树脂(HP20树脂)，分散于去离子水中，并装配成吸附树脂层析柱，再用与吸附树脂层析柱等体积的去离子水进行反冲，就得到了莱菔素分离柱。将固定化黑芥子酶反应柱和莱菔素分离柱进行连接，就组装出反应-分离耦合柱式反应器，收集备用。
[0034](4)制备高纯度莱菔素
[0035]第(3)步完成后，将第(2)步制得的高纯度4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷浓缩液，栗入第(3)步组装得到的反应-分离耦合柱式反应器中，在高纯度4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷浓缩液的栗入速度为反应-分离耦合柱式反应器体积的I倍/小时下，进行连续反应。反应结束后，收集柱式反应器流出液和反应-分离耦合柱式反应器。对于收集的反应-分离耦合柱式反应器，先将固定化黑芥子酶反应柱与莱菔素分离柱断开，然后再将莱菔素分离柱用2倍于莱菔素分离柱体积的无水乙醇进行洗脱，洗脱完成后，收集洗脱液和洗脱后的莱菔素分离柱。对于收集的洗脱液，经减压浓缩后，然后再置于真空干燥箱中，在真空度为0.07MPa下，真空干燥20h，最后得到高纯度莱菔素，莱菔素纯度达98.1 %。
[0036]实施例2
[0037]—种用萝卜籽柏生产高纯度莱菔素的方法，具体方法步骤如下:
[0038](I)制备4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷粗提液
[0039]以萝卜籽柏为原料，按照萝卜籽柏的质量:体积分数为55%乙醇溶液的体积之比为Ikg: 7L的比例，在温度为70°C的条件下，浸提1.5h。将浸提混合物栗入压滤机进行压滤，在同等条件下，进行第二次浸提和压滤，对于收集的第二次浸提清液，与收集的第一次浸提清液合并后，再栗入截留分子量为700Da的纳滤器中，在0.30MPa下，进行第一次纳滤分离，直至纳滤截留液的体积为原体积的25%时止，在同等条件下，进行第二次纳滤分离，直至第二次纳滤截留液的体积减少为原体积的10 %时止。
[0040](2)制备高纯度4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷浓缩液
[0041]第(I)步完成后，将市售制备色谱填料(SMB C18 10 μ m色谱填料)，并装配成制备色谱柱。再按照制备色谱柱:第(I)步合并的纳滤滤过液的体积比为1: 4的比例，将合并的纳滤滤过液以流速为制备色谱柱体积的3倍/小时的速度，栗入制备色谱柱中。在检测波长为280nm，体积分数为35%的乙醇溶液为流动相，流动相流速为制备色谱柱体积的4倍/小时的条件下，将流动相栗入制备色谱柱中。然后待流动相栗入20min时，开始进行收集4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷色谱流出液，待流动相栗入28min时，结束收集4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷色谱流出液。对于收集的4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷色谱流出液，栗入反渗透浓缩器中，在0.20MPa下，进行第一次反渗透浓缩，直到第一次反渗透截留液的体积减少至原体积的12%为止，在同等条件下，再进行第二次反渗透浓缩，直到第二次反渗透截留液的体积减少至原体积的6%为止，第二次反渗透截留液，即为高纯度4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷浓缩液，纯度为97.2%。
[0042](3)制备反应-分离耦合柱式反应器
[0043]第(2)步完成后，以市售黑芥子酶为原料，按照黑芥子酶的质量:缓冲溶液的体积比为Ig: 7mL的比例，超声波处理15min后，进行过滤。其中，pH 5.6的磷酸氢二钠-梓檬酸缓冲溶液。
[0044]将市售已活化的胺基型树脂(SA20A树脂)，按照胺基型树脂的质量:收集的过滤液的体积:丙二醛质量浓度为18%的丙二醛溶液的体积比为Ig: 4mL: 0.8mL的比例，浸泡2.5h，再加入丙二醛溶液，在温度为42°C下进行固定化酶反应4.5h。反应完成后通过抽滤机进行抽滤。用2倍于抽滤渣体积的去离子水对抽滤渣进行洗涤。
[0045]将制备得到的固定化黑芥子酶装入夹套保温层析柱中，然后升温至28°C。将市售已活化的吸附树脂(AB-8树脂)，并装配成吸附树脂层析柱，就得到了莱菔素分离柱。将固定化黑芥子酶反应柱和莱菔素分离柱进行连接，就组装出反应-分离耦合柱式反应器，收集备用。
[0046](4)制备高纯度莱菔素
[0047]第(3)步完成后，将第(2)步制得的高纯度4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷浓缩液，栗入第(3)步组装得到的反应-分离耦合柱式反应器中，在高纯度4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷浓缩液的栗入速度为反应-分离耦合柱式反应器体积的2倍/小时下，进行连续反应。先将固定化黑芥子酶反应柱与莱菔素分离柱断开，然后再将莱菔素分离柱用2倍于莱菔素分离柱体积的无水乙醇进行洗脱。对于收集的洗脱液，经减压浓缩后，然后再置于真空干燥箱中，在真空度为0.075MPa下，真空干燥25h，最后得到高纯度莱菔素，莱菔素纯度达98.6%。
[0048]实施例3
[0049]—种用萝卜籽柏生产高纯度莱菔素的方法，具体方法步骤如下:
[0050](I)制备4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷粗提液
[0051]以萝卜籽柏为原料，按照萝卜籽柏的质量:体积分数为60%乙醇溶液的体积之比为Ikg: 8L的比例，在温度为70°C的条件下，浸提2h。将浸提混合物栗入压滤机进行压滤，在同等条件下，进行第二次浸提和压滤，对于收集的第二次浸提清液，与收集的第一次浸提清液合并后，再栗入截留分子量为SOODa的纳滤器中，在0.35MPa下，进行第一次纳滤分离，直至纳滤截留液的体积为原体积的30%时止，在同等条件下，进行第二次纳滤分离，直至第二次纳滤截留液的体积减少为原体积的15 %时止。
[0052](2)制备高纯度4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷浓缩液
[0053]第(I)步完成后，将市售制备色谱填料(SPS C18 10 μ m色谱填料)，并装配成制备色谱柱。再按照制备色谱柱:第(I)步合并的纳滤滤过液的体积比为1: 5的比例，将合并的纳滤滤过液以流速为制备色谱柱体积的3倍/小时的速度，栗入制备色谱柱中。在检测波长为280nm，体积分数为40%的乙醇溶液为流动相，流动相流速为制备色谱柱体积的5倍/小时的条件下，将流动相栗入制备色谱柱中。然后待流动相栗入22min时，开始进行收集4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷色谱流出液，待流动相栗入30min时，结束收集4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷色谱流出液。对于收集的4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷色谱流出液，栗入反渗透浓缩器中，在0.25MPa下，进行第一次反渗透浓缩，直到第一次反渗透截留液的体积减少至原体积的15%为止，在同等条件下，再进行第二次反渗透浓缩，直到第二次反渗透截留液的体积减少至原体积的8%为止，第二次反渗透截留液，即为高纯度4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷浓缩液，纯度为98.9%。
[0054](3)制备反应-分离耦合柱式反应器
[0055]第(2)步完成后，以市售黑芥子酶为原料，按照黑芥子酶的质量:缓冲溶液的体积比为Ig: 8mL的比例，超声波处理20min后，进行过滤。其中，pH 4.8的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液。
[0056]将市售已活化的胺基型树脂(SA21A树脂)，按照胺基型树脂的质量:收集的过滤液的体积:丙二醛质量浓度为18%的丙二醛溶液的体积比为Ig: 5mL: 0.9mL的比例，浸泡3h，再加入丙二醛溶液，在温度为45°C下进行固定化酶反应6h。反应完成后通过抽滤机进行抽滤。用2倍于抽滤渣体积