和 0.08 g/L FeSO4.7H20，调整 pH 至 2.5，灭菌后接入米根霉孢子悬浮液，进行种子液培养；
2)将3L总糖含量为60g/L木薯粉液化液加入5L发酵罐中，灭菌后按10%的接种量接入经步骤I)培养好的种子液，并向其中加入分消的碳酸钙40g/L ;
3)于35°C，1vvm的通气比率、400 rpm的搅拌转速下进行发酵，待发酵38h，将木薯粉糖化液和糖化酶作为流加液，以20mL/h的流加速度向发酵罐内流加，流加液体积的总加入量为300mL，其中，流加液中淀粉糖化液的总糖为50g/L，糖化酶的酶活为6.7 X 15 U/mL。
[0023]其中，所述的木薯粉液化液的具体制备过程:木薯粉与水以8% (w/v)的比例混合成糊状后，加热到70-80°C，加入耐高温淀粉酶，加酶量为800?1000 U/g干淀粉质原料，保温10 -20min后继续加热到90_95°C，碘检不变色后继续加热到100°C煮沸5?10 min，然后趁热经过3-4层纱布过滤，滤液冷却后加水调整总糖浓度为60g/L和20g/L。
[0024]木薯粉糖化液的具体制备过程为:将木薯粉液化液加热至50— 60°C，加入糖化酶，保温4-5h，无水酒精检验无糊精存在后，继续加热至70-80°C，保温10-30min，冷却后加水调整总糖浓度为50g/L。
在此条件下，发酵55h，产酸为39g/L，残糖为2.8g/L。
[0025]实施例3
一种发酵制备富马酸的工艺，包括以下步骤，
1)将总糖含量为20g/L的脱胚玉米粉与玉米粉液化液加入种子罐中，同时添加2g/L尿素，0.5 g/L KH2PO4，0.4 g/L MgSO4.7Η20，0.08 g/L ZnSO4 和 0.08 g/L FeSO4.7H20，调整pH至2.5，灭菌后接入米根霉孢子悬浮液，进行种子液培养；
2)将3L总糖含量为50g/L脱胚玉米粉与玉米粉液化液加入5L发酵罐中，灭菌后按15%的接种量接入经步骤I)培养好的种子液，并向其中加入分消的碳酸钙40g/L ;
3)于35°C，1vvm的通气比率、400 rpm的搅拌转速下进行发酵，待发酵35h，将脱胚玉米粉与玉米粉糖化液和糖化酶作为流加液，以22mL/h的流加速度向发酵罐内流加，流加液加入的总体积为400mL，其中，流加液中脱胚玉米粉与玉米粉糖化液的总糖浓度为60g/L，糖化酶的酶活为6.0X 15 U/mL。
[0026]其中，所述的脱胚玉米粉与玉米粉液化液的具体制备过程:脱胚玉米粉和玉米粉以1:1进行混合后与水以12% (w/v)的比例混合成糊状后，加热到70-80°C，加入耐高温淀粉酶，加酶量为800?1000 U/g干淀粉质原料，保温10 -20min后继续加热到90_95°C，碘检不变色后继续加热到100°C煮沸5?10 min，然后趁热经过3-4层纱布过滤，滤液冷却后加水调整总糖浓度为50g/L和20g/L。
[0027]脱胚玉米粉与玉米粉糖化液的具体制备过程为:将脱胚玉米粉与玉米粉液化液加热至50—60°C，加入糖化酶，保温4-5h，无水酒精检验无糊精存在后，继续加热至70-80°C，保温10-30min，冷却后加水调整总糖浓度为60g/L。
在此条件下，发酵55h，产酸为37.5g/L，残糖为2.4g/L。
[0028]对比例
1)将总糖含量为20g/L的脱胚玉米粉液化液加入种子罐中，同时添加2g/L尿素，0.5g/L KH2PO4，0.4 g/L MgSO4.7Η20，0.08 g/L ZnSO4 和 0.08 g/L FeSO4.7H20，调整 pH 至
2.5，灭菌后接入米根霉孢子悬浮液，进行种子液培养；
2)将3L总糖含量为80g/L脱胚玉米粉液化液加入5L发酵罐中，灭菌后按15%的接种量接入经步骤I)培养好的种子液，并向其中加入分消的碳酸钙40g/L ;
3)于35°C，1vvm的通气比率、400 rpm的搅拌转速下进行发酵，待发酵68h，产酸为30g/L，残糖为 15.4g/L ο
[0029]上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种发酵制备富马酸的工艺，其特征在于，包括以下步骤， 1)将淀粉液化液加入种子罐中，同时添加尿素和无机盐，调整PH至2.5-3.5，灭菌后接入米根霉孢子悬浮液，进行种子液培养； 2)将淀粉液化液加入发酵罐中，灭菌后接入经步骤I)培养好的种子液，并向其中加入分消的碳酸钙； 3)待发酵32-38h，将淀粉糖化液和糖化酶作为流加液以20-25mL/h的流加速度向发酵罐内流加，流加液的总加入体积为初始发酵体积的10%-15%，其中，流加液中淀粉糖化液的总糖浓度为60-80g/L，糖化酶的酶活力为4.5X 105-6.7 X 15 U/mL。2.根据权利要求1所述的一种发酵制备富马酸的工艺，其特征在于，所述的发酵罐中淀粉液化液的初始总糖浓度为40-60g/L。3.根据权利要求1所述的一种发酵制备富马酸的工艺，其特征在于，所述的淀粉液化液的具体制备过程:淀粉质原料与水以8-12%的比例混合成糊状后，加热到70-80°C，加入耐高温淀粉酶，加酶量为800?1000 U/g干淀粉质原料，保温10 -20min后继续加热到90-950C，碘检不变色后继续加热到100°C煮沸5?10 min,然后趁热经过3_4层纱布过滤，滤液冷却后加水调整糖度。4.根据权利要求3所述的一种发酵制备富马酸的工艺，其特征在于，淀粉糖化液的具体制备过程为:将淀粉液化液加热至50— 60°C，加入糖化酶，保温4-5h，无水酒精检验无糊精存在后，继续加热至70-80°C，保温10-30min，冷却后加水调整糖度。5.根据权利要求3或4所述的一种发酵制备富马酸的工艺，其特征在于，所述的淀粉质原料选自可溶性淀粉、玉米粉、脱胚玉米粉、木薯粉之中的一种或2种的组合。6.根据权利要求1所述的一种发酵制备富马酸的工艺，其特征在于，种子罐中淀粉液化液的总糖浓度为25-25g/L。7.根据权利要求1所述的一种发酵制备富马酸的工艺，其特征在于，尿素的添加量为2-2.5g/L。8.根据权利要求1所述的一种发酵制备富马酸的工艺，其特征在于，所述的无机盐为KH2PO4，MgSO4.7H20，ZnSO4 和 FeSO4.7H20，浓度分别为 0.5-0.6 g/L，0.4-0.55 g/L，0.08—0.15 g/L，0.08—0.09 g/L。9.根据权利要求1所述的一种发酵制备富马酸的工艺，其特征在于，种子液接种于发酵罐的接种量为10-15%。
【专利摘要】本发明公开一种发酵制备富马酸的工艺，将淀粉液化液加入种子罐中，同时添加尿素和无机盐，调整pH至2.5-3.5，灭菌后接入米根霉孢子悬浮液，进行种子液培养；将淀粉液化液加入发酵罐中，灭菌后接入种子液，并加入分消的碳酸钙；待发酵32-38h，将淀粉糖化液和糖化酶作为流加液以20-25mL/h的流加速度向发酵罐内流加，流加液的总加入体积为初始发酵体积的10%-15%，流加液中淀粉糖化液的总糖浓度为60-80g/L；此工艺既避免了高初糖浓度对富马酸发酵的抑制，又解决后期因米根霉自身糖化酶活力降低导致糖耗低的问题，提高了菌种的利用率，糖酸转化率和设备利用率，降低了生产成本。
【IPC分类】C12P7/46
【公开号】CN105177064
【申请号】
【发明人】王莉
【申请人】王莉
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年8月31日