C,蒸馏压力5~15Pa,进料量为2. 5g/min,刮膜转速 为150rpm,收集分子蒸馏重相组分即制得磷脂酰丝氨酸,检测制得的磷脂酰丝氨酸中总磷 脂含量为55 %,磷脂酰丝氨酸在磷脂中的含量为86. 5 %。
[0061] 实施例4:
[0062] 从海洋动物飞鱼卵中提取总磷脂含量为60 %的20g磷脂原料溶于IOgDHA乙酯中, 得到溶液A ;将2g活力为lOOU/mg粉末磷脂酶D、60gL-丝氨酸和0. 2g可提高磷脂酶D稳 定性的氯化钙溶解于400g、PH值为5. 0的醋酸缓冲液中,得到溶液B将得到的溶液A加 入得到的溶液B'中,得到混合溶液C',把得到的混合溶液C'加热至60°C搅拌反应4h, 得到反应后的溶液D';反应结束后将溶液D'采用离心方法分离出油相和水相,将得到的 油相部分采用分子蒸馏方法全部或部分脱除中长链脂肪酸乙酯,分子蒸馏中的蒸馏温度为 120°C,蒸馏压力15~20Pa,进料量为2. 5g/min,刮膜转速为150rpm,收集分子蒸馏重相组 分即制得磷脂酰丝氨酸,检测制得的磷脂酰丝氨酸中总磷脂含量为58%,磷脂酰丝氨酸在 磷脂中的含量为87. 2%。
[0063] 采用现有的酶转化法用乙醚做溶剂从多春鱼卵中制备磷脂酰丝氨酸的实验如下 所示:
[0064] 称取多春鱼卵中总磷脂含量为41 %的20g磷脂原料溶于40g乙醚中,将0· 2g活力 为80U/mg粉末磷脂酶D、30gL-丝氨酸和0. 2g氯化钙溶解于40g、PH值为5. 6的醋酸缓冲 液中,然后将磷脂原料与辛酸乙酯的混合溶液和溶有磷脂酶D的醋酸缓冲液混合搅拌,并 将混合液加热至20°C反应24h ;反应结束后将混合液分层,收集上层乙醚相挥干溶剂组分 即制得磷脂酰丝氨酸,检测制得的磷脂酰丝氨酸中总磷脂含量为41. 3%,磷脂酰丝氨酸在 磷脂中的含量为86. 1%。
[0065] 采用现有的酶转化法用乙酸乙酯做溶剂从多春鱼卵中制备磷脂酰丝氨酸的实验 如下所示:
[0066] 称取多春鱼卵中总磷脂含量为41 %的20g磷脂原料溶于40g乙酸乙酯中,将0. 2g 活力为80U/mg粉末磷脂酶D、30gL-丝氨酸和0. 2g氯化钙溶解于40g、PH值为5. 6的醋 酸缓冲液中,然后将磷脂原料与辛酸乙酯的混合溶液和溶有磷脂酶D的醋酸缓冲液混合搅 拌,并将混合液加热至20°C反应24h ;反应结束后将混合液分层,收集上层乙酸乙酯相挥干 溶剂组分即制得磷脂酰丝氨酸,检测制得的磷脂酰丝氨酸中总磷脂含量为40. 5%,磷脂酰 丝氨酸在磷脂中的含量为85. 8 %。
[0067] 样品检测分析条件如下:
[0068] 总磷脂含量的测定采用GB/T 5537-2008规定的第一法测定。
[0069] 脂肪酸组成的测定方法如下:
[0070] 将样品溶解于氯仿溶液,点样于薄层硅胶预制板上,于石油醚-乙醚-乙酸混合液 (85:15:1,
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