应完成后通过抽滤机进行抽滤，分别收集抽滤渣和抽滤液。对于收集的抽滤渣，用2倍于抽滤渣体积的去离子水对抽滤渣进行洗涤，除去夹杂的游离黑芥子酶和丙二醛，分别收集洗涤渣和洗涤液。对于收集的洗涤渣，即为制备出的固定化黑芥子酶，4°C保存备用。对于收集的洗涤液，与收集的抽滤液合并、浓缩、调配后，可再次用于固定化黑芥子酶。
[0014]将制备得到的固定化黑芥子酶装入夹套保温层析柱中，用与固定化黑芥子酶等体积的去离子水进行反冲，用以排出固定化黑芥子酶中的气泡，然后升温至25?30°C，就得到固定化黑芥子酶反应柱，用于水解4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫苷。将市售已活化的吸附树脂(HP20树脂或AB-8树脂或D113树脂)分散于去离子水中，并装配成吸附树脂层析柱，再用与吸附树脂层析柱等体积的去离子水进行反冲，排出吸附树脂层析柱中的气泡，就得到了莱菔素分离柱，用于吸附生成的莱菔素。将固定化黑芥子酶反应柱和莱菔素分离柱进行连接，就组装出反应-分离耦合柱式反应器，收集备用。对于收集的反冲液，栗入生化处理池、进行生化处理，达标后排放。
[0015](4)制备高纯度莱菔素
[0016]第(3)步完成后，将第(2)步制得的高纯度4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫苷浓缩液，栗入第(3)步组装得到的反应-分离耦合柱式反应器中，在高纯度4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷浓缩液的栗入速度为反应-分离耦合柱式反应器体积的I?3倍/小时下，进行连续反应。反应结束后，收集柱式反应器流出液和反应-分离耦合柱式反应器。对于收集的柱式反应器流出液，含有葡萄糖、硫苷，经结晶后可用作动物饲料添加剂。对于收集的反应-分离耦合柱式反应器，先将固定化黑芥子酶反应柱与莱菔素分离柱断开，然后再将莱菔素分离柱用2倍于莱菔素分离柱体积的无水乙醇进行洗脱，洗脱完成后，收集洗脱液和洗脱后的莱菔素分离柱。对于收集的洗脱液，经减压浓缩后，然后再置于真空干燥箱中，在真空度为0.07?0.08MPa下，真空干燥20?30h，以除去残留的乙醇，最后得到高纯度莱菔素，莱菔素纯度达98.1?99.2%。对于收集的洗脱后的莱菔素分离柱和固定化黑芥子酶反应柱，经再生后，可重新组装出反应-分离耦合柱式反应器反复使用。
[0017]本发明采用上述技术方案后，主要有以下效果:
[0018]1、本发明在生产过程中，使用固定化酶作为催化剂，大大提高了酶的利用率。同时创新组装出反应-分离耦合柱式反应器，可进行连续操作、反复使用，因而能提高产量节约成本。
[0019]2、本发明提供的生产莱菔素的方法纯化效率高，产品的纯度高达98 %以上，且无溶剂残留。同时在生产过程中得到多种副产品，进一步降低了生产成本。
[0020]3、本发明在生产过程中，采用废弃的萝卜籽柏为原料，成本低廉且废物利用；避免使用氯仿、乙腈等有毒试剂，使用乙醇、去离子水等无毒物质，且回收利用。这不但在生产过程中安全无污染，无“三废”排放，还充分循环利用资源，进一步降低生产成本。
[0021]4、本发明在生产过程中，生产设备常用简单，操作简便且易于控制，因此生产安全又降低生产成本。
[0022]采用本发明方法生产出的产品，具有抗肿瘤、抗菌、提高机体抗氧化能力、免疫力等活性，可广泛应用于医药、保健等行业中。
四、【具体实施方式】
[0023]下面结合【具体实施方式】，进一步说明本发明。
[0024]实施例1
[0025]—种用萝卜籽柏生产高纯度莱菔素的方法，具体方法步骤如下:
[0026](I)制备4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷粗提液
[0027]以萝卜籽柏为原料，按照萝卜籽柏的质量:体积分数为50%乙醇溶液的体积之比为Ikg: 6L的比例，将萝卜籽柏均匀分散于乙醇溶液中，在温度为70°C的条件下，进行第一次浸提，浸提lh。第一次浸提完成后，将浸提混合物栗入压滤机进行压滤，分别收集第一次浸提清液和第一次浸提残渣。对于收集的第一次浸提残渣，在同等条件下，进行第二次浸提和压滤，分别收集第二次浸提清液和第二次浸提残渣。对于收集的第二次浸提清液，与收集的第一次浸提清液合并后，再栗入截留分子量为600Da的纳滤器中，在0.25MPa下，进行第一次纳滤分离，直至纳滤截留液的体积为原体积的20%时止，分别收集第一次纳滤滤过液和第一次纳滤截留液。对于收集的第一次纳滤截留液，补充去离子水至原体积，在同等条件下，进行第二次纳滤分离，直至第二次纳滤截留液的体积减少为原体积的5%时止，分别收集第二次纳滤滤过液和第二次纳滤截留液，并将两次收集的纳滤滤过液合并。对于合并的纳滤滤过液即为4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷粗提液，用作下一步处理。
[0028](2)制备高纯度4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷浓缩液
[0029]第⑴步完成后，将市售制备色谱填料(SPS C18 1ym色谱填料)，分散于无水乙醇中，并装配成制备色谱柱，备用。再按照制备色谱柱:第(I)步合并的纳滤滤过液的体积比为1: 3的比例，将合并的纳滤滤过液以流速为制备色谱柱体积的3倍/小时的速度，栗入制备色谱柱中，进行吸附上样。上样结束后，在检测波长为280nm，体积分数为30%的乙醇溶液为流动相，流动相流速为制备色谱柱体积的3倍/小时的条件下，将流动相栗入制备色谱柱中，进行洗脱制备。然后待流动相栗入ISmin时，开始进行收集4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷色谱流出液，待流动相栗入25min时，结束收集4-甲基亚磺酰基_3_ 丁烯基硫苷色谱流出液，分别收集4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷色谱流出液、制备色谱洗脱液和制备色谱柱。对于收集的4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷色谱流出液，栗入反渗透浓缩器中，在0.15MPa下，进行第一次反渗透浓缩，直到第一次反渗透截留液的体积减少至原体积的10%为止，分别收集第一次反渗透透过液和第一次反渗透截留液。对于收集的第一次反渗透截留液，加入去离子水，补充至原体积，在同等条件下，再进行第二次反渗透浓缩，直到第二次反渗透截留液的体积减少至原体积的5%为止，分别收集第二次反渗透透过液和第二次反渗透截留液。对于收集第二次反渗透截留液，即为高纯度4-甲基亚磺酰基-3- 丁烯基硫苷浓缩液，纯度为95.6%。
[0030](3)制备反应-分离耦合柱式反应器
[0031]第(2)步完成后，以市售黑芥子酶为原料，按照黑芥子酶的质量:缓冲溶液的体积比为Ig: 6mL的比例，将黑芥子酶分散于缓冲溶液中，超声波处理1min后，进行过滤，分别收集过滤液和滤渣。对于收集的过滤液，用于制备固定化黑芥子酶。其中，所述的缓冲溶液为pH 5.0的醋酸-醋酸钠缓冲溶液。
[0032]将市售已活化的胺基型树脂(WA30树脂)，按照胺基型树脂的质量:收集的过滤液的体积:丙二醛质量浓度为18%的丙二醛溶液的体积比为Ig: 3mL: 0.7mL的比例，先将胺基型树脂加入过滤液中，浸泡2h，再加入丙二醛溶液，在温度为40°C下进行固定化酶反应3h。反应完成后通过抽滤机进行抽滤，分别收集抽滤渣和抽滤液。对于收集的抽滤渣，用2倍于抽滤渣体积的去离子水对抽滤渣进行洗涤，分别收集洗涤渣和洗涤液。对于收集的洗涤渣，即为制备出的固定化黑芥子酶，4°C保存备用。
[0033]将制备得到的固定化黑芥子酶装入夹套保温层析柱中，用与固定化黑芥子酶等体积的去离子水进行反冲，然后升温至25°C，就得到固定化黑芥子酶反应柱。将市售已活化的吸附